Studiul bacteriologic al apei
Apa este unul dintre principalii factori ai mediului extern.
Este necesar pentru construirea celulelor corpului. Fără apă în celule, procesele chimice și fiziologice nu pot continua normal. Fără apă, este imposibil să se ia măsuri pentru îmbunătățirea sanitară a așezărilor, să se mențină curățenia în locuințe, să se pregătească alimente etc.
Împreună cu aceasta, apa poate fi un factor în transmiterea agenților patogeni de boli infecțioase.
Apa contaminată poate juca un rol în apariția și răspândirea infecțiilor intestinale, tularemie, hepatită infecțioasă, febra Q, amoebiaza, infecții fungice.
Apa nu trebuie să conțină microorganisme patogene.
Pentru a evalua calitatea apei potabile, se folosesc indicatori cantitativi cum ar fi numărul, numărul de indici, numărul microbian total.
apă potabilă bacteriologică trebuie să îndeplinească următoarele cerințe: numărul total de bacterii în 1 ml de apă nediluat nu mai mult de 100, în cazul în care - indicele (numărul de bacterii coliforme în 1 litru de apă) de cel mult indivizii P3 coli - titru (număr de apă conținând 1 bacterie de Escherichia coli) - 300 ml.
Titrul de potasiu în apa de băut este determinat prin metoda filtrului cu membrană și prin metoda de fermentare cu două sau trei faze.
Alegerea metodei este determinată de cantitatea și calitatea apei studiate.
Când studiați apă curată și bine filtrată, este mai convenabil să folosiți metoda cu membrană.
În studiul apei care conține substanțe coloidale și impurități străine, care împiedică filtrarea, ele utilizează o metodă de fermentație.
La determinarea titrului de E. coli prin metoda cu membrană, este necesar să se efectueze trei etape: prepararea filtrelor cu membrană, pregătirea unui aparat de filtrare, filtrarea și cultivarea culturilor.
1. Pregătirea filtrelor cu membrană. Pentru filtrarea apei selectate filtrele cu membrană de nitroceluloză cu pori mici №3 (fără defecte) și plasate într-un pahar refractar chimic este încălzit la 50 - 60 grade Celsius cu apă distilată. După aceea, apa din sticlă trebuie încălzită la căldură scăzută până când se fierbe. Filtrele sunt fierte de trei ori timp de 15 minute. După prima și a doua fierbere, apa din sticlă este drenată și înlocuită cu apă proaspătă. După ultimul fierbere, apa nu se scurge și filtrele rămân în ea până când sunt consumate.
2. Pregătirea aparatului de filtrare. Pâlnia și masa aparatului de filtrare Zeitz sunt sterilizate prin fierbere sau ardere. Un filtru cu membrană este așezat pe masa răcită a aparatului, calcinat în foc și răcit cu pensete cu vârfuri netede. Pe masă cu un filtru instalați și fixați partea superioară a dispozitivului - o pâlnie.
3. Filtrarea apei și cultivarea culturilor. Volumul investigat de apă este turnat steril în pâlnia aparatului de filtrare și se formează un vid în vasul de recepție cu ajutorul unei pompe.
Bacteriile din proba de apă sunt reținute pe filtru.
La sfârșitul filtrării, scoateți pâlnia de filtrare, scoateți ușor filtrul cu o pensetă sterilă și transferați-l într-un vas Petri cu un mediu nutritiv.
Creșterea unui filtru pe unul sau alt mediu nutritiv ne permite să izolam un anumit grup de microorganisme.
Pentru a detecta filtrul Escherichia este suprapus pe agar Endo sau pe un alt mediu (mediu Ploskirev), utilizat pentru detectarea microbilor din acest grup.
Plăcile Petri sunt așezate în jos într-un termostat timp de 24 de ore la 37 grade Celsius. La sfârșitul cultivării, filtrele sunt scanate folosind o lupă.
Rezultatul este considerat negativ dacă nu există colonii roșii strălucitoare pe agar Endo, ceea ce înseamnă că nu există E. coli în acest volum de apă.
În prezența unor colonii roșii cu luciu metalic (caracteristice pentru coloniile de Escherichia coli), coloniile fac frotiuri și le pătrund în conformitate cu metoda Gramm.
În prezența tijelor gram-negative cu dimensiuni medii care nu formează spori, coloniile sunt analizate în eprubete cu medii solubile în glucoză Eukman. Culturile sunt plasate într-un termostat timp de 24 de ore la 43 de grade (temperatura la care germenii secretați de animalele cu sânge cald germinează).
Turbiditatea mediului nutritiv și prezența formării de gaz indică prezența unui E. coli într-un volum dat de apă studiat.
Determinarea cantitativă a metodei de fermentare se realizează în trei etape.
În prima zi, în funcție de gradul de contaminare, se efectuează însămânțarea diferitelor volume de apă investigate pe mediul Bulir cu flotoare.
Volumele de apă sunt invers proporționale cu gradul de contaminare.
De regulă, se înmulțesc patru volume descrescătoare de apă de zece ori (de exemplu: 1, 0,1, 0,01, 0,001 ml).
Culturile supraviețuiesc 24 de ore la 43 de grade Celsius.
În a doua zi după îndepărtarea culturilor de la termostat, acele baloane în care culoarea indicatorului în mediul lui Bulir sa schimbat și a acumulatului de gaz acumulat în flotoare. Din aceste baloane, ele sunt ecranate în vase Petri cu agar Endo. Culturile sunt plasate într-un termostat timp de 24 de ore la 37 de grade.
În cea de-a treia zi, culturile sunt îndepărtate din termostat și coloniile crescute examinate macroscopic. Prezența coloniilor roșii strălucitoare cu luciu metalic indică prezența E. coli în acest volum de apă.
Pentru confirmarea din colonia selectată, se face o frotiu și se târnă într-un tub cu mediu Bulir.
Frotiul este colorat de Gram și microscopat, iar tubul de testare este plantat într-un termostat timp de 24 de ore la 43 de grade.
Prezența barelor gram-negative în micro preparat, schimbarea culorii mediului Bulir și prezența gazului în flotor sunt dovezi ale prezenței E. coli.
La determinarea numărului microbian, pipetele sterile sunt luate și așezate în plăci Petri cu MPA 1 ml; 0,1 ml (sau mai multă diluție) a apei de testare.
Producerea de volume diferite se obține prin diluarea apei de testare cu apă sterilă. Dintr-un test, cel puțin două diluții sunt semănate. Fiecare volum de apă este luat printr-o pipetă separată sterilă.
Culturile sunt plasate într-un termostat la 37 de grade timp de 24 de ore. Apoi se numără coloniile crescute pe mediul nutritiv din vas. Coloniile sunt numărate folosind o lupă pe fundal negru. Pentru a obține numărul de colonii în 1 ml de apă, numărul obținut trebuie înmulțit cu diluția. Se rezumă toate rezultatele obținute și se afișează valoarea medie.
Atunci când studiază flora bacteriană în corpurile de apă deschise, metoda plăcilor de murdărie poate fi utilizată pentru a determina efectul oricărui contaminant.
Metoda se bazează pe proprietatea microorganismelor care se atașează la suprafața sticlei. Această metodă vă permite să obțineți informații despre relațiile ecologice ale microorganismelor, răspunsul acestora la schimbările din mediul extern.
Pentru a obține plăcuțele de zgâriere, diapozitivele degresate cu atenție sunt fixate într-un fel, la anumite intervale pe cablu. Cablul care transporta geamul, cu o sarcină la capătul inferior și un flotor pe partea de sus, este coborât în iaz.
Ochelarii trebuie să fie numerotați, iar în jurnal este necesar să se înregistreze ce numere de sticlă corespund orizontului.
Instalarea cu sticla în rezervor se păstrează 3- 4 zile, după care a fost recuperat din apă și cu atenție scoase din sticlă. Ochelari de vedere au fost uscate și fixate cu un amestec de Nikiforov (volume egale de etanol și eter) sau metanol, se colorează cu Gram, și alte metode complexe de colorare pentru detectarea bacteriilor de fier și sulf și alte microorganisme.
Micro-preparatele sunt studiate folosind un microscop de imersie, ceea ce face posibilă caracterizarea compoziției speciilor de microfloră în diferite orizonturi ale rezervorului.
Atunci când se contabilizează grupuri fiziologice de bacterii inoculate pe mediu nutritiv pentru detectarea bacteriilor reducătoare de sulfat, bacteriile implicate în procesele de amonificare, nitrificare și denitrificare. Produc culturi pentru detectarea aerobilor și anaerobelor obligatorii implicate în fixarea azotului și descompunerea celulozei.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: