Pentru lucru este necesar să aveți ochelari cu alunecare și acoperire curate și degresate. Sticla nouă se fierbe timp de 15-20 minute într-o soluție de apă sodică sau sapună de 2-5%, se clătește cu apă și se pune într-un acid slab de acid clorhidric, apoi se spală bine cu apă.
Ochelarii care au fost utilizați și contaminați cu coloranți sau cu ulei de imersie pot fi tratate în două moduri: 1) se scufundă în amestec de acid sulfuric concentrat sau crom timp de 2 ore, apoi se clătesc bine; 2) se fierbe 30-40 de minute într-o soluție de 5% de sodă sau alcalină. Sticla netratată poate fi degresată, ștergă-o cu săpun și apoi curățați-o cu o cârpă uscată.
Atenție vă rog! Dacă paharul este bine degresat, atunci o picătură de apă se extinde uniform pe acesta, fără a se descompune în picături mici.
Ochelarii sunt depozitați în recipiente cu dopuri din sticlă măcinată într-un amestec de Nikiforov (volume egale de alcool și eter) sau în alcool 96%. Din soluții, geamul este extras cu pensete.
Atenție vă rog! Când lucrați, geamul este ținut de degete dincolo de margini.
Materialul pentru studiu este aplicat pe diapozitiv cu o bucle bacteriene, un ac sau o pipetă Pasteur. bucla bacteriana este cel mai des utilizat (fig. 7), din platină sau lungimea nicrom filament de 5-6 cm. Bucla este fixat în graifărului sau sudat la o baghetă de sticlă. Capătul firului este îndoit sub forma unui inel de 1 × 1,5 sau 2 × 3 μm.
Fig. 7. Acul și buclele pentru însămânțare. 1 - acul; buclele bacteriene: 2, 3 - bucle preparate necorespunzător; 4 - buclă pregătită corect
Atenție vă rog! O buclă corect pregătită, când este scufundată în apă și îndepărtată de acolo, reține filmul de apă.
Înainte de pregătirea frotiului, partea de lucru a buclei este arsă în flacără a arzătorului într-o poziție în poziție verticală: mai întâi buclă în sine și apoi tija metalică. Această manipulare se efectuează și după încheierea însămânțării.
Prepararea unui frotiu dintr-o cultură cultivată pe un mediu nutritiv lichid. Degajați sticla de diapozitive arsă în flacăra arzătorului și răcită. Un diapozitiv este plasat pe un diapozitiv plasat pe un suport (vas Petri, trepied). Testarea cu cultură este ținută cu degetul mare și arătătorul mâinii stângi. Bucla este ținută în mâna dreaptă. Fără a elibera balamaua, degetul mic al mâinii drepte este apăsat pe palma palmei și îndepărtat cu grijă din tub. Mișcările ar trebui să fie netede și calme. Tubul de testare este ars în flacăra arzătorului. Introduceți bucla într-o eprubetă. Răciți bucla de peretele tubului și apoi îl scufundați în cultură. Scoateți bucla fără să atingeți pereții tubului de încercare. Închideți dopul, după ce treceți prin flacăra arzătorului. Puneți eprubeta într-un trepied. Bucla este aplicată culturii pe un diapozitiv, circulând uniform în mișcare circulară. Apoi bucla este arsă în flacăra arzătorului. Frotiul este lăsat să se usuce.
Atenție vă rog! Frotiul trebuie să fie în mod uniform, subțire și mic (cu o monedă cu două copeică).
Prepararea unui frotiu dintr-o cultură cultivată pe un mediu nutritiv dens. O picătură de soluție izotonică de clorură de sodiu (0,9%) este aplicată pe sticla de diapozitive preparată cu o pipetă sau bucla Pasteur. Cultura este ușor decojită de pe agar într-un tub de testare sau într-un vas Petri și este emulsionat într-o picătură pe sticlă. Frotiul preparat trebuie să fie uniform și nu dens. Când se usucă pe diapozitiv, rămâne o acoperire slabă.
Pregătirea unei frotiuri din puroi sau spută. Materialul este luat cu o pipetă sau bucla sterilă și aplicat la mijlocul diapozitivului. Al doilea diapozitiv acoperă primul astfel încât o treime din primul și al doilea pahar să rămână liberi. Ochelarii sunt desprinși cu efort. Luați două frotiuri mari.
Pregătirea unei frotiuri din sânge. O picătură de sânge este aplicată pe diapozitiv la o distanță de o treime din marginea din stânga. Apoi, cu marginea unui geam special măcinat, înclinându-l la un unghi de 45 °, atingeți o picătură de sânge. Strângerea geamului lustruit pe geamul obiectului îl propultează înainte. Un frotiu preparat corespunzător are o culoare gălbuie și strălucește.
Pregătirea frotiurilor-tipărite din organele interne ale cadavrelor și produselor alimentare cu consistență fermă. Suprafața organului sau a alimentelor este căuterizată cu un bisturiu fierbinte și o bucată de material este tăiată din această zonă. Pensetele strângeți ușor această piesă, iar suprafața tăiată atinge diapozitivul în două-trei locuri, făcând o serie de frotiuri de imprimare.
Frotiul este uscat în aer la temperatura camerei. Dacă este necesar, se poate usca în apropierea flăcării arzătorului, ținând geamul orizontal pe marginea degetului mare și a frotiului cu degetul în sus.
Atenție vă rog! La o temperatură ridicată, poate exista o întrerupere a structurii celulelor.
Frotiurile sunt fixate după uscare completă pentru: 1) fixarea microorganismelor pe sticlă; 2) neutralizarea materialului; 3) microorganismele moarte percep mai bine culoarea. Un frotiu fix se numește drog.
Metode de fixare. 1. Fizic - în flacăra arzătorului: geamul este luat cu pensete sau cu degetul mare și degetul și de trei ori prin partea superioară a flacării arzătorului timp de 6 secunde.
2. chimică - în lichid: elementele celulare in frotiuri de frotiuri din sânge și sub acțiunea temperaturilor ridicate sunt distruse, astfel încât acestea sunt tratate cu unul dintre lichidele de fixare: a) metil spirtom- 5 min; b) alcool etilic - 10 minute; c) un amestec de Nikiforov - 10-15 minute; d) acetonă - 5 minute; e) acid și formalină în perechi - câteva secunde.
După fixare, încep să coloreze drogul.
Colorarea preparatelor se face pe o masă special echipată, acoperită cu linoleum, plastic, sticlă etc. Pe masă este necesar un vas cu apă distilată; stativ de două tuburi sau bastoane, conectate prin tuburi de cauciuc pe ambele părți (pentru plasarea medicamentelor); pensete, cilindri, pipete, hârtie de filtru, un set de coloranți, un recipient pentru a le scurge. Masa de colorat trebuie amplasată lângă robinet.
Raportul dintre microorganisme și coloranți se numește proprietățile lor tinctoriale. În microbiologie, coloranții de anilină sunt utilizați pe scară largă. Majoritatea microorganismelor percep mai bine coloranții de bază.
Cele mai frecvente sunt următoarele coloranți: roșu (magenta de bază, magenta acru, roșu Congo, roșu neutru); albastru (metilen și toluidină); violet (gentian, metil, cristalin); maro-galben (vesuvin, chrysoid); verde (diamant, malachit).
Toate coloranții sunt eliberați sub formă de pulberi amorfe sau cristaline. Dintre acestea, se prepară alcool saturat și soluții fenolice, apoi se utilizează soluții de apă-alcool sau apă-fenol pentru coloranți. Dacă se folosesc soluții colorante pentru colorare, preparatul este acoperit preliminar cu hârtie de filtru, pe care se aplică colorantul. În acest caz, piesele de colorant rămân pe hârtie.
Atenție vă rog! O picătură de colorant este pipetată astfel încât să acopere întregul preparat.
1. Soluții de alcool saturat (inițial):
colorant - 1 g de alcool 96% - 10 ml
Amestecul este plasat într-un termostat până când se dizolvă complet timp de câteva zile. Se agită zilnic. Sunt depozitate în flacoane cu dopuri împământați.
2. Fuchsin carbolic Tsilya (pentru colorarea microorganismelor acide rapide, a sporelor și a capsulelor):
soluție saturată de alcool de fucsină de bază - 10 ml dintr-o soluție de acid carbolic 5% - 90 ml
Atenție vă rog! Acidul carbolic este turnat în vopsea și nu invers.
Amestecul este agitat viguros timp de câteva minute, filtrat și drenat într-un flacon pentru depozitare.
3. Fuchsin Pfeiffer (pentru pata Gram și pentru metoda de colorare simplă):
Fuchsina Tsilya - 1 ml de apă distilată - 9 ml
Colorantul este preparat imediat înainte de utilizare.
4. Purpuriu gentian carbolic (pentru colorare în funcție de Gram):
soluție saturată de alcool
gentian violet - 10 ml
Acid carbolic 5% - 100 ml
Soluțiile sunt amestecate și filtrate printr-un filtru de hârtie.
5. Soluția Lugol (pentru colorarea Gram și reactiv pentru amidon):
iodură de potasiu - 2 g de iod cristalin - 1 g de apă distilată - 10 ml
Amestecul este plasat într-o sticlă de sticlă mată, bine înfundată și pusă pe un termostat pentru o zi, apoi se adaugă 300 ml de apă distilată.
6. Soluție alcalină de albastru de metilen Leffler:
soluție de alcool saturat de albastru de metilen - 30 ml dintr-o soluție de hidroxid de potasiu 1% - 1 ml de apă distilată - 100 ml
7. Hârtie despre Sinev (pentru pictura pe Gram):
1% soluție alcoolică de violet cristalin
Benzi de hârtie de filtru sunt impregnate cu o soluție și uscate.
Metodele de colorare sunt împărțite în aproximative (simple) și diferențiale (complexe), dezvăluind caracteristicile chimice și structurale ale celulei bacteriene.
Articole similare
-
Boilies pentru rețete de pescuit de pescuit, tehnica de crap și de pescuit alb Cupidon - ecran-șir -
Trimiteți-le prietenilor: