Proprietarii brevetului RU 2320355:
Chernykh Lyudmila Egorovna (RU)
Invenția se referă la microbiologie și se referă la producerea de biomasă a lactobacililor autostam. Metoda implică prelevarea de probe de material nativ. Insamantarea studiile nu mai târziu de 2 ore după proba este prelevată fără diluare pe un mediu de cultură selectiv. Lactobacilii cresc și produc culturi pure de bacterii producătoare de acid lactic, bacterii ale acidului lactic obținute prin monitorizarea biomasei. Desfășurați un al doilea pasaj de lactobacili izolați. Grow obținut cultura pură de lactobacili în mediu selectiv lichid, urmată de adăugarea de conservant, care este utilizat ca mediu de gelatină zaharoză într-un raport de 1: 1, respectiv, și controlează biomasa lichidă obținută. Invenția furnizează un lichid celule de biomasă lactobacili cu structură antigenică legate de consumator celulele intestinale și a îmbunătăți biomasa rezultată.
Invenția se referă la domeniul microbiologiei și medicină și se referă la producerea de biomasă lichidă autostrains lactobacili utilizate pentru corectarea și menținerea microbiotei intestinal și tractul genital, atat pentru profilaxia si recuperarea microflora dysbacteriosis.
Lactobacilii, care fac parte din normoflora, îndeplinesc funcții importante precum participarea la digestie și asimilarea alimentelor prin activarea digestiei parietale și utilizarea substraturilor alimentare. Dezvoltarea în procesul de activitate vitală a acidului lactic, peroxidul de hidrogen, lizozimul, lactolina, efectuează o funcție antagonistă în raport cu microorganismele patogene și oportuniste.
Lactobacilii sunt singurii reprezentanți ai florei normale inhibă creșterea și dezvoltarea în intestine de putrefacție bacterii si agenti patogeni ai infecțiilor intestinale, incluzând agenți de dizenterie și salmonella.
Lactobacili sunt principala legătură microbiologică care formează rezistența (protecția) colonizării în stomac și intestinul subțire.
O metodă de obținere a unui preparat pentru tratamentul tulburărilor gastrointestinale, care cuprinde cultivarea unei tulpini de Lactobaccilus Bulgaricus într-un mediu de cultură preparat din soia anaerob la 35-42 # x000B0; C, urmată de uscarea culturii prin adăugarea de zahăr, granularea și tabletarea amestecului rezultat ( din URSS nr. 619187, publicat pe 15 august 1978).
Cu toate acestea, metoda descrisă oferă utilizată pentru tratamentul bolilor gastrointestinale, doar un singur tip de bacterii producătoare de acid lactic, care nu aparțin aceluiași nume care se referă la intestinal consumator de droguri lactobacili (izolat în prezent și au studiat 67 de specii de bacterii producătoare de acid lactic) și nu atunci când microflora sale autohtone. lactobacteria Lipsa în adezine de suprafață legate de celulele mucoase ale tractului gastrointestinal, nu este propice pentru grefarea, proliferarea și colonizarea Lactobaccilus Bulgaricus.
Mai mult, atunci când primesc bacterii prezente în starea de repaus, care este atinsă după congelare prelungită și uscare prin congelare utilizate în producerea medicamentului, este nevoie de timp (2-3 zile) pentru a restabili activitatea celulei bacteriene, care reduce efectul tratamentului.
O metodă de fabricare a autostrains bifidobacterii și lactobacili, cuprinzând etapele de fecale de prelevare a probelor, creșterea bacteriană și prepararea biomasei acestora (AS URSS №1286212, publ. 30.01.87 g).
Cu toate acestea bifidobacterii și suspensie lactobacili preparată în acest mod necesită utilizarea imediată și nu sunt stocate pentru mai mult de 2-3 zile, așa cum se face fără folosirea unui stabilizator care ajută la păstrarea bacteriilor autostrains într-o stare activă pentru un timp mai îndelungat. Nu a fost efectuată o monitorizare pregătit suspendarea activității bacteriilor și absența microfloră străine, care este contrară cerințelor documentației legale și nu protejează consumatorul de la deraparea atunci când a primit o suspensie de microfloră străine.
Fecalele de însămânțare se efectuează după titrarea materialului de testare cu soluție salină sterilă, făcând diluții succesive de zece ori până la 10-8. Cu toate acestea, nu este posibilă însămânțarea de pe materialul nativ, ceea ce face imposibilă obținerea unei culturi bifido- și lactobacilă cu o scădere a conținutului intestinal mai mic de 100 cfu în 1 g de hemoragie.
Cea mai apropiată, acceptată pentru prototip, este metoda de obținere a unei bănci de tulpini autohtone de microorganisme pentru a restabili microbiocenoza intestinală a unui om (Brevet RF nr. 212 26043, publicat la 10.02.99).
Această metodă implică prelevarea de probe de fecale autostrains excreție bifidobacterii, lactobacili, enterococi, E. coli, de generare a biomasei, conservare și depozitare pentru viață. Periodic, o bancă de tulpini autohtone este reumplută cu biomasă de viață târzie. Anterior fierte autostrains eșantioane periodic (cel puțin 1 dată pe an) sunt monitorizate pentru activitatea și reorganizarea proceselor de fabricație, în cazul în care activitatea este redusă cu mai mult de reglementare.
Cu toate acestea, atunci când se face o bancă de eșantion, se face semănarea fecalelor cu o diluție de zece ori după titrare cu o soluție fiziologică sterilă, ocolind stadiul de însămânțare a fecalelor native. Prin această tehnică, posibilitatea de a obține culturi este eliminată cu o scădere a numărului lor în intestin sub 100 g de cfu în 1 g.
Cultivat și a selectat un număr limitat de specii de bifidobacterii, lactobacili, enterococi, E. coli, deși este cunoscut acum, de exemplu, doar unele lactobacili aproximativ 67 de specii. Astfel, tipurile de lactobacili care nu aparțin celor de mai sus nu sunt incluse în eșantioane.
Nu se efectuează controlul autostamelor obținute asupra activității și absența microflorei străine, care este o parte integrantă a producției. repetări multiple ale procesului de uscare prin congelare a acelorași autostrains probă obținute anterior reduce activitatea biochimică și pierderea capacității de a adera și de a coloniza membranele mucoase ale tractului gastro-intestinal și genital.
Administrarea rectală microbiană gavaj masă proces de recepție de biomasă dificil, nu este posibil să se efectueze această procedură la domiciliu. In plus, bacteriile Settle introduse in intestinul gros, în timp ce stomacul și intestinul subțire, care conțin în mod normal de la 10 cu 3 de 10 cu 4 cfu acompaniat de lactobacililor în 1 ml de chim nu muta expuse. A, împreună cu lactobacilii sunt singurele organisme care creează protecția mucoasei gastrice și duodenale 12 de astfel de agenți patogeni oportuniști ca Helicobacter, care sunt cauza gastrita si ulcer gastric.
Metoda propusă de obținere a unei bănci de tulpini de microorganisme autohtone este foarte laborioasă, costisitoare și accesibilă pentru un număr foarte mic de consumatori. De asemenea, nu poate fi folosit într-un volum industrial, deoarece necesită un număr mare de instalații de înghețare pentru a stoca eșantioanele pregătite anterior, precum și o muncă permanentă (cel puțin o dată pe an) cu fiecare probă din biomasa autostanței.
Sarcina de a rezolva invenția propusă este de a obține biomasa lichidă din celulele lactobacilului cu o structură antigenică înrudită celulelor intestinului consumatorului, pentru a îmbunătăți calitatea biomasei obținute și pentru a mări perioada de conservare a activității celulare.
Rezultatul tehnic este producerea de biomasă lichidă din celulele lactobacilului cu o structură antigenică înrudită celulelor intestinale ale consumatorului, îmbunătățind calitatea biomasei obținute.
Rezultatul tehnic se realizează prin procedeul de obținere a autostrains biomasă lichidă lactobacili cuprinzând eșantionarea materialului nativ, însămânțare pe mediu selectiv, cultivarea lactobacililor, selectarea lactobacili și controlul acestora, efectuarea de treceri repetate cultivarea culturii lactobacili obținute într-un mediu selectiv, urmat de adăugarea unui conservant și controlul biomasei lactobacili derivat conform invenției, însămânțarea inițială în pro mediu nutritiv selectiv odyat materialul nativ nediluat, nu mai târziu de două ore de la prelevare, se adaugă la bacterii producătoare de acid lactic biomasă conservantul, care este utilizat ca mediu de gelatină zaharoză într-un raport de 1: 1, respectiv.
Între trăsăturile distinctive și rezultatul tehnic realizat, există următoarea relație de cauzalitate.
Semănarea materialului nativ (fecale), fără a se dilua direct într-un mediu nutritiv selectiv, în 2 ore de la momentul prelevării, permite izolarea lactobacililor chiar și cu o mică cantitate în conținutul intestinal.
Trecerea repetată și cultivarea culturii pure lactobacilite obținute într-un mediu lichid selectiv, urmată de adăugarea unui conservant într-un raport 1: 1, menține activitatea celulară timp de una sau mai multe luni.
Controlul biomasei lichide obtinute garanteaza calitatea acesteia.
Metoda propusă este efectuată după cum urmează.
Pentru autostrains biomasă lactobacili eșantionat materialul nativ (fecale) a individului. În cel mult două ore de la prelevare efectuată însămânțare sa, fără diluare, pe un mediu selectiv, care este utilizat ca mediu de plante lactate standardul (MRS-4), care permite selectarea de Lactobacili chiar și la cantități mici de conținutul intestinal, adică cel puțin 100 CFU per 1 g atunci când se utilizează cel puțin 10 -1 diluție și placarea de 0,1 ml prin metoda poate fi eliberată în prezența lactobacili în conținutul intestinal într-o cantitate de mai mult de 100 CFU per 1 g După izolarea de studiu morfologic, tinktor ialnye proprietăți ale culturilor selectate, confirmând apartenența acestor celule la familia Lactobaccilacea. genul Lactobaccilus, tk. asupra mediului vegetal lactate este posibilă o creștere a altor bacterii, cum ar fi stafilococii, fungi din genul Candida, celule de drojdii, similare în natură la creșterea celulelor lactobacili.
, A lactobacili al doilea pasaj selectat în mediul de cultură selectiv MRS-4 în scopul cultivării populații pure de celule, trecerea și creștere poluchennnoy lactobacili cultură pură într-un selectiv mediu lichid MPC-1, după care se adaugă conservant în proporție de 1: 1, în scopul de a menține activitatea celulară pe parcursul una sau mai multe luni.
Monitorizați biomasa lichidă rezultată pentru numărul de lactobacili viabili și absența microflorei străine, care este foarte importantă atunci când lucrați cu culturi izolate din fecale.
Un exemplu. Materialul nativ pentru inoculare este luat dintr-o porțiune a scaunului unei persoane particulare într-un vas steril sau într-un tub de testare. Nu mai târziu de 2 ore de la momentul prelevării probelor, după prepararea probei prin triturare completă într-o cantitate mică de soluție salină sterilă, se efectuează însămânțarea pe un mediu selectiv dens MBS-4.
Probele cu inoculare a materialului nativ sunt plasate într-un termostat, în care este ținut la o temperatură de 36 ° x000B1, 1 ... x000B0; C timp de 2-3 zile într-o atmosferă de dioxid de carbon.
Se studiază proprietățile morfologice și tincturale ale culturii izolate, pentru care probele sale sunt colorate de Gram.
Raportul microbilor cu colorarea Gram este o caracteristică diferențială importantă.
Lactobacilii au fost izolate coloniei folosind o buclă bacteriologic, un al doilea pasaj și produc cultivarea biomasei de lactobacili timp de 1-3 zile într-un mediu de bioxid de carbon la o temperatură de 36 # x000B1; 1 # x000B0 C, și cultivarea pasaj cultură pură lactobacili obținută într-un MRS- mediu lichid selectiv 1, și apoi face un conservant, la un raport de 1: 1, la rata de o parte a selitivnoy mediu lichid IFA-1 cultivate în cultură pură și o parte dintr-un conservant. Se amestecă bine. Ca și conservant este utilizat mediu gelatină zaharoză.
Produce controlul fiecărei probe a fost crescută de biomasă în absența microflorei străine și numărul de lactobacili viabil.
Pentru a determina puritatea culturii (microflora străine osutstvie) au fost luate și 1 ml de biomasă însămânțate pe un mediu nutritiv solid: agar nutritiv cu clorură de sodiu 9%, mediul Sabouraud mediu Endo. Culturile sunt plasate într-un incubator și cultivat 24-72 ore după culturile de incubare browsing. microfloră străine nu ar trebui să fie.
Pentru a determina numărul de lactobacili viabil în 1 ml biomasă se prepară o serie de diluții de zece ori.
Tubul 10 -5 de diluție de 1 ml se ia conținut inoculat pe mediu MRS-4 solid și plasat într-un incubator la 36 # x000B1; 1 # x000B0 C timp de 44-48 ore într-o atmosferă de dioxid de carbon.
După terminarea incubării, numărați coloniile crescute. Numărul lactobacililor viabili în 1 ml de biomasă este determinat de formula
unde A - numărul de lactobacili viabili în 1 ml de biomasă;
B este numărul de colonii cultivate pe un mediu dens MRS-4;
n este numărul ultimului tub de testare de zece ori diluții.
Biomasa trebuie să conțină cantitatea de lactobacili viabili nu mai mică de 106 cfu în 1 ml de biomasă.
Datorită faptului că metoda propusă, o biomasă lichidă din celule Lactobacillus cu structură înrudită antigenică consumator celulele intestinale, poate fi cu succes utilizat pentru a restabili tulburări intestinale microbiocenosis și menținerea acesteia într-o stare de sănătate ca în dysbacteriosis și în scopuri profilactice.
Este deosebit de importantă utilizarea metodei de a normaliza microbiocenosis la femeile gravide pentru prevenirea dysbiosis la nou-nascuti si copii de 1 an de viață.
O metodă de producere a autostrains biomasă lichidă lactobacili cuprinzând eșantionarea materialului nativ, însămânțare pe mediu selectiv, cultivarea lactobacililor, selectarea lactobacili și controlul acestora, efectuarea de treceri repetate cultivarea lactobacili cultură obținută într-un mediu selectiv, urmat de adăugarea unui conservant și de control obținut Lactobacillus biomasei caracterizat prin aceea că, însămânțarea inițială în mediu selectiv fără diluare produce materialul nativ nu mai târziu de 2 ore de la prelevare, se adaugă conservant biomasă lactobacili, care este utilizat ca mediu saharozozhelatinovuyu într-un raport de 1: respectiv 1.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: