Pentru a obține culturi pure de ciuperci - saprofite facultativi și paraziți facultativi, menținerea viabilității acestora pentru a studia în continuare, folosind diverse medii de cultură. Aceste medii sunt delimitate în solid și lichid cu o compoziție chimică cunoscută și necunoscută, pregătită natural și artificial. Alegerea acestui sau acelui tip de substrat nutritiv depinde de nevoile organismului fungic și de obiectivele cercetării. De exemplu, în studiul imunității plantelor pentru a evalua rezistența la plantă gazdă a agentului patogen substanțe toxice și influența sa asupra creșterii formei patogene de alocare este necesară obținerea unui sporulare abundent.
Sunt selectate medii specifice în cursul lucrărilor experimentale. Ciuperca este însămânțată simultan în medii diferite în centrul vaselor Petri (în trei exemplare) și menținută la temperaturi optime pentru dezvoltarea sa. Observarea a fost efectuată timp de 12-15 zile la creșterea și dezvoltarea ciupercii (energia de creștere, și caracterul de început a spori, miceliu și grosimea t. P.) Pentru a alege cel mai potrivit mediu. Când se utilizează medii sintetice standard, compoziția lor poate fi variată prin adăugarea și eliminarea diferitelor componente chimice.
Deseori, este nevoie să se găsească medii pe care ciuperca a crescut și sa dezvoltat mai bine decât în natură. Acest lucru poate fi realizat datorită faptului că, după sterilizare, printre microorganismele concurente sunt distruse, iar substanțele sale constitutive sunt supuse unor modificari biochimice profunde care contribuie la o mai bună asimilare a unor ciuperci. De obicei, acest mediu de agar cu decoct sau perfuzie (extracte) din tulpini de plante gazdă sau trifoi. Astfel, 1 g de apă este luat 100 g de organe proaspete sau 50 g uscate care alimentează plantele de ciuperci. Masa este zdrobit, se încălzește o oră a redus volumul de lichid inițial, se filtrează și apoi se adaugă 2-2,5% agar-agar dizolvat și sterilizat (MK Khokhryakov, 1969).
Mikikevich a folosit medii nutritive naturale preparate în conformitate cu o astfel de rețetă atunci când cresc ciupercile care parazitează plantele lemnoase. Fire de lemn tocat fin definite (200 g) a fost turnat cu apă (1 L) și se maturează timp de 12 ore la 80 ° C, apoi se filtrează și se adaugă infuzie agar (2,5%). Mediul a fost apoi sterilizat timp de două ore cu un abur care curgea în aparatul Koch. În studiile speciale, extractele au fost preparate din diferite soiuri, care au fost nivelate prin concentrare (1% substanță uscată) prin diluție succesivă. Este posibil să se utilizeze astfel de medii naturale într-o concentrație mai mare.
Pentru anumite grupe taxonomice de fungi patogeni de mulți cercetători au fost selectați substratul nutritiv natural și mediu definit cu o compoziție chimică cunoscută. Astfel, sa constatat prin experiență că speciile din genul Fusarium se dezvoltă bine pe boabe de orez fiert; fungi din genul Piricularia dezvolta sporulare profuse pe mediu agar cu un decoct de boabe de grâu sau de rădăcinoase de morcovi. Compozițiile mediilor nutritive solide pentru specii individuale și grupuri de ciuperci sunt prezentate în Tabelul 20.
Pregătirea mediului, este necesar să se țină seama de următoarele circumstanțe:
- ciupercile cresc, de obicei, mai bine într-un mediu bogat in carbohidrati, dar ei tot mai mare în aceste medii pentru o lungă perioadă de timp poate reduce sporulyatssho;
- fungi cel mai preferat reacție slab acidă (pH 6,0-6,5), iar bacteriile - un neutru (pH 7,0) sau slab alcalin;
- carbohidrații și proteinele din soluții acide și alcaline sunt distruse prin încălzire, deci ar trebui să fie moderat sterilizate sau adăugate separat;
- Agarul se dizolvă în jumătate din cantitatea de apă timp de 1-2 ore, iar substanțele nutritive din apa rămasă, după care se amestecă componentele;
- Agarul nu se solidifică în medii foarte acide sau alcaline;
- peptona poate fi exclusă în mare măsură din compoziția mediilor destinate fungilor;
- Apa fiartă ar trebui să fie preferată față de apa distilată, deoarece prima conține oligoelemente utile; Pentru fungi din genul Phytophthora, este mai bine să se utilizeze apă distilată;
- pentru materialele care conțin material vegetal, se prepară preliminar la temperaturi scăzute (agar de cartofi) sau înalte (agar de cartofi-dextroză).
Într-o serie de cazuri (în studiul secrețiilor toxice ale agenților patogeni, enzimelor etc.) se utilizează medii nutritive lichide. De exemplu, efectele toxice ale secrețiilor Deuterophomatracheiphila studiate în mediu preparate, macerarea namelchennyh lăstari plantei gazdă (200 g de muguri la 100 cm3 de apă). Pentru ciuperci, mediul recomandat este următoarea compoziție: 0,03 g K2S04; 0,01 g de NH4N03; 10,0 g dextroză (sau maltoză); 0,01 g CaCI2; 0,01 g de Mga (PO4) 2 -4 H20 și apă 100 cm3.
Pentru realizarea diverselor studii privind biologia ciupercilor și a rezistenței plantelor, este nevoie de stocarea pe termen lung a culturilor pure. Cu toate acestea, după depozitare, un număr de ciuperci patogene modifică caracteristicile morfologice și culturale și uneori își pierde proprietățile patogene. Prin urmare, înainte de efectuarea experimentelor cu ciuperci luate după depozitarea pe termen lung în cultura pură, este necesară restabilirea patogenității lor prin efectuarea acestora. treceri prin planta gazdă.
Compoziția mediilor nutritive pentru cultivarea ciupercilor fitopatogene
Denumirea mediului de cultură
Compoziția componentelor pe 1 litru de apă, g
O metodă larg răspândită de menținere a culturilor pure de ciuperci este repetarea periodică a acestora în mediile nutritive proaspete. Cele mai multe culturi sunt transplantate de 2-3 ori pe an. Prin subcultivarea transferate în principal spori, în timp ce formele -mitsely colonii nesporogeni din zona de margine.
Transplanturile se efectuează în două repetări, iar 3 exemplare ale fiecărei culturi de ciuperci sunt lăsate pentru stocare, numărarea și re-stabilirea perioadei anterioare. Una dintre noile treceri este folosită doar pentru viitoarea reintrare, iar cealaltă pentru abandonarea în timpul lucrului experimental.
Pentru depozitarea pe termen lung a ciupercilor, este mai bine să se utilizeze medii slab și amidon de celuloză care sunt sărace în zaharuri. Un număr de ciuperci semisaprofite sunt bine conservate pe materiale naturale sterile (de exemplu, ciuperci din genul Cytospora pe ramurile plantelor gazdă); temperatura cea mai potrivită este 4-5 ° C. Răcirea profundă (aproximativ -20 ° C) păstrează în mod satisfăcător viabilitatea fungilor pentru o perioadă foarte lungă de timp.
Conservarea culturilor fungice poate fi, de asemenea, ulei mineral, după liofilizare (uscare prin congelare sub presiune redusă) și sub azot lichid în fiole. Dacă ciupercile pot rezista la un tratament complet, ele vor fi viabile timp de 10 ani sau mai mult. Cu toate acestea, utilizarea acestor metode necesită echipamente greoaie și costisitoare.
În condiții normale, colectarea de ciuperci se păstrează cel mai bine în tuburi largi de testare pe un mediu nutritiv oblic, închis cu dopuri de bumbac. Cu toate acestea, ar trebui să se ferească de pagube culturilor acarieni (tipuri Tyroglyphus Tarsonemus și de livrare), în special în sud și vara în zonele cu clima temperata. Intrând într-o eprubetă, baloane și vase Petri, mănâncă culturi, le infectează cu bacterii și poluează.
Există numeroase modalități de a trata aceste acarieni. Dar mai întâi de toate este necesar să se respecte igiena generală, să se ia măsuri pentru a se asigura că laboratorul nu zboară insecte, să fie atent atunci când lucrează cu material organic și sol. Toate materialele noi la admitere trebuie verificate cu atenție. Dacă este posibil, ar trebui prevăzute camere separate pentru materiale curate și murdare.
Plutele de vată destul de dense sunt, de obicei, impermeabile la acarieni, iar alimentarea cu aer a culturii nu este perturbată. Pentru o garanție mai mare, dopurile pot fi tratate cu otrăvuri, care sunt distructive numai pentru acarieni. De asemenea, se recomandă utilizarea hârtiei absorbante. În acest scop, după tubul jantă .vatnoy ocluzie este ars în flacăra arzătorului și acoperite cu gelatină lipicios cald cu sulfat de cupru (sulfat cupric - 20% gelatină - 20% apă - 60%). Apoi fixați această acoperire peste capătul tubului cu hârtie absorbantă. După uscare, excesul de hârtie este ars. O astfel de hârtie cu pori foarte subțiri previne penetrarea acarienilor, asigurând accesul la aer. În același mod, este posibil infundarea vasului, dar tubul de cauciuc care urmează să fie îndepărtat și hârtie absorbantă înainte de utilizare, sterilizate.
De asemenea, este util să închideți toate recipientele, cupele și eprubetele cu materiale contaminate atunci când primiți hârtie.
Toate culturile trebuie să fie numerotate și înregistrate pe carduri speciale, care înregistrează numărul și numele culturii, unde si cum este alocat, data alocării, metoda de alocare, numele presei, aplicat în pasaje, observațiile creșterii agentului patogen în cultură pură și marcate cu caracteristici.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: