Vectorul retroviral (vectorul retroviral, o retro- blindaj - prefix însemnând "înapoi", "înapoi", și virus - otravă; .. vector Lat - rulment care transportă) - elemente vector ce conține retrovirusul genomului. necesare pentru replicarea sa în celule. In cel mai simplu exemplu de realizare a genomului viral este eliminat din genele care codifică antigene specifice (gag), revers transcriptaza (pol) și proteinele învelișului viral (env), și în loc de a le insera o genă marker selectabilă (gena fosfotransferazei ex. Neomicina). In general, vectorul retroviral conține polilinker suplimentar, care permite clonarea genelor străine în aceasta, iar gena permite selectarea celulelor cu vectorul retroviral integrat pe un mediu selectiv. vector retroviral păstrează capacitatea inerentă a retrovirusurilor introduse în genomul celulei gazdă și să se replice în ele, dar numai în prezența unui virus helper. Vectorul retrovirus este folosit pentru a încorpora în mod eficient ADN străin în genomul celulelor eucariote, dar are o serie de proprietăți care limitează utilizarea practică în medicină. În particular, vectorul retrovirus la introducerea în genom poate provoca mutații de inserție care conduc la diferite patologii ale organismului. Mai mult decât atât, t. K. Replicarea vector retroviral, precum retrovirusuri naturale efectuate gazdă alternativ genom ADN (provirus) și ARN (genomul particulelor virale), atunci când donare în retrovirale fragmente ADN vector conținând introni, acesta din urmă ca în mod normal, sunt pierdute ca rezultat al îmbinării. Cu toate acestea, vectorul retrovirus continuă să fie utilizat în biologia experimentală, precum și pentru terapia genică.
Folosind vectori retrovirali, nu sunt capabile de auto-replicare, prevede incorporarea efectivă a ADN străin în genomul și constanța modificari genetice. Cu toate acestea, acești vectori sunt construite numai in divizarea celulelor, poate provoca mutatii inserționali dau titruri relativ scăzute ale virusului recombinant și expresia genei inserate este adesea redus la niveluri foarte scăzute în câteva luni.
Cu toate acestea, pentru administrarea transgenelor în corpul uman pentru terapia genică, vectorii retrovirali sunt utilizați pe scară largă. Pentru a introduce ADN străin în genomul animalului, se pot folosi retrovirusuri recombinante. Avantajele retrovirusurilor constau în faptul că integrarea în acest caz are loc în conformitate cu un mecanism cunoscut, doar o copie este încorporată într-un singur loc pe cromozom și nu există o rearanjare a materialului încorporat. Un alt avantaj al acestora este ușurința de livrare în diferite stadii de dezvoltare. Embrionul preimplantare poate fi tratat fie cu stocuri virale concentrate, fie prin co-cultivare în monostraturi cu o linie celulară care produce un retrovirus. De asemenea, puteți utiliza un embrion post-implantare. Toate sunt retrovirusuri bune pentru acest din urmă scop, dar liniile de celule germinale sunt infectate cu frecvență redusă și, prin urmare, eficacitatea obținerii unui animal transgenic este redusă.
Specificitatea interacțiunii retrovirusurilor cu suprafața celulelor țintă în momentul infectării este furnizată de proteina de înveliș a virionului lor codificată de gena env. al cărui produs este în contact cu proteina receptorului celulelor care urmează a fi infectate. Aceasta creează premisele unei modificări direcționate în cercul gazdă al virusului, adică celule, pe care le poate infecta, prin schimbări în proteina din plicul viral. Multe retrovirusuri au o gamă îngustă de gazde (virusuri ecotropice), de exemplu, virusul imunodeficienței umane (HIV). care este capabilă să infecteze doar o subpopulație de limfocite care exprimă pe suprafața lor un receptor CD4.
Cea mai mare atenție ca mijloc de transmitere a transgenelor în terapia genică este dată virusului Moloney Mouse Leukemia Virus (MoMLV). care are capacitatea de a infecta aproape toate celulele rozătoare studiate. Virusurile MoMLV-A pot infecta un număr mare de celule de mamifere, inclusiv celule umane. Virușii cu o gamă largă de gazde se numesc amoroși.
Se dezvoltă trei strategii principale pentru modificarea artificială a tropismului (cercul gazdă) al virușilor: o schimbare directă a secvenței de nucleotide a genei proteice a membranei retrovirale, o conexiune a proteinei de acoperire cu noi liganzi și pseudotyping.
Dezavantajul vectorilor retrovirali este limitarea dimensiunii ADN-ului, care poate fi transferat cu ajutorul lor. Numai fragmente care nu depășesc aproximativ 10 kilobaze pot fi transportate în genomuri în acest fel.
Retrovirusurile, cum ar fi natura însăși pregătite pentru ingineri genetice pentru a le folosi ca vectori pentru transferul de material genetic în genomul organismului pe care inginerii genetice intenționează să schimbe: Acestea sunt introduse în mod stabil în genomul, ei sunt capabili de a introduce în genomul ADN străin. În plus, o altă calitate fină: puteți arunca genele virale (gag, pol, env) și, în loc să le între cele două LTR inserăm gena inginerii au nevoie, și de a salva potențialul de integrare și transferul de informații retrovirus străin în genomul gazdă. Să vedem cum se face acest lucru folosind liniile celulare care se împachetează.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: