Bazele tehnicii de cercetare bacteriologică (p.

Pentru a prepara agarul tăiat, testează tuburi cu 3-4 ml de agar agar de carne topită până când se blochează complet într-o poziție înclinată. Unghiul de înclinare de 25-30 ° este obținut prin plasarea sub rafturile tubului de încercare.

Pentru a pregăti feluri de mâncare Petri cu agar, flambați gâtul balonului deasupra arzătorului cu agar agar de carne topit și turnați agarul topit în vase sterile Petri. Grosimea stratului de agar este de 0,5-0,7 cm.

Când cultura este transferată în mediu nutritiv lichid și dens, trebuie observată sterilitatea. Stânga mână-Mitte Am ales ambele tuburi (cu creșterea culturii și la sol de reproducție), așezați-le pe 2 degete de la mana stanga în polugorizontalnom în descompunerea și țineți degetul mare lor, astfel încât toate manipulările sunt efectuate sub controlul ochiului. Tăiați bucla de pe flacăra arzătorului înainte de a lua cultura. Apoi, cu trei degete-E de mana dreapta (ca stilou) ia bucla bacteriologic și degetul mic al flăcării scoate dopurile din tuburi.

1. Când semănuiți cultura pe tubul de testare cu agar cu mediul, țineți suprafața înclinată în sus în mână. Sterilizată și materialul răcit buclă apuca pentru semănat în (în acest caz aureusul cultură) și cu atenție dite-bucla Introducere în panta de condensare lichid agar. Apoi, glisând mișcarea de-a lungul suprafeței teșite a mediului, aplicați lovituri de la un perete al tubului la altul de jos în sus; după însămânțare, se frigează o fâșie.

2. Semănarea culturii într-o coloană de agar (prick) se face într-un mediu dens (MPA) folosind o bucla bacteriologică. Pentru aceasta, o bucla calcinată și răcită este atinsă de cultura microbului și introdusă într-o eprubetă cu mediu nutritiv. Semănarea se face prin injecție într-o coloană de mediu până la fundul tubului de testare.

3 Când semănuiți o cultură de bacterii în medii nutritive lichide, trebuie luate în considerare următoarele: nu lăsați mediul lichid să se toarnă și umeziți dopul în poziția semi-orizontală a tubului.

Metoda bacteriologică de investigare

Aceasta este principala metodă utilizată în diagnosticul de laborator al bolilor infecțioase. Esența metodei bacteriologice de investigare este însămânțarea materialului patologic de la pacienți și izolarea culturii pure a agentului patogen cu identificarea ulterioară a acestuia prin morfologie. culturale, tinctoriale, biochimice și premii antigenice.

Metoda de izolare a culturilor pure, care face posibilă izolarea speciilor microbiene individuale din unul sau altul din habitatele lor naturale, este cea mai importantă metodă de cercetare microbiologică. Primul care sugerează o metodă de izolare a culturii pure a fost L. Pasteur.

Metoda Pasteur, bazată pe utilizarea unor medii nutritive lichide, a asigurat izolarea unei culturi pure, în principal dintr-un material care conține un tip de microb (de exemplu, din sânge în septicemie etc.). Ea a fost mai puțin eficientă în cazurile în care era necesar să se izoleze tipuri diferite de microorganisme din amestecul lor. Între timp, în condiții naturale, materialul pentru cercetarea bacteriologică (spută, puroi, sol, apă etc.) conține adesea un amestec de diverse microorganisme.

secreție de succes a amestecurilor bacteriene și izolat studiul NOE specii individuale a fost posibilă prin metoda ODR-vershenstvovaniyu izolarea culturilor pure Robert Koch (R. kosh), utilizând în acest scop un mediu nutritiv striurilor LARG în 1881 ani, care gestionează distribuția în timpul tipul acțiunilor de însămânțare material în așa fel încât celulele microbiene individuale să fie amplasate izolat una de cealaltă. In mediul lor de către, (mediu de cultură, optim EVAP-ra), respectiv, de înmulțire a celulelor izolate produce descendenți de același tip, și anume. E. cultura pură a speciilor microbiene.

După o anumită perioadă (de obicei, o zi) pe mediul nutritiv dens mo minute, care sa dovedit a fi un izolat-en-formarea celulelor va multiplica populația micro-CWA - așa-numitele colonii vizibile cu gol GLA Zoom. Ele nu reprezintă acumularea haotică a micro-CWA, așa cum poate fi judecat din faptul că pentru multe tipuri de colonii de micro-robov au o structură caracteristică, prin care este posibil să se determine aproximativ flora materialului și pentru a selecta acele colonii, care fac obiectul unor studii suplimentare. Peresev astfel de colonii pe mediul nutritiv adecvat și reprezintă alocarea culturii pure.

Izolarea culturilor pure cu identificarea lor ulterioară este de o importanță capitală în diagnosticarea bolilor infecțioase, asigurându-se recunoașterea lor rapidă, tratamentul temporar și prevenirea acestora. Nu este mai puțin important în determinarea microflorei în studiul stării sanitaro-igienice a obiectelor în mediul extern (aer, apă, sol etc.), precum și în realizarea cercetării științifice.

În prezent există numeroase metode de izolare a culturilor pure. Unele dintre ele sunt utilizate într-un mod limitat, altele sunt utilizate pe scară largă. Cele mai universale sunt următoarele metode de izolare a culturilor bacteriene pure (metoda lui Drigalsky). In timp ce alte microorganisme - spirochete, protozoare - necesită metode speciale de izolare sau nu pot fi alocate pe medii artificiale (unele simple, Rickettsia, virusuri).

Metodele pentru izolarea culturilor pure din amestecuri microbiene sunt de obicei împărțite în două grupe principale: metode bazate pe principiul separării mecanice a microbilor în mediu, și metode bazate pe utilizarea proprietăților biologice ale microbilor. Primul grup include metode de izolare a celulelor individuale: 1) în adâncimea mediului nutritiv; 2) pe suprafața mediului și 3) sub controlul ochiului. Al doilea grup folosește astfel de proprietăți ale microbilor ca mobilitatea, relația lor cu temperatura, oxigenul și proprietățile patogene.

Tehnici de însămânțare și replantare

Semănarea în practica microbiologică se referă la introducerea într-un mediu nutritiv steril a oricărui material de testare pentru detectarea microorganismelor.

Peresev este transferul de microorganisme cultivate într-un mediu steril. Culturile și microbii sunt una dintre cele mai comune tehnici în practica microbiologică.

Transplanturile sunt realizate astfel încât microorganismele străine să nu intre în mediul nutritiv din aer sau de pe suprafața obiectelor din jur. Pentru aceasta este necesar să se respecte cu strictețe următoarele metode:

1) culturile sunt produse direct lângă un arzător aprins, în flacăra căruia sunt bucle sterilizate, pensete, dopuri de bumbac, marginile tuburilor;

2) în mâna stângă luați un tub cu cultura care trebuie transferată, cealaltă (cu un mediu nutritiv steril) să fie ținută într-o poziție înclinată între degetul mare și arătător;

3) bucla este ținută într-o poziție verticală deasupra flăcării arzătorului, iar partea metalică este preîncălzită și apoi înclinată orizontal și sterilizată de suportul bucla;

4) scoateți dopurile de bumbac și țineți-le cu degetul inelului și degetul mic al mâinii drepte; Nu se recomandă oprirea pe masă sau pe orice subiect;

5) arde marginile ambelor tuburi;

6) a introdus cu o buclă într-o cultură tub de testare au fost trecute cu atenție fără a atinge pereții de captare picătură Yid-os sau o cantitate mică de placă pe mediu solid și transferat, având grijă să nu atingă pereții celui de al doilea tub cu mediu obesplozhennoy nutritiv;

7) bucla este îndepărtată, marginile tuburilor de testare și capetele interioare ale dopurilor sunt trase. Dacă dopul de bumbac se aprinde, tubul de testare este închis de el, iar capătul exterior este stins cu mâna sau cu pensete;

8) buclele sunt din nou arse într-o flacără, pe tubul de testare se face o inscripție corespunzătoare: numele culturii și data însămânțării.

Semănarea într-un mediu lichid se poate face cu o pasteură sau pipetă gradată. Atunci când utilizați o pipetă pasteur cu pensete arse, capătul închis trebuie să fie spart și întreaga pipetă arsă ușor. Tubul cu cultura este plasat în mâna stângă, iar pipeta este plasată în partea dreaptă între degetul mare și degetul mijlociu, ținând gaura superioară cu degetul arătător.

Scoaterea dopului de bumbac din tubul de testare, marginile sunt arse ultima dată. Scoateți cu atenție pipeta în eprubeta și scoateți degetul arătător. Apoi închideți gura superioară a pipetă cu degetul arătător, scoateți-o din tubul de testare. Plugul de plută și marginile tubului, înainte de a se închide, sunt arse. Materialul de testare este transferat într-un mediu lichid. După însămânțare, pipetele sunt plasate într-o soluție dezinfectantă.

Semănând pe medii dense. Când semănuiți pe agar oblic, aplicați un accident vascular cerebral drept sau zig-zag. Pentru a face acest lucru, bucla cu materialul inoculat este introdusă în tub până când apa de condensare se acumulează pe fund și se aplică cu atenție o curbă, fără a slăbi agarul. Semănarea continuă se obține prin răspândirea inoculului pe întreaga suprafață a agarului oblic.

Pe un mediu dens într-un vas Petri, cultura este produsă în modul următor. Mediul nutritiv din tuburile de testare se topește într-o baie de apă fierbinte, se răcește la 48-50 ° C și se toarnă într-un vas steril cu o înălțime de 3-5 mm într-un vas steril. Mediul înghețat este uscat într-un incubator în cupe închise timp de 20-30 minute. Paharele deschise sunt așezate cu susul în jos pe rafturile termo-podului, acoperite cu hârtie sterilă. Aproape de cupe acoperă capacul. Atunci când se usucă de la suprafața mediului nutritiv și a suprafeței interioare a paharelor, apa de condens se evaporă. Semănarea se face printr-o buclă sub formă de curse paralele sau o spatulă de sticlă.

La determinarea tipului de microb și pentru creșterea anaerobelor, se face o însămânțare într-o bară de agar sau gelatină. Pentru a face acest lucru, tubul este rotit cu susul în jos și un ac lung lung cu material de semințe străpunge coloana medie de sus în jos până jos. Apoi, acul este îndepărtat cu grijă și tubul este închis cu un dop de bumbac ars. Dacă sunt necesare precauții speciale împotriva infecției, culturile sunt plantate într-un cabinet special pentru transferul culturilor pure. Tuburile de semințe și vasele Petri sunt plasate într-un termostat pentru cultivare.

Microorganismele și sporii care se află în interiorul mediilor nutritive sau pe suprafața lor nu se pot mișca, ci rămân în locul în care se aflau în momentul solidificării. Fiecare celulă sau spore începe să se înmulțească și în 2-3 zile formează o colonie - un număr imens de celule din aceeași specie. Dacă colonia a fost formată dintr-o singură celulă, ar fi o cultură pură a microorganismului din care a crescut.

Coloniile crescute sunt privite mai întâi cu ochiul liber, apoi cu o lupă sau sub microscop. Trebuie remarcat faptul că coloniile diferă în ceea ce privește aspectul, culoarea, structura etc.

Studiul coloniilor bacteriene

Colonia cultivată pe agar într-un vas Petri este studiată cu ochiul liber în lumina transmisă. Notă-conductive în materie de creștere și numărul de colonii (, mult mai mic număr nesoschity-Du- și t. D.), subliniind cerneala sau creionul special (din partea de jos a paharului) Colonii care diferă între ele.

Dimensiunea Notă coloniei (mari, mici, punct) măsurarea micrometri său ocular și traducerea în milimetri: indicați colonii - mai mică de 1 mm diametru, vizibile cu ochiul liber; mici - 1-2 mm, mediu - 2-4 mm, mari - cu diametrul de 4-6 mm sau mai mult.

Colonia poate avea o formă rotundă obișnuită; nu-corect - amoeba, rozeta, rizom sau rizom. Coloniile pot fi ridicate semnificativ deasupra mediului - convexe sau plate, plate-convexe; în formă de cupolă, cu un mijloc ridicat sau o impresie în centru. Marcați natura suprafeței: mată sau strălucitoare, netedă sau dură.

Coloniile pot fi cu marginile drepte; ondulat (cu depresiuni adânci puțin adânci), lobat - tăiat profund, rotunjit cu denticule mici; eroziv cu dinți ascuțiți, cu crestături subțiri, adesea curbate; sub formă de "bucle".

Structura coloniilor examinate sub lupă sau un microscop cu o creștere slabă în sistem uscat cu o deschidere îngustată sau mai multe condensator dezumflată, cupa spațiilor comerciale schayut pe masa cu susul în jos și prin mutarea, colonii marca de structuri diferite.

Prin culoarea coloniei poate fi foarte diversă. Cel mai adesea, acestea sunt găsite complet decolorate, uneori alb, lăptos tulbure, albastru, galben, auriu, galben auriu, portocaliu, galben-lamaie, violet, roșu și iunie-Nye. Uneori, în interiorul coloniei dezvolta mici de educație-TION de colonii (fiice) sferice sau cu forme neregulate. Ele diferă de colonia principală, cu o abilitate deosebită de a refracta lumina. filială mecanism de formare a coloniilor nu a fost elucidat, totuși remarcat faptul că, deoarece acestea cresc părintele co-Lonija lizat.

Consistența coloniei se determină prin atingerea acesteia cu o buclă.

Structura și forma coloniilor, precum și alte caracteristici, pot varia. Ei bine studiat formele S și R. În formă de S rotunde, netede, convexe, cu marginile drepte, au o suprafață strălucitoare. Rough-coloniile R sunt neregulate în formă, cu marginile zimțate și o suprafață aspră.

Izolarea culturii pure de bacterii aerobe

O cultură pură de bacterii este creșterea vizibilă a unui tip de microbi proveniți dintr-o singură celulă.

Izolarea culturii pure este baza lucrării bacteriologice, deoarece în activitățile practice bacteriologul trebuie să se ocupe de un material care conține un amestec de microbi (puroi, fecale etc.). Identificarea speciei este posibilă numai atunci când bacteriile sunt obținute în formă pură, codificată.

Izolarea culturii pure stă la baza cercetării bacteriologice - cea mai importantă metodă de diagnosticare a bolilor infecțioase în laborator.

Scopul este de a izola cultura și de ao identifica, ceea ce face posibilă diagnosticarea corectă a unei boli infecțioase.

Principala sarcină în izolarea unei culturi pure este producerea de colonii individuale, adică acumularea de microbi dintr-o specie ca urmare a multiplicării unei celule. Cea mai simplă modalitate de deconectare a bacteriilor este aceea de a măcinarea consistentă a materialului de testat cu o spatulă de sticlă sau o pipetă bacteriană pe suprafața agarului de peptonă din carne în vasele Petri.

Lucrarea independentă a elevului

într-o lecție practică

Secvența acțiunilor (etape)

Articole similare

Pagina anterioară