Munca 1

Lucrare 1. Izolarea proteinelor de rezervă și studierea proprietăților acestora

Materiale și echipamente. 1) făină de mazăre. % soluție (NH4) 2S04.

3) (NaCl) (sare uscată), 4) concentrate HNO3 într-o pipetă picurător capsulate (stocat într-o hotă), 5), o soluție concentrată de NH3 în picurător 6) 10% - s soluție de NaOH. 7) 1% - soluție a fost CuSO 4. picurător, 8) 5% - soluție a fost de acetat de plumb în picurator 9) scară tehnică cu greutăți, 10) balon conic de 100 -. 150 ml (3 bucăți), 11) într-o pâlnie , 12) stativ cu tuburi (7 bucăți), 13), cilindri de măsurare, 14) calc, 15) de hârtie de filtru, 16) spiritlamp, 17) pentru tuburile cu bandă adezivă, 18) meci.







Proteinele sunt cele mai importante componente ale tuturor celulelor vii. Proteinele macromolecule au o greutate moleculară de 10.000 până la câteva milioane și constau din una sau mai multe lanțuri polipeptidice construite dintr-un număr mare de resturi de aminoacizi.

Proteinele de solubilitate sunt împărțite în patru grupe. 1) albuminele (solubil în apă) și 2) globuline (în soluții slabe de săruri neutre), 3) prolamine (60 - 80% - etanol prefectura), 4) gluteline (în soluții alcaline slabe).

Proteinele sunt substanțe hidrofile: fiecare moleculă de proteine ​​deține până la 18.000 de molecule de apă. Deshidratarea proteinelor (pierderea cojilor hidratate) duce la coagularea lor (precipitarea).

Semințe foarte bogate în proteine ​​de leguminoase. Principalele proteine ​​de stocare ale acestei sămânțe sunt globulinele.

Cursul de lucru. Se cântăresc pe o bucată de hârtie de calc este de 5 g făină de mazăre, transferat într-un balon și se umple cu 30 ml de 10% - soluție de rezistență (NH 4) 2 SO 4. Se agită timp de 3 minute si se lasa sa stea. După 30 min, se filtrează printr-o hârtie de filtru îmbibată cu aceeași soluție (NH 4) 2 SO 4. Prima porțiune din filtrat turbiditate drenat din nou în filtru. Soluția limpede rezultată a fost toarnă globulina 2 - 3 ml într-un flacon și se procedează după cum urmează:

I. Precipitarea proteinei.

1. Adăugați exces de apă în soluția de proteină. Există o turbiditate datorată insolubilității acestei proteine ​​în apă. Adăugați o soluție (NH4) 2 SO 4. Norul dispar.

2. Se încălzește soluția de proteină până la fierbere. Se precipită precipitatul după răcire?

3. Saltarea proteinei. Se toarnă în tub cu soluție de sare uscată (NaCl) până la apariția turbidității și apoi se adaugă apă. Dacă precipitatul trece în soluție.

4. Se adaugă HNO3 concentrat la soluția de proteină (reacția se desfășoară într-o capotă de fum) până când precipitarea apare din cauza denaturării proteinei. Precipitatul este dizolvat după adăugarea soluției (NH4) 2S04.

II. Reacții colorate la proteine.

1. Reacția de xantoproteină la prezența în proteină a aminoacizilor aromatici (tirozină, fenilalanină, triptofan). Se adaugă HNO 3 puternic la soluția proteică și se încălzește ușor până la fierbere. Măsurați culoarea cheagului de proteine. După răcire, adăugați cu grijă (în lungul peretelui tubului) o soluție de amoniac și notați decolorarea.

2. Reacția biuret la legătura peptidică - CO-NH. Se adaugă de două ori un volum mai mic de soluție de NaOH 10% și 1 - 2 picături de soluție 1% CuSO4 la soluția de proteine. Ce culoare este soluția colorată?

3. Reacția la sulf a aminoacizilor cisteină și cistină. La soluția proteică se adaugă un volum de 2 ori mai mare de soluție de NaOH 10% și se fierbe ușor timp de 2-3 minute. Apoi adăugați câteva picături de soluție de acetat de plumb și continuați încălzirea până când se depune un precipitat negru. Scrieți ecuația reacției dintre Na2S formată atunci când sulful este stors din proteină prin alcaline și acetat de plumb. Descrieți reacțiile cu explicațiile corespunzătoare.

Lucrare 8. Fenomenele de plasmoliză și deplasmoliză

Materiale si echipamente: 1) bulb arc albastru sau frunze Tradescantia, 2) cu soluție 1 M zaharoză în flux, 3) un aparat de ras, 4), scalpel, 5) pensete 6) disecarea 7) microscop, 8), diapozitive și capac de sticlă cu ac , 9) cu un pahar cu apă de la robinet fiartă, 10) o baghetă de sticlă, 11) bucăți de hârtie de filtru, lampa de spirit 120, 13) meci.

Celulele plantelor pot fi considerate ca un sistem osmotic, în care rolul soluției de substanțe active osmotic joacă seva celulei, iar rolul membranei semipermeabile - membrana tsitoplazmoticheskie. Sucul celular este orice soluție are un potențial de presiune m osmotic, care este direct proporțională cu numărul de particule pe unitatea de volum, indiferent de mărimea și natura particulelor (molecule, ioni). Soluția se separă de apă pură printr-o membrană semipermeabilă (permeabilă la apă și soluți impermeabile) aspiră apa cu o forță care este numeric egală cu presiunea osmotică potențială, adică. E. Presiunea care trebuie aplicată pentru a împiedica mișcarea apei spre soluție. Următoarele soluții pot alege pentru fiecare celulă: 1) o presiune osmotică hipotonă, care este mai mică decât presiunea osmotică a sucului celular, 2) izotonică având o presiune osmotică egală cu presiunea osmotică a sevei celulare, și 3) un hipertone, presiunea osmotică care este mai mare decât presiunea seva celulei

Când cufundat într-o apă de celule soluție hipertonică din ea iese la presiunea osmotică nivelarea sevei celulei și soluția externă. In acest priterpivaet celula următoarele modificări: În primul rând, este redus, iar după o pierdere totală de turgorului protoplast în spatele peretelui celular la colțuri (plasmoliza unghi), urmat în multe locuri (plasmoliza concave) și în final de protoplaști rotunjită (plasmoliza convex). Spațiile rezultate între protoplast și peretele celular (bine permeabile atât pentru apă cât și pentru substanțele dizolvate) sunt umplute cu o soluție externă. Ca plazmalitikov (substanțe, soluții care cauzează plasmoliza) folosesc nici o substanță otrăvitoare slab penetrante sau nu penetrează prin citoplasmă vacuole. Plasmoliza este un proces reversibil. Dispariția plasmolizei se numește deplasmoliză.







Cursul de lucru. Tăiați cu o batistă o bucată de epidermă, a cărei celule conține antocianină.

Pentru a evita deteriorarea celulelor epidermei, este de dorit ca tăietura să fie formată din 2 straturi de celule.

Pune o felie într-o picătură de apă pe o lamelă de sticlă acoperit cu un capac de sticlă și de a examina celulele intr-un microscop cu o sevă de celule colorate. Înlocuiți apa, soluție de zaharoză 1M, care pe diapozitiv lângă capacul cauza picătură mare de soluție, iar apa suge o bucată de hârtie de filtru, se aplică de cealaltă parte a sticlei de acoperire. Repetați această procedură de 2-3 ori înainte de a înlocui complet apa cu o soluție. Păstrați un ochi pe microscop pentru ceea ce se întâmplă în celule.

Faceți desene schematice ale celulelor în stare de plasmoliză turgor, unghiulară, concavă și convexă, care denotă principalele părți constitutive ale celulelor

Introduceți 2-3 picături de apă sub capacul de sticlă, aspirați soluția de hârtie de filtru și imediat continuați să observați deplasmoliza celulelor. După închiderea deplazmoliza distruge celulele tinand marginea glisierei cu penseta și delicat încălzirea preparatului într-o flacără lampă spirit, care nu permite evaporarea apei. Apoi, se înmoaie soluția 1M de zaharoză și, ținând seama de prepararea într-un microscop, pentru a stabili dacă apare plasmoliza

Înregistrați rezultatele observației pentru a răspunde la următoarele întrebări.

1. Ce este plasmoliza și care sunt cauzele acesteia.

2. Cum apare deplasmoliza?

3. Poate plasmoliza celulele moarte?

Lucrare 12. Determinarea viabilității semințelor prin colorare (prin)

Materiale si echipamente: 1) semințe de mazăre sunt înmuiate în apă timp de 10 - 15 ore înainte de o clasă, 2) 0,1% - s indigo carmin soluție (1 g per 1 litru de apă distilată), 3) ceașcă de porțelan (2 buc), 4 ) chimie sticlă, 5) o ceașcă de porțelan cu rumeguș umed, 6) placă 7) disecarea ac 8) sobă, 9) pe creion de sticlă.

metoda de colorare a semințelor pentru a determina germinarea lor prin impermeabilitatea citoplasmei vii pentru unele culori (indigo, magenta acidă), în timp ce mort citoplasmă pata ușor. Există ocazii când un fetus mort și totuși în cufundarea semințelor în soluția de colorant nu este colorat datorită faptului că porțiunea din jurul embrionului de semințe nu este trecut colorant. În această privință, trebuie mai întâi embrion goale în semințele de endosperm de semințe pentru a îndepărta capacele.

Se prepara prin metoda descrisă semințele sunt păstrate în soluția de colorare este de la 1 la 3 ore (în funcție de speciile de plante) și evaluează viabilitatea semințelor: semințele cu o densitate de embrioni colorate sau rădăcini colorate găsesc semințe de nevskhozhimi cu cotiledoanele nevopsite sau vopsite parțial atribuite numărului de viabile.

Această metodă este utilizată pentru a evalua rapid germinarea semințelor de mazăre, fasole, lupin, in, cânepă, dovleac.

Cursul de lucru. Pentru a număra, fără a alege, două porții din zece semințe umflate de mazăre. Puneți o porție într-un pahar de apă și fierbeți timp de 5 minute. Cu atenție, fără a se deteriora cotiledon, curat semințele de ac de disecție ambelor porțiuni ale coaja, pune într-un vas de porțelan, se toarnă o soluție de carmin indigo și să stea timp de 1 oră, apoi se scurge cerneala înapoi în flacon, iar semințele din apa de spălare a excesului de colorant.

Marcați culoarea semințelor ucise prin fierbere. În lotul experimental contoriza numărul de semințe de piese patate, vopsite și nevopsite. Pentru a verifica germinarea semințelor plantate toate cele 10 în sticlă cu rumeguș umed (înainte de cupe de ambalare stoarce excesul de apă din rumeguș) pus într-un dulap întunecat și udate zilnic. În câteva zile, numărați cantitatea de semințe germinative. Înregistrați rezultatele într-un tabel.

Comparați rezultatele obținute prin metoda de colorare și metoda de germinare.

Lucrare 13. Acumularea albastru de metilen în celulele de Elodea

Materiale și echipamente: 1) șutează lungime elodea de aproximativ 10 cm 2) a fost mitilenovoy albastru 1: 50 mg în 1 litru de apă de la robinet), 3) 1 M KNO 3 soluție într-un picurător, 4) pensete, 5) stau cu tuburi (2 buc ), 6) microscop, 7) sticlă obiectivă și de acoperire, 8) benzi de hârtie de filtru.

În lucrările anterioare, a fost demonstrată cea mai importantă proprietate a citoplasmei - semipermeabilitatea, adică capacitatea de a trece cu ușurință apa și de a reține substanțele dizolvate. Cu toate acestea, citoplasma nu posedă o semipermeabilitate ideală, este lipsită nu numai de apă, ci și de multe substanțe, unele dintre ele cu viteză considerabilă. Printre aceste substanțe se numără albastrul de metilen, care pătrunde destul de repede în celulele de plante. Stofa unele plante sunt capabile să acumuleze o cantitate mare de albastru de metilen până la eliminarea aproape completă din soluția externă datorită bonding chimice a vopselei continute in celulele de taninuri, adesea mici cristale albastre formate.

Cursul de lucru. Umpleți două eprubete cu soluție de albastru de metilen. Puneți într-un singur eprubetă 2 3 lăstari de elodei, lăsați al doilea ca un control. După 2-3 ore (sau în fiecare zi), rețineți modificarea intensității culorii vasului cu plantele în comparație cu controlul (văzută pe fundal deschis). Plasați 1-2 frunze intens colorate pe o alunecare într-o picătură de soluție 1 M KNO 3, acoperiți cu o alunecare a capacului și examinați într-un microscop după 15-20 de minute la mărire mare. Desenați o celulă plasmolizată.

Răspundeți la următoarele întrebări.

1. În ce parte a celulei se acumulează albastru de metilen?

2.Cum se explică absența difuziei inverse a vopselei absorbite din celule în soluția externă?

3. Celulele supraviețuiesc după acumularea de albastru de metilen în ele?

Lucrare 11. Diferite permeabilități ale plasmalemiei și tonoplastice

Materiale si echipamente: 1) o ceapa bec obișnuit, 2) 1 M KNO 3 soluție în eozină picurare, 3) microscop lamă 4) de ras 5) ac de disecție 6) diapozitive și capac din sticlă 7) de creioane colorate.

Membrana citoplasmatică exterioară (plasmalemma) are o permeabilitate mai mare decât tonoplastul. Acest lucru se poate observa observând umflarea citoplasmei sub influența ionilor de potasiu care se acumulează în ea.

Cursul de lucru. Se aplică pe o picătură mare diapozitiv de 1M KNO 3 soluție cu eozină, cufundat în ea 2-3 bucăți incolor solzi ceapa epidermului miez și închideți geamul capacului. După 3 minute, începeți observațiile sub microscopul celulelor plasmolizate. Nu permiteți uscarea medicamentului prin injectarea din când în când a picăturilor proaspete de soluție.

Mai întâi citoplasmei înconjoară strat subțire vacuole, dar în curând începe să se umfle (capac plasmoliza), urmată de stingerea treptată și colorarea eozina sub influența prin pătrunzând plasmalemei. Este creșterea volumului vacuolului și dacă petele pătrunde în sucul celular.

Descrieți fenomenele observate, schițați celula în starea de acoperire a plasmolizei și colorați-o cu un creion colorat.

În concluzii, comparați permeabilitatea plasmalemiei și a tonoplastiei pentru picăturile și ionii de eozină și explicați motivele pentru umflarea citoplasmei.

Lucrare 9. Determinarea vâscozității citoplasmei în funcție de timpul de plasmoliză

Materiale si echipamente: 1) crenguțe elodea, 2) ceapa albastru bec sau frunze trandeskantsii și 3) soluție 0,8 M zaharoză într-un picurator, 4) lame de ras 5) disecat de ac 6) pensete 7) microscop, 8) subiect și plafoane.

Intervalul de timp de la momentul imersării celulelor în soluția hipertonică până la apariția plasmolizării convexe se numește timpul de plasmoliză. Acest timp depinde de vâscozitatea citoplasmei: cu cât este mai scăzută vâscozitatea, cu atât citoplasma mai ușoară rămâne în spatele peretelui celular și cu atât mai rapidă plasmoliza concavă devine convexă. Viscozitatea citoplasmei depinde de gradul de dispersie și de hidratare a coloizilor. conținutul de apă din celulă și alți factori. Citoplasma celulelor și a celulelor în creștere care au terminat de creștere are vâscozități diferite.

Pentru experiment folosind frunze tinere elodea, în care este posibil să se distingă patru zone: baza este o zonă de diviziune celulară slab vopsit, este deasupra zonei de întindere, chiar mai mare -zone diferențiere și, în final, foaia superioară, care constă din celule care au finalizat creșterea lor și având culoarea intens verde.

Cursul de lucru. Mark 2-3 frunză tânără din elodea trage porțiunea apicală (frunze ar trebui să fie vârful verde pal - bază verde), cufundat într-o picătură de soluție 0,8 M zaharoză pe o lamă de microscop și închideți geamul capacului. Pentru comparație, o altă picătură de soluție de zaharoză pune felie de ceapa sau epiderm spiderwort albastru. Marcați timpul de imersiune a obiectelor investigate în soluție. Având în vedere pregătirile la microscop la fiecare 5 minute pentru a determina plasmoliza timp, în care la foaie elodea ar trebui să monitorizeze diferitele celule zone. Înregistrați rezultatele și concluzionați că vâscozitatea citoplasmei depinde de vârsta celulei.







Articole similare

Pagina anterioară

Pagina următoare

Trimiteți-le prietenilor: