Umplerea materialului histologic

Cel mai rapid, mai simplu, nu necesită utilizarea de echipamente speciale de către materialul de umplere este o metodă dezvoltată de aur al II-lea în Morbid Anatomia Departamentul de Institutul de Chirurgie numit. A. V. Vișnevski.







96% alcool 15 minute

100% alcool 15 min

Cloroform 15 min

Cloroform-parafină la 56 ° C timp de 15 min

Parafina la 56 ° C, agitare viguroasă 1 min

Parafina la 56 ° C timp de 45 de minute

Durata 2 ore 30 minute

Se toarnă în felul următor:

Formalin 10% 24 de ore

Spălați cu apă curentă de 1 oră

alcool 70% (deshidratare) pentru mai mult de 4 ore

Alcool 80% mai mult de 4 ore

alcool 96% mai mult de 4 ore

alcool + cloroform 1: 1 până la 1 oră (suprascris)

cloroformul este curat până la o oră

cloroformul este curat până la o oră

cloroform + parafină 1: 1 37 ° C până la 1 oră

parafina 1 56С 45 m

parafina 2 56C 45 m

Pentru prepararea medicamentelor ar trebui:

xilen 1 (deparafinare) 56C 10 m

xilen 2 56C 10 m

hematoxilină 5 m

clătită cu apă distilată

xilen 56C mai mult de 10 m (pentru clarificare)

Caracteristicile turnării în obiecte mari de parafină

Completați parafină permite obținerea unor secțiuni histologice de dimensiuni mai mari (secțiuni gistotopograficheskie), de exemplu, secțiuni ale tuturor organelor (uter, rinichi) sau o parte semnificativă (lob a plămânilor). Turnarea se face manual și necesită timp suplimentar în toate etapele. Pentru a prepara astfel de secțiuni din țesutul cerebral, o cuticulă de țesut proaspăt de aproximativ 1 cm grosime este făcută cu ajutorul unui cuțit și introdusă într-o baie cu un fixativ. Pentru a menține o configurație plană a tăieturii, aceasta este plasată între două ochiuri de plasă care atrag inelele de cauciuc unul altuia. Durata fixării este de 48 de ore După spălarea în apă curentă (3-4 ore) se efectuează deshidratarea în 70%, 96% și 100% alcool (2 trepte) timp de 48 de ore Pentru deshidratare este posibil să se utilizeze alcool izopropilic , oferind frecventa schimbarii si temperatura de 45 ° C (in termostat). Acest lucru evită recepționarea de droguri excesiv de dure. Ca mediu intermediar, se folosesc schimbări de metil benzoat sau cloroform 3 timp de 3 zile. Obiectele sunt turnate în parafină sau paraplast, având un punct de topire de 56-58 ° C.

Pregătirea blocurilor de parafină

Partele de țesut impregnate cu parafină sunt prevăzute în forme speciale și se toarnă într-o baie topită într-un termostat sau într-o baie de apă la 60 ° C cu parafină, în care se adaugă 1 - 3% ceară.

Pentru a obține blocuri de parafină cu forma dorită, se folosesc diferite dispozitive. Acestea sunt fabricate de cutiile de hârtie asistate de laborator, la baza cărora sunt așezate bucăți, iar lângă peretele lateral se află numărul de etichete pe exterior; de metal în formă de L coturi sau mucegaiuri separabile, care sunt lubrifiate înainte de utilizare glicerol și plasate pe un metal încălzit placă-ku, îndeplinind rolul mucegaiuri inferioare. De asemenea, se utilizează diferite cutii și forme din plastic, în special cele utilizate în microbiologie, în special în cazul turnării obiectelor mici, cum ar fi materialul biopsiilor de puncție.

Dispozitivele speciale importate pentru turnarea în parafină (așa-numitele centre de umplere) sunt echipate cu un set de diferite forme (casete) și pensete. Ele asigură alimentarea automată a dozelor fracționate de parafină la temperatura optimă.

Punerea pieselor în matrițe și orientarea lor ar trebui să se facă rapid cu pensete calde. În cazul în care materialul pentru turnarea unui lot și se răcește rapid, puteți folosi vaporul, încălzit într-o baie de apă la 60 ° C. Pentru a răci matrița cu materialul, se recomandă plasarea în apă la 10-18 ° C, dar nu-l scufundați. Când parafina se solidifică, suprafața blocului se contractează și se dezvoltă o depresiune asemănătoare craterului. Acest lucru trebuie luat în considerare la turnarea pieselor și la lucrările ulterioare cu blocurile. Parafina trebuie să se ridice 3-4 mm deasupra suprafeței blocului, dacă trebuie montată pe un bloc de lemn. Este, de asemenea, posibil să umpleți blocul cu o cantitate mare de parafină și să tăiați fără utilizarea de blocuri de lemn, care pot fi aplicate cu succes chiar și pe un microtome sart.







În majoritatea liniilor directoare, după lipirea și îndepărtarea parafinei în exces, se recomandă lipirea blocurilor pe blocuri de lemn folosind o spatulă încălzită sau un bisturiu încălzit pe o lampă de duș. Apoi, pentru a asigura o adeziune mai puternică a bazei, blocul este topit din cele patru laturi cu aceeași spatulă fierbinte sau scalpel.

Turnarea țesuturilor în celloidină

Celloidina - se dizolvă bine în nitrocelulitul eteric. În practica histologică se utilizează 2%, 4% și 8% soluții de celloidină, care sunt preparate din plăci cu celloidină sau spălate din emulsie și peliculă de raze X uscate.

Pentru a prepara 500 ml dintr-o soluție de 2% din 10 g de celloidin celloidin uscat adăugat 250 ml de alcool 100% și se lasă să stea timp de 1 zi, apoi 250 ml de eter anhidru, care se dizolvă în alcool celloidin umflate. Pentru a prepara soluții de 4% și 8%, cantitatea de celloidină este crescută de 2 și respectiv de 4 ori. Soluțiile sunt depozitate într-un recipient închis etanș.

Vărsarea celloidin tesut a devenit acum mai popular decât parafina, și este folosit în principal Obra Zoom pentru prelucrarea țesături trudnorezhuschihsya și obiecte de dimensiuni durere-Shih, de la care este dificil de a obține bune-tiile secțiuni de parafină. Celloid de umplere este, de asemenea, utilizat în cazurile în care este necesar să se evite expunerea la materialul de investigat la temperaturi ridicate. În plus, mate-riali completați celloidin vă permite să obțineți cele mai bune rezultate în prezența obiectelor în cavități mari, golurile și straturi de consistență diferite pe termen.

Eterul și celloidul uscat sunt inflamabile, astfel încât trebuie să le acordați atenție atunci când le manipulați.

Materialul deshidratat a fost preluat în 100% alcool-eter (1: 1) la 4-6ch, transferat într-o soluție celloidin 2% timp de 2-3 zile, urmat de 4% și 8% soluții pentru 5-7 zile fiecare. Piesa impregnată este turnată cu 8% celloidină proaspătă și sigilată în vapori de cloroform (într-un desicator). În acest fel, materialul este turnat cu alcool 70% pentru depozitare. Blocurile decupate sunt lipite cu celloidină groasă pe blocurile de lemn timp de o zi înainte de tăiere.

Celloidină 8-10% 1 - 2 d

Cloroform 2 - 3 d

Alcool de depozitare de 70%

Caracteristicile turnării în cea mai mare parte a obiectelor mari

Celloidina de umplere, precum și turnarea în parafină, permite obținerea secțiuni histotopographic. Plăcile de țesut de organe de 1 cm grosime sunt plasate între două plasă de sârmă (ca pentru turnarea în parafină), fixate, spălate și deshidratate. Durata totală a procesului de umplere în cea mai mare parte a obiectelor mari 2-2,5 luni. Cu ajutorul umplerii celloide, este posibil să se obțină secțiuni histotopografice cu o grosime de aproximativ 20 pm.

Se toarnă în parafina de celloidină

Această metodă este recomandată pentru prelucrarea obiectelor care sunt ușor comprimate când piesa turnată ceară, de exemplu hematopoieză, țesut mezenchimal, precum și de organe și țesuturi, care are o structură multistrat (trahee, piele, etc.).

Utilizați, de asemenea, un amestec de celloidină cu ulei de ricin (1: 1), în care obiectele în decurs de 1-2 zile îmbunătățesc impregnarea lor. Apoi, pentru a îndepărta uleiul de ricin, materialul se spală în trei porțiuni de cloroform.

Schema de umplere a materialului de celloidină pentru histotopograme în conformitate cu Merkulov

Se toarnă în parafina de celloidină

Turnarea în gelatină

Pentru a studia lipidele în țesuturile și organele friabile și, de asemenea, la studiul obiectelor embrionare, ele aplică cu succes o umplutură la gelatina biopolimerică solubilă în apă. Utilizați gelatină transparentă din alimente cristaline, din care se prepară soluții de 25% și 12,5%.

La 25 g de gelatină se adaugă 75 ml de soluție apoasă 1% de fenol (apă carbolică) și se plasează într-un termostat la 37 ° C. Gelatina se umflă și după amestecare se formează o soluție densă de 25%. Din aceasta, când este diluat cu apă carbolică caldă (37 ° C), se obține de două ori o soluție de gelatină de 12,5%.

Soluțiile preparate sunt turnate în etichete curate și uscate pentru o singură utilizare și închise cu dop. În stare înghețată, gelatina poate fi depozitată mult timp într-un loc răcoros.

Schema de umplere a gelatinei de către Volkovo-Eletskiy

Umplut în material de gelatină este tăiat pe microtome de congelare. Din feliile rezultate, îndepărtați gelatina pentru a scăpa de culoarea de fundal. În acest scop, secțiunile sunt plasate timp de 30 de minute într-o soluție de hidroxid de potasiu 10% la 37 ° C. Apoi, acestea sunt spălate în apă de la robinet și colorate. Secțiunile colorate sunt închise în alcool polivinilic sau glicerină-gelatină.

Prepararea alcoolului polivinilic: pulbere de alcool polivinilic este spălată în alcool 96% (2 mutări), eter (3 cm) și uscat. La 16 grame de pulbere spălată, se adaugă 100 ml de apă distilată, se lasă să se umflească timp de 12 ore. Masa este încălzită timp de 20-30 minute într-o baie de apă fierbinte. Pe suprafața unui lichid dens și tulbure se formează un film cu bule, care este îndepărtat și soluția este filtrată prin 4 straturi de tifon. Alcoolul polivinilic poate fi utilizat ca mediu intermediar pentru obținerea preparatelor permanente după tăierea pe un microtome de congelare. În primul rând, alcoolul polivinilic este aplicat pe tăietură, răspândit pe sticlă, după care după formarea unui film subțire (după 6-12 ore) preparatul este învelit în polistiren sau balsam.

Prepararea glicerol-gelatină: a fost adăugat 7 g de gelatină 41 ml apă distilată și se lasă să se umfle 3-4 h adăugat apoi 50 ml de glicerină și 1 g de fenol .. Amestecul este încălzit într-o baie de apă, sub agitare constantă. Soluția este filtrată printr-un filtru poros mare, distribuit prin pro-etichete, acoperit cu dopuri și depozitat în frigider.

Secțiunile de țesut umplute cu gelatină, obținute pe microtomele de îngheț, pot fi deshidratate în alcooli, limpezite în carbol-xilen și încapsulate în balsam sau polistiren.

În alte scheme, se recomandă și alte concentrații de gelatină și durata șederii în ea.

Umplerea materialelor plastice solubile în apă

În scopul histochimie, în special pentru detectarea lipidelor și Fer-mente, bine dovedit tesatura completa plastice solubilă sintetice CAL - polivaks polietilen glicol, metacrilat de metil și altele.

Turnarea în polietilenglicol cu ​​masa moleculară diferită, conform lui Rinerhart-Abul-Hey







Trimiteți-le prietenilor: