Necesitatea crescândă a preparatelor probiotice și a produselor alimentare necesită dezvoltarea unor noi medii de producție eficiente și necostisitoare pentru acumularea de bifidobacterii din biomasă. Mediile de producție trebuie să asigure o rată ridicată de multiplicare bacteriană, împreună cu o durată minimă a ciclului lor de creștere, pentru a obține o concentrație ridicată de celule microbiene viabile pe unitatea de volum a mediului nutritiv (cel puțin 10 8 cfu / ml). Materiile prime pentru prepararea unor astfel de suporturi trebuie să fie accesibile, ieftin, tehnologic.
Bifidobacteriile în alocarea primară sunt anaerobe stricte. În prezența dioxidului de carbon, acestea pot fi tolerante la oxigen. În cultivarea în laborator, aceste microorganisme dobândesc capacitatea de a se dezvolta în prezența unei anumite cantități de oxigen și în medii cu conținut ridicat de nutrienți - să crească în condiții complet aerobe. Sensibilitatea la oxigen în multe tulpini de bifidobacterii variază, ceea ce se datorează diferențelor în mecanismul de fermentație.
Reproducerea bifidobacteriilor se datorează unui număr mare de factori de creștere. Multe tipuri necesita baze biotină, acid pantotenic, cisteină, riboflavină, purinice și pirimidinice, peptide, aminosugars, coenzima A, oligozaharide, unii acizi grași nesaturați, și altele. Anumite tulpini necesita dioxid de carbon, amoniac, histidină. Dintre aminoacizii, sunt necesare lizină, prolină, serină, alanină, aspartic și acid glutamic.
În mediile sintetice, bifidobacteriile pentru creștere necesită fier, magneziu, fosfați, cloruri de potasiu și sodiu, în unele cazuri mangan.
Bifidobacteria sunt cultivate, creând condiții anaerobe sau de scădere a potențialului redox al mediului, în lapte, lapte hidrolizat și hidrolizatul cazeină precum bulionul hepatic suplimentat cu substanțe de creștere (autolizat de drojdie, extract de porumb, cisteină, etc.). Pe medii dense de nutrienți bifidobacteriilor forma o varietate de colonie plat, emisferică, lucios, strans, banked, au un centru mai întunecat, etc. Culoarea coloniilor variază de la alb și gri până la maro închis. Coloniile se aseamănă adesea o formă de hrișcă boabe sau o piramidă triunghiulară trunchiat, unele colonii media sunt în formă de linte.
În prezent, pentru acumularea biomasei de Bifidobacterium longum se utilizează medii nutritive de diferite compoziții. Se servesc hidrolizatele bază și extracte de origine vegetală sau animală: mediu Blaurock bazat pe bulion de ficat, lactaza mediu mediu extract de porumb pe bază de porumb bazat pe extractul de carne obținută.
Pentru cultivarea bifidobacteriilor, mediul hepatic-cistein (mediul Blauroc) este considerat a fi larg răspândit.
Pentru a pregăti miercuri Blaurock 500 g ficat de vită, eliberat de tendoane, carne tocată, se toarnă cantitate dublă de apă și refluxat timp de 2 ore, apoi se filtrează. Filtratul a fost ajustat cu apă distilată până la 1 000 cm și este format din 10 g peptonă, 10 g de lactoză, 100 mg de clorură de cisteină 5 g și agar NaS1 1-2 de pH 6,8-7,0. Cu toate acestea, acest mediu este scump, conține componente limitate, prin urmare nu este adecvat pentru uz industrial.
In industria produselor lactate pentru cultivarea Bifidobacterium recomandat mediu hidrolizată și lapte - GM mediu conținând hidrolizatul adresate, NaCI, lactoză, L-cisteină, peptonă, agar-agar și apă. Mediul nutritiv pentru hidrolizat-lapte se prepară după cum urmează:
Prepararea laptelui hidrolizat. Normal sau grăsime din lapte redus (lapte degresat) este adus la fierbere și se fierbe timp de 2 min, se răcește la 14oC, pH 7,9 soluție de NaOH ajustat 10-20%.
Se adaugă pancreatina la o viteză de 1 g / dm 3. diluată anterior într-o cantitate mică de apă încălzită la 44 o C, se amestecă și se pune într-un termostat la 40 o C într-un dop de bumbac. În timpul primelor două ore de amestecare și reglarea pH-ului la 7,9, efectuați la fiecare 30 de minute, în următoarele două ore la fiecare oră. După 4 ore de la începutul hidrolizei, se adaugă 1-2% cloroform, se acoperă cu un dop din cauciuc și se pune un termostat. După 4 ore, se ajustează pH-ul la 4,4-30% cu soluție de acid acetic, se fierbe, se agită, timp de cel puțin 15 minute, se filtrează printr-un filtru de hârtie. Hidrolizatul finit ar trebui să conțină 200-300 mg /% azot amină, transparent, reacția acestuia fiind neutră sau slab acidă.
Prepararea mediului de lapte hidrolizat. Se diluează laptele hidrolizat cu apă potabilă într-un raport de 1: 1. O cantitate mică de hidrolizată diluat topit agar într-o cantitate de 2,5 g per 1 dm 3 mediu. Suma rămasă din hidrolizatul s-a adăugat 28 g de peptonă și 3,5 g de clorură de sodiu, amestecul este încălzit la o temperatură de 80 ° C, și apoi se amestecă cu agar-agar topit. Amestecul a fost ajustat la pH 7,5, refluxat timp de 15 minute, lăsat să se așeze, decantată din precipitat, fără filtrare, formată din apă distilată fierbinte până la un volum predeterminat și adăugat la acesta 10,0 g de lactoză, și 0,15 g de cisteină. Miercuri turnat în tuburi de 10 cm coloana 3 și sterilizate la 112 ° C timp de 30 min, cu preîncălzire prin autoclavă cu abur timp de 30 minute. PH-ul mediului finit este de 7,1-7,3.
Mediul de hidrolizat-lapte este utilizat pe scară largă în Ucraina și în alte țări CSI pentru a crește biomasa bifidobacteriilor. Acest mediu furnizează bifidobacterii într-o concentrație de 10 8-109 cfu / ml. Este foarte simplu de fabricat. În același timp, SMS-ul are o serie de deficiențe. Principala este creșterea lentă a bifidobacteriilor. Deci, atunci când sunt cultivate pe acest mediu, bifidobacteriile ating o concentrație maximă după 18-24 ore de cultivare.
Pentru izolarea și cultivarea Enterococcus faecium, există un număr de medii selective :. de sânge de bază de agar azidă azidodekstrozny bulion, agar KF-streptococ, M-agar enterococii streptococic selectiv agar etc. Pe agar cu sânge de colonie enterococi mici, de culoare crem sau alb, neted cu netedă, care diferă în tipul de hemoliză. Această tulpină - homofermentative, gaz nu formează produsul final al fermentării glucozei și a altor glucide - acid lactic. Enterococii pronunțat proprietăți redutsiruya: acestea sunt decolorate și lapte albastru de metilen turnesol, reducyruut nitrați în nitriți.
Azotul-glucoză este utilizat pentru cultivarea Enterococcus faecium. Mediul nutritiv este destinat să izoleze și să cultive enterococii izolați din materialul de testare. Mediul este selectiv și oferă o creștere preferențială a enterococilor. Supă de azidă-glucoză se prepară după cum urmează: Prepararea MPB. 500 g de carne dezosată proaspete tocate mărunt, gras și tendonul turnat într-o tigaie smalț 1 litru de apă de la robinet încălzită la 50 ° C și se lasă să se infuzeze timp de 12 ore la temperatura camerei sau 1 oră la 50-55 ° C, Carnea stors, extractul este filtrat printr-un tifon cu un strat de vată, fiert timp de 30 minute pentru coagularea proteinelor coloidale și filtrat de două ori (prima dată printr-un tifon de bumbac, al doilea - printr-un filtru de hârtie). Filtru completat cu apă până la 1 L, turnat în balon, sigilate cu dopuri de bumbac și sterilizate la 120 ° C timp de 20 minute (Plosca tub închis la capacele superioare ale hârtiei). dopuri pentru urechi trebuie sa fie solide, deoarece acestea sunt un filtru împiedicând pătrunderea bacteriilor din aer după sterilizare. Extracția de carne poate fi utilizată în orice moment pentru a pregăti mediile corespunzătoare. Dacă acestea sunt pregătite imediat, atunci sterilizarea preliminară nu este necesară. Dacă se dorește să aibă o carne nutritivă foarte mare bulion de carne în timpul perfuziei se adaugă apă și se acidulează ușor pepsină bulion cu acid clorhidric. Pepsinul hidrolizează suplimentar compușii proteici ai cărnii, iar cantitatea de nutrienți absorbită de bacterii crește. Carnea poate fi înlocuită cu extract de carne, luându-i 5 g pe 1 litru de mediu.
Pentru a prepara BCH la 1 L bulion s-a adăugat 5,10 g de peptonă (peptonă - primul produs de hidroliză proteină cu o greutate moleculară mare), pentru a crește conținutul caloric al mediului, și 5 g de clorură de sodiu, în scopul de a crea o activitate osmotică. Mediul este încălzit până la dizolvarea peptonă, amestecând constant. Apoi, să stabilească un mediu de reacție neutră sau ușor alcalină, adăugând soluție 20% Na2CO3 (albăstreală pentru rufe la umed roșu hârtie de turnesol, mai arată fenolftaleinei alcalină - adăugarea acestuia la mediu într-o culoare vas de porțelan roz apare). Este convenabil să utilizați indicatorul bromotimolblau. 1-2 picături făcându-l cu o baghetă de sticlă într-un vas de porțelan și bulion adăugat picătură. Verde neutru bromtimolblau mediu întunecat într-un acid - galben, alcalin - albastru. După setarea mediului de reacție a fost din nou timp de 5-10 minute și proteinele pliate încălzite schimbând reacția a fost filtrată printr-o hârtie de filtru fără a clarifica bulionul sau clarificate proteine sale. BCH transparent în flacoane, închise cu dopuri de bumbac și sterilizate la 120 ° C timp de 20 min.
Prepararea bulionului azidă-glucoză. Până la 1 dm 3 MPB Se adaugă 5,0 g peptonă, 7,5 g glucoză, 2,5 g clorură de sodiu, constituenții se dizolvă prin încălzire. După aceea, se răcește și se fixează pH-ul astfel încât după sterilizare la 25 ° C să fie (7,2 ± 0,1). Apoi, baza de mediu este sterilizată cu un abur care curge (la 100 ° C) timp de 30 de minute. Mediul de bază, răcit la 50 ° C, este adăugat 2,0 cc azidă de sodiu și 2,0 cc dintr-o soluție de bromocrezol violet. Mediul finit nu este sterilizat. Mediul este stocat într-un loc protejat de lumină și uscat la (4 ± 2) ° C timp de cel mult 3 luni. Imediat înainte de utilizare, se toarnă în 5 cm3 în eprubete sterile.
Astfel, bifidobacterii și enterococi, împreună cu alți membri ai microflorei intestinale normale, funcționează și reglează multe funcții ale corpului. În procesul de viață, ele formează acizi organici care conduc la stabilirea mediului intestinale normale pentru a inhiba proliferarea microflorei intestinale patogene, putrefacție și gazarea. Facilitează procesul de digestie enzimatică a alimentelor, ca spori hidroliza proteinelor, carbohidraților fermentabili, grăsimi omilyuyut, fibre dizolvate, stimulează peristaltismul, facilitează evacuarea fără probleme a conținutului intestinal.
Bifidobacterium longum ATCC 15707 din industrie este cultivat, creând condiții anaerobe sau reducând potențialul de reducere a oxidării mediului, pe lapte hidrolizat. Un Enterococcus faecium SF68 cultivat utilizează bulion de azidă-glucoză. Mediul nutritiv este destinat să izoleze și să cultive enterococii izolați din materialul de testare. Mediul este selectiv și oferă o creștere preferențială a enterococilor.
Trimiteți-le prietenilor: