Metode de cultivare a virușilor. Culturile de celule
Parazitizând la nivel genetic ca molecule de ND, virușii lipsiți de sisteme de schimb de energie nu se pot reproduce, ca și bacteriile, pe medii artificiale de nutrienți. Procesul de reproducere (reproducere) se datorează în întregime metabolismului unei game limitate de organisme și celule sensibile, care în virologie se numesc maeștri.
Virusurile crescute în culturi de celule sau țesuturi, ouă de pui vechi 7-13 zi și animale de laborator, printre care șoarecii albi cel mai frecvent utilizate, de preferință ventuzele 1-4-zi, iepuri, hamsteri sirieni și dihori.
Cultura de celule - este cultivat in vitro (in afara corpului), în medii speciale, diverse animale și celule de țesuturi umane, inclusiv celule albe din sânge, și păstreze cota lor și susceptibilitatea la anumite virusuri. Cerința principală atunci când se lucrează cu culturi de celule și viruși - respectarea strictă a sterilității, care se realizează prin box aseptic virusologic.
Pentru celulele de cultivare (tesuturi), folosind diverse medii de cultură (199 sau ac), care conțin un set complet de substanțe le necesare (aminoacizi, purine, pirimidine, carbohidrați, vitamine și altele.) Suplimentat cu ser bovin.
Există multe tipuri de culturi celulare: 1) culturi primare capabile de pasaj de 5-10 ori; 2) transplantabile nerestricționate; 3) semi-transponate, care sunt celule morfologic omogene ale plămânilor și rinichilor unei persoane, care păstrează un set diploid de cromozomi în 50 de pasaje.
Toate aceste tipuri de celule sunt crescute la o temperatură de 36-37 ° C, randament ultratermostat în decurs de 5-7 zile într-o formațiune monostrat bună a aderat la pereții saltelelor, fiole și eprubete. Controlați creșterea celulelor sub o creștere mică a microscopului, începând cu 3-4 zile.
culturi de celule primare. Sursa de culturi primare de celule sunt posedă potențial înalt de creștere a păsărilor de țesut embrionic (în principal fibroblaști de pui), animalele experimentale, maimuțe, dar cele mai multe dintre ele sunt tesut tripsinizate preparate fetusi avortat umani 8-14 săptămâni vechi. Pentru acest țesut fetal fragmentați cu foarfece în bucăți mici de 2-4 mm și 2-3 ori spălate liber de sânge cu soluție salină tamponată Hanks până când lichidul este aproape transparent.
Apoi, pentru distrugerea pieselor tisulare ale matricei extracelulare încălzită la soluție se toarnă 32-37 ° C, 0,25% din tripsină și un mixer pentru suspensie agitator electromagnetic se agită timp de 10-30 min. Prima porție de celule tripsinizate este îndepărtată. Potrivit pentru celulele de cultură virale, se obțin după tripsinizare repetată. În plus lichid pentru a separa tufe mari de fibre de țesut conjunctiv și conținând de celule a fost filtrat prin tifon, centrifugat la 800-1000 rot / min timp de 5 min. Supernatantul a fost decantat, precipitatul se spală cu soluție Hanks și diluată cu mediu 199 (sau ac) pentru a obține 1 ml 100 000-400 000 celule. suspensie celulară este distribuită în flacoane de 1 ml sau 20-100 ml saltele din sticlă, închis etanș cu dopuri de cauciuc și plasate într-un incubator la 37 ° C Saltele sunt aranjate într-o poziție și tuburi -under unghi de 5-10 ° în tăvi speciale orizontale. Atașând la sticlă, celulele formează un monostrat timp de câteva zile.
Culturile celulare de transplant. Este stabil, sau, așa cum sunt adesea numite, imortalizată linie de celule (nemuritoare), replicare autonom, cum ar fi bacteriile. Preparat din țesuturi umane normale (amnionic - FL, A-0, A-1; rinichi - Rh, 1SHCH, celule diploide); animale și tumorile maligne (matki- cervical HeLa, laringe (rinichi de maimuță - - Vero, MS, BSC-1 PC și rinichi sale cornee -SIRK iepure) - Hep-2, oral - KB, măduvă osoasă umană - D-6 și altele), care sunt cultivate prin pasaje succesive pe medii nutritive timp de mai multe decenii.
Recomandată de vizitatorii noștri:
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: