Diagnosticarea genetică are un viitor mare în diagnosticarea expresă a bolilor infecțioase. În stadiile incipiente ale infecției, când AT în organism nu este încă dezvoltată, diagnosticul se bazează pe identificarea lui Ar, incluzând genele specifice ale agentului patogen. Pentru această metodă de detecție se utilizează metode de hibridizare și amplificare a ADN-ului.
Metodele de detectare a agenților patogeni de ARN și ADN au fost găsiți în primul rând în diagnosticul infecțiilor virale. Cu toate acestea, testul dezvoltate - sisteme de identificare a unor bacterii pretențioase (de exemplu Legionella, Chlamydia), precum și pentru a identifica koloniyNeisseriagonorrhoeae, Haemophilusinfluenzaetipab, grupa B streptococi, enterococi și micobacterii.
Hibridizarea acizilor nucleici.
Cele mai comune metode de hibridizare a acidului nucleic. Metodelor de principiu datorită capacității ADN (și ARN) conecta în mod specific cu fragmente complementare create în mod artificial spiralele ADN (și ARN) sau enzime marcate izotopic. În viitor, probele sunt examinate prin diverse metode (de exemplu, ELISA).
Metoda de hibridizare în soluții oferă cele mai bune rezultate. Aplicarea pe scară largă a metodei este împiedicată de problema lanțurilor neconectate de acizi nucleici.
Metoda de hibridizare pe bază solidă și modificarea sa de tip sandwich este mai frecventă. Membranele de nitroceluloză sau nailon servesc drept bază solidă. Reactivii nelegați sunt îndepărtați prin spălare repetată.
Reacția în lanț a polimerazei.
Baza metodei PCR este formarea multiplă a copiilor unei regiuni specifice de ADN catalizată de ADN-polimerază. Inițial, este efectuată recoacerea - separarea termică a moleculei de ADN dublu catenar în lanțuri separate. Mediul este apoi răcit și sunt introduși primeri (primeri) complementari la secvențele de nucleotide ale ambelor lanțuri. oligunukleotidy constând din 10 - - grunduri sintetice utilizate pentru a începe reacția de 20 de nucleotide (de exemplu, deoxinucleotid trifosfați) care interacționează cu capetele secvențelor și a secvenței de 50 - 1000 baze. Apoi, mediul se face polimeraza termostabilnuyutag- care începe formarea de copii secundare ale ADN-ului, și apoi molecula de ADN dublu catenar rezultat se încălzește din nou. Lanțurile individuale sunt răcite, primerele sunt introduse și procedura de încălzire și răcire este repetată din nou; deoarece eticheta-polimerază este termostabilă, nevoia de aplicare repetată nu este disponibilă. PCR permite obținerea unor cantități mari de fragment ADN studiat chiar dacă numai cercetătorului îi este disponibilă o singură moleculă de ADN genomic inițial. Identificarea copiilor ADN se efectuează prin electroforeză. Metoda PCR este, de asemenea, baza ADN - identificarea, oamenii descendență identifica gene si alte boli genetice.
Identificarea virusului Ag.
În prezent existau deja kituri comerciale pentru detectarea anumitor agenți patogeni, permițându-le să identifice în termen de 5 - 10 minute. Pentru a identifica Ar pe faza solidă, AT-urile cunoscute sunt colectate și serul care conține Ar este adăugat; După incubare, argonul nelegat este decantat, sistemul este spălat și sunt introduse AT-uri specifice pentru AT sorbate. Procedura de incubare și spălare, un substrat cromogen se face, un rezultat pozitiv este fixat la schimbarea sistemului de vopsea.
Aceasta este o metodă foarte specifică care permite identificarea genomului unui virus după hibridizarea lui prin molecule ADN complementare. Enzimele și izotopii sunt utilizați ca markeri. Metoda determină capacitatea ADN-ului viral de a hibridiza cu marcată cu ADN-ul complementar marcat; Specificitatea metodei este direct proporțională cu lungimea lanțului complementar. O metodă promițătoare este hibridizarea acizilor nucleici nucleici. Pentru producerea reacției ADN marcat este aplicată țesutului biopsie (inclusiv sau închise în blocuri de parafină fixate în formol) și interacțiunea înregistrate cu ADN complementar. Metoda este utilizată pentru a detecta virușii de herpes simplex, papilomul uman, Epstein-Barr et al.
(paginile 137-138, 268-271, 276-277)
Articole similare
-
Jade (pisici, pisici) descrierea bolii, simptome, diagnostic, tratament
-
Diabetul zaharat la câini, boala de sinteză, diagnostic și tratament
Trimiteți-le prietenilor: