Diagnosticul pentru criptosporidoză se stabilește pe baza studiilor de laborator privind fecalele (in vivo) și materialul patologic (postum), luând în considerare datele epizootologice, clinice și pathoanatomice.
Pentru cercetare în laborator trimiteți:
probe proaspete de fecale care cântăresc aproximativ 10 g din rect, luate de la 10-20 suspecți în boala animalelor, probele sunt examinate în ziua selecției;
eșantioane de materiale de patch-uri din cadavre - ștergări și amprente din zonele afectate ale intestinului sau zone ale intestinului subțire, care trebuie examinate în cel mult 6 ore de la moartea animalului.
Prepararea unui frotiu din fecalele proaspete. O picătură de fecale este aplicată pe diapoziția degresată, diluată cu o picătură de soluție fiziologică, distribuită într-un strat subțire (fără presiune!). Frotiul rezultat este uscat la temperatura camerei.
Aplicarea metodelor de flotare. O probă de 3 g de fecale au fost plasate într-un pahar de laborator de 50 ml, se toarnă cantitate mică de soluție saturată de clorură de sodiu (400 g la 1 litru de apă fierbinte, densitatea soluției de 1,18 g / ml) sau sulfat de zinc (400 g per 1 litru de apă, densitatea soluției 1,24 g / ml) sau un amestec de Pavlasek (clorură de zinc - 220 g, clorură de sodiu - 210 g, apă - 800 ml). Se amestecă bine cu un baston, se adaugă soluția la marginile sticlei, se filtrează printr-o sită și se așează timp de 15-20 minute. Apoi, îndepărtați 15-20 picături din peliculă de suprafață cu o bucată de metal, transferați-o pe un diapozitiv, faceți o frotiu subțire și uscați la aer.
Fixarea frotiurilor. Pe un frotiu uscat, aplicați câteva picături de alcool etilic (metil) și fixați timp de 10-15 minute până când alcoolul se evaporă complet. Apoi, frotiu este colorat prin una din următoarele metode.
Culoarea frotiurilor pe Tsiol-Nielsen. Pentru a prepara soluția Ziehl intr-un mortar face fucsină de bază - 2r adăugat 2-3 picături de glicerol a fost triturat complet agitat în timp ce adăugarea treptată de alcool etilic de 96 ° - 12 ml, de acid carbolic - 5 g, și apă distilată - 100 ml. Soluția este turnată într-o sticlă cu dop închis, plasată într-un termostat la 37 ° C timp de 24 de ore și filtrată printr-un filtru de hârtie.
Frotiurile Freeze colorate timp de 20 minute în soluție fucsin fenolic, se spală în apă, ușor uscate curgătoare și aplicate sticlei soluția de acid sulfuric 7-10% timp de 30-60 secunde pentru albire. Apoi, clătiți-vă în apă curentă și patați frotiu cu soluție de 5% malachit verde timp de 1-2 minute.
Colorarea frotiurilor cu saffronin în conformitate cu Küster. Se prepară separat 3% soluție de safranină și 5,6% soluție KOH în apă distilată. Înainte de utilizare, preparați o soluție de lucru: luați 5 picături de soluție safranină proaspăt preparată și amestecați cu 1,5 ml soluție KOH.
Frotiul fix colorate cu soluție de lucru Safranină timp de 5 minute, se spală cu apă, se decolorează cu soluție de 0,5% acid sulfuric timp de 15 secunde, se spală cu apă, 5% sodiu dokrashivayut verde malachit în 10% etanol timp de 10-15 secunde, se spală cu apă , uscate în aer.
Colorarea frotiurilor în conformitate cu Romanovsky-Giemsa. Soluția de lucru a vopselei se prepară prin calcularea a 1-3 picături de vopsea finită pe 1 ml de apă (pH = 7,0-7,2). Pentru un medicament folosiți 3-4 ml vopsea diluată.
Se lipește frotiurile fixe timp de 20-30 minute, după care se spală cu apă distilată și se usucă.
Evaluarea rezultatelor culorilor. Frotiurile uscate sunt scanate sub o mărire mare a microscopului, utilizând un obiectiv de imersie.
- în conformitate cu Tsil-Nielsen - acido-rapid oochiste de cryptosporidium de formă rotundă. 4-5 microni, roșu aprins în diferite nuanțe; ele se disting în mod clar pe fondul verde general al frotiului.
- în conformitate cu Küster - oochisturile sunt vopsite într-o culoare palid roz.
- Romanovsky-Giemsa - oochisti rotunjite nu sunt vopsite sau pătată slab, în interiorul lor vizibile la periferia sporozoiții alungite ușor curbat, albastru pal cu un talon roșu.
Evaluarea intensității infestării, în medie, peste 10 câmpuri de vedere ale microscopului:
+ - scăzut (1-3 oochiste);
++ - media (până la 25 oochiste);
+++ - mare (mai mult de 25 de oochiste).
Diagnosticul post-mortem este criptosporidioza anumite dificultăți: în legătură cu dimensiunea redusă a ouăcistelor similitudinea lor pe frotiurile exterioare cu picături de grăsime, celule roșii din sânge, etc precum autoliză rapid .. O condiție prealabilă este prevenirea înghețării și dezghețării probelor de material de patch-uri. Frotiuri și pilitură au fost fixate cu etanol și colorate în conformitate cu Ziehl-Neelsen, apoi vizualizate în mărire ridicată microscop utilizând o lentilă de imersie (5; 13).
În frotiurile de testare, oochisturile criptosporidiene trebuie să se distingă de alți agenți patogeni care provoacă enterita tânără. Oochistii din șmirghel în frotiuri - de diferite forme, mult mai mari decât cryptosporidia, în interiorul lor sunt 4 sporociste care conțin 2 sporozoiți. Oțelul de ou - mare, oval, rotund sau în formă de butoi, cu o structură complexă (1).
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: