1. Dispoziții generale
1.1. Pseudomonasul este o boală infecțioasă a apei calde, a apei reci și a peștilor de acvariu. care apar în iazuri și ferme industriale.
1.2. Pseudomonasele sunt cauzate de tulpini virulente de bacterii din genul Pseudomonas. Cele mai frecvente tipuri de Ps.fluorescens, Ps.putida, Ps.aureofaciens, Ps.cyprinisepticum, Ps.intestinalis, Ps.anguilliseptica, Ps.chlororaphis. Fiecare dintre aceste specii poate provoca boala în sine, în asociere cu celelalte sau cu alte microorganisme.
1.3. Pentru cercetarea bacteriologică, se iau numai pești bolnavi vii. În fiecare caz, se examinează cel puțin 5 exemplare de pește cu semne de boală.
2. Studiu bacteriologic
2.1. Semințele sunt realizate din lichid ascitic, ficat, rinichi, splină din sânge (separat de fiecare probă) în plăci cu MPA (pH 7,2-7,4).
2.2. Boala este caracterizată printr-un flux septic, prin urmare în culturile din sânge și organele parenchimatoase, de regulă, o creștere abundentă a culturii patogene.
2.3. Semănarea se poate face prin inocularea unei bucăți, prin imersarea acesteia în organul examinat și prin întoarcerea de câteva ori sau prin pensete cu fălcile curbate.
2.4. Culturile sunt incubate la 25-26 ° C timp de 48-72 ore. Pe MPA, bacteriile din genul Psudomonas formează colonii convexe rotunde, incolore sau gri-alb-negru, cu marginile uniforme. În ziua a 3-a și a 4-a, se observă formarea unui pigment fluorescent galben-verde sau portocaliu. Ps.cyprinisepticum și unele tulpini de Ps. fluorescens pot forma colonii mucoase.
2.5. La detectarea creșterii agar a coloniilor suspecte tipic subcultivat pe mediu Kligler și după 18 ore de culturi care au acest mediu de reacție alcalină (coloană și suprafața teșită este colorată în culoarea magenta) a fost supus un studiu suplimentar. Pentru a diferenția între patogeni din genul Pseudomonas bacterii din genuri similare lor (Tabelul 1). Definesc activitatea oxidazei, capacitatea de a descompune glucoza in mediu Hugh-Leyfsona (testul de oxidare-Fermentarea).
2.5.1. Pentru a determina activitatea oxidazei pe o mică porțiune a suprafeței conice cu reactivii de cultură picătură de dimetilparafenilendiamina soluție apoasă 1% (clorhidrat sau oxalat) aplicată, și o soluție 1% (a-naftol și 60 ° rectificat spirit. Colonii Oksidazopolozhitelnye sunt colorate albastru după 30-60 secunde Culturile negative cu oxidază nu sunt investigate în continuare.
2.5.2. La efectuarea testului de oxidare-fermentare (O / F) Cultura de testare stab a fost inoculată în fundul tubului care conține 6 ml de mediu Hugh Leyfsona. Culturile sunt incubate timp de 96 de ore la 25-26 ° C. Patogeni pseudomonosis glucozei oxidează în condiții aerobe, deci mediu în straturile superioare devine strat inferior galben-pai rămâne fără a schimba fermentației.
2.5.3. În cazul unor rezultate discutabile ale testelor de oxidare-fermentare au fost efectuate culturi suplimentare izolate activitate decarboxilaza cercetare. Cultura Investigat au fost însămânțate în eprubete cu mediu de patru sau Møller-Birger Krushinskoi, dintre care trei sunt adăugate unul câte unul dintre aminoacizi (arginina, lizina, ornitina), a patra - control. Apoi, uleiul vaselin steril este stratificat pe suprafața mediului (aproximativ 1 ml). Culturile sunt incubate timp de 4 zile la 25-26 ° C. Patogenii au pseudomonosis degidrolazoy-arginină, dar nu lizină și decarboxilarea ornitina, prin culoarea medie Birger Krushinskii in vitro cu arginină devine albastră. Culoarea mediului Möller se transformă în violet, iar reacția slabă devine albăstrui.
2.5.4. Pentru a determina afilierea speciilor culturilor, semințele se efectuează pe Gissa cu manitol, sucroză, maltoză, lactoză (vezi tabelul 2).
2.5.5. Mobilitatea culturii este determinată de însămânțarea pe mediul lui Hugh-Leifson. Culturale mobile liffuzno cresc, cauzând turbiditate pe tot parcursul mediu, încă - (. Ps.fluorescenc f capsulata) strict pe intepatura.
3. Cercetarea biologică
3.1. O probă biologică este pusă pe 6-10 pești sănătoși din punct de vedere clinic din aceeași specie și vârstă, din care a fost izolată cultura agentului patogen introdus din ferma care nu are această boală.
3.2. Cultură de bulion de două zile este administrată la 4-6 pești intramuscular și 4 la 6 pești intraperitoneal la o doză de 0,3 ml. Peștii cântărind mai mult de 150 de grame sunt injectați cu 0,5 ml de cultură. Temperatura apei din acvariu, unde este conținută peștele infectat, ar trebui să se situeze între 15-25 ° C.
3.3. În același timp, controlul este pus pe 6-10 pești, cărora li se administrează un MPB steril în aceleași doze. Perioada de observare este de 16 zile.
3.4. În cazul manifestării bolii sau a morții peștilor, se efectuează un studiu bacteriologic.
3.5. Proba biologică este considerat pozitiv dacă toți peștii infectați se îmbolnăvesc și cel puțin 50% dintre ei mor cu semne pseudomonosis și de sânge și organele interne reizoliruyut cultura originală.
3.6. Diagnosticul de laborator al pseudomonazei este considerat stabilit atunci când se izolează o cultură cu proprietăți caracteristice patogenilor bolii și patogeni pentru peștii experimentali.
Odată cu aprobarea acestor orientări nu mai sunt valabile, „Linii directoare pentru diagnosticul de laborator al peștilor pseudomonosis“, aprobat de Comitetul de Stat agricol al BS a URSS 12.06.1986
Anexa 1
Tabelul 1 Diferențierea bacteriilor din genul Pseudomonas de la bacterii de genuri similare
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: