Metoda de frotiuri vaginale. Această metodă este aplicabilă numai pentru determinarea armăsilor de iepure. Înainte de a lua mucusul din vagin, organele externe ale cărnii trebuie spălate cu apă caldă și săpun. Apoi, prin introducerea extensiei oglinzii ia vagin mucus din partea de jos a bolții vaginal superior printr-o lingură lungă de pre margini acute tocite sau cu un tampon de vată sterilă. La primirea mucusului, se face o frotiu pe o alunecare de mucus. Pentru a produce un frotiu, puteți utiliza o alunecare de acoperire. Frotiul este uscat, fixat cu alcool metilic timp de 5 minute, colorat cu Giemsa (2 picături pe 1 ml apă distilată) timp de 25-30 minute și uscat cu grijă.
În cazul examinării microscopice a frotiului de mucus din mânzul de mare, se găsesc celulele epiteliului ciliat, globulele mucoase și rareori leucocitele. La muniții vaginali, nu sunt observate leucocite neutrofile, celule epiteliale plate și celule singulare de epiteliu ciliat.
Ca dovadă suplimentară pentru diagnosticul de trolling, se atrage atenția asupra semnelor clinice care sunt observate la examinarea macroscopică a cavității vaginale.
Membrana mucoasă a vaginului cu o gestație de 3 săptămâni a animalului este acoperită cu un mucus gros, foarte vâscos și turbid, ceea ce face dificilă inserarea și îndepărtarea oglinzii vaginale. Din această perioadă, membrana mucoasă a vaginului devine anemică, uscată și fără luciu. Deschiderea colului uterin este închisă strâns cu mucus, care formează un dop, prin urmare partea vaginală a cervixului pare a fi plictisită. La 4-5 săptămâni de trolling, partea vaginală a colului uterin se va devira de obicei spre dreapta sau spre stânga.
Metoda hormonală. Bazat pe studiul fiziologiei hipofizei anterioare și răspunsul ovarian la sarcină este conceput pe baza un aspect foarte devreme în sângele iepelor gestante hormonului LH in urina iepelor gestante, vaci și porci - estrona hormon.
Pentru studiile privind prolan animale luate din vena jugulară pentru aproximativ 25 # 9235; 50 ml de sânge de la ea apara ser care este injectat fără nici un tratament sub pielea șoarecilor. Injectarea în cantitate de 0,1-0,4 ml din lichidul de testare se efectuează timp de 3 zile de 2 ori pe zi de către șoareci femele (imaturi) femele. Greutatea unui astfel de șoarece este de 6-8 g (vârsta de 3-4 ani).
Pentru cercetarea foliculinei la un animal, luați urină prin cateter sau așteptați urinarea naturală. Urina înainte de injectare la șoareci este tratată cu eter pentru a reduce toxicitatea acesteia. Pentru aceasta, urina este apărată. Stratul transparent format pe partea superioară se amestecă într-o cantitate de până la 10 ml. se adaugă acid acetic pentru a crea o reacție slabă acidă și se adaugă eter într-un volum egal. După aceasta, urina este agitată timp de 5 minute. Apoi, conținutul tuburilor este lăsat să se depună timp de 10 minute; eterul este drenat și urina este lăsată într-un vas deschis timp de câteva ore pentru a îndepărta complet reziduurile de eter. Apoi, urina este diluată de 3 ori cu apă distilată și sub această formă injectată sub piele la șoareci în șase doze timp de 3 zile. Pentru a identifica foliculina, se administrează urină la șoareci castrați-femele sau șoareci infantil.
Pentru a clarifica diagnosticul, se administrează urină sau sânge din fiecare animal examinat pentru sarcină la 3-4 șoareci. Dacă există hormoni sexuali în lichidul de testare, testiculele la șoareci apar la 72-100 de ore după începerea injecției. Pentru a detecta căldură, începând cu dimineața zilei a treia, de la șoareci, cu ajutorul unui tampon, se iau de două ori pe zi de descărcare vaginală. Din mucusul obținut, se face o frotiu într-o picătură de apă, care este examinată sub microscop.
În prezența estrului la șoareci, în frotiu se găsesc numai masele solide de celule din epiteliu nenuclear cornificat. În timpul perioadei de odihnă, leucocitele și celulele epiteliale nucleare se găsesc în frotiu.
Căldura de reacție poate confirma deschiderea soareci experimentale în care detectează o creștere de spălare uterin. Ca răspuns la necesitatea unor verificări suplimentare prolan dezvăluie unul dintre șoareci experimentale, iar în cazul unui rezultat pozitiv este mărirea ovarelor, prezența în ele de foliculi maturi, puncte rosii de pe site-ul penetrat bule graafovyh și chiar lutea. În plus, hipertrofia și hiperemia organelor genitale sunt bine marcate.
Cantitatea minimă de hormon pituitar sau folicular, care poate provoca o reacție a estrului la șoareci de sex feminin, se numește unitate de șoarece.
De la 3 luni inainte de nastere si sarcina în timpul sarcinii, în definiția produse pe baza obnaruzhivaniya iapă gravidă urină într-un număr mare de numerotare hormon estronă în zeci sau chiar sute de mii de unități mouse-ului pe litru de urină. Cu toate acestea, hormonul foliculina detectat și nezherebyh si inceputul sarcinii la iepele, dar cantitatea de ea este estimată doar câteva mii de unități mouse-ul per litru de urină. Astfel, diferența în cantitatea de hormon foliculină poate fi judecată pe armasarii iepurilor.
Microscopia frotiurilor din mucusul vaginal. Mucusul luate din colul uterin (de preferință cu gura) tampon dens de bumbac steril cu forcepsul. Aceste tampoane fac chiar și frotiuri pe un diapozitiv uscat, fără grăsimi. Frotiuri au fost uscate în aer, fixate cu metanol timp de 5 minute, colorate cu colorant Giemsa (1 ml de apă distilată, 2 g de picături de cerneală) în timpul 25-30 minute, clătite bine vopseaua a fost uscată și mikroskopiruyut.
In frotiuri de mucus prelevate din iepelor gestante, un număr semnificativ de celule epiteliale ciliate, bile slime albastre, celule unice de epiteliu scuamos și, uneori, o cantitate mică de globule albe.
În tampoanele de mucus, luate de la moluște, se găsesc un număr mare de leucocite și celule scuamoase, celule singulare de epiteliu ciliat. Nu există bile de mucus. Slaba pe frotiu este chiar strat.
Examinarea biologică a sângelui și a urinei. In timpul sarcinii, sângele și urina iepelor acumulat un număr destul de gonadotropină (hormon de stimulare foliculară - FSH si hormonul luteinizant - LH) și gonadal (foliculina) hormoni care stimulează activitatea funcțională a organelor sexuale.
Diagnosticarea testelor ginecologice pe baza rezultatelor unui studiu biologic al sângelui sau urinei se bazează pe detectarea conținutului cantitativ al hormonilor numiți în ele. Această metodă de diagnosticare este foarte precisă (95-100%), dar în ciuda acestui fapt, în cazul studiilor în masă cu mânii, este rareori folosită datorită complexității și costului ridicat al implementării acesteia.
Pentru a identifica hormonii din sânge și urină ale iepurilor, există următoarele metode: 1) Calla și Hart, 2) Friedman și Schneider, 3) Tsondek și Ashgeym.
În același scop, se sugerează un transplant de ovar în camera anterioară a ochiului iepurilor castrați. La încheierea operațiunii de succes, cu slăbirea răspunsului inflamator, corneea devine transparentă (în primele zile ale perioadei post-operatorie, devine tulbure), și insufla ovarul este foarte simplu și ușor de monitorizat.
După administrarea serului de test la iepure ureche grefa vena poate observa sangerari, trei zile - o creștere de foliculi, și în cinci zile - o luteinizarea clară.
Reacția lui Tsondek și Ashgame. Esența reacției este detectarea foliculinei în urină sau în sângele femeilor însărcinate.
Aceste date indică oportunitatea utilizării reacției foliculare, în special după a treia lună de trolling, și într-o etapă anterioară - studiul privind prolină.
Tehnica reacției. Urina este trecută printr-un filtru de hârtie, acidificată cu acid acetic până la o reacție ușor acidă (litmus). Pentru a elibera substanțe toxice din urină, se adaugă o cantitate egală de eter și se agită ușor. Eterul este drenat și urina este lăsată să rămână deschisă până când reziduurile eterului se evaporă (până când rămâne un miros slab). Tratamentul cu eter mărește activitatea foliculinei.
Animalele de laborator sunt șoareci albi ovariectomizați (sterilizați) în vârstă de două săptămâni după operație și verificați pentru lipsa de estrus. Puteți utiliza șoarecii infantila de sex feminin; la fiecare dintre ei să picteze părul într-un loc convențional și în trei zile de două ori pe zi pentru a intra sub piele:
la o s t r a t o m
Primul șoarece - 0,3 întregul urină
4-a »- 0,1 urină diluată
Primul șoarece - 0,2 urină totală
4-a »- 0,1 urină diluată
Dacă există motive să se presupună termenii ulteriori ai burții, atunci când există mult folicul în urină, toată urina poate fi injectată cu urină diluată de 2-3 ori cu apă.
După 100 de ore după prima injecție (de preferință, de la 70-80 de ore), de la mucusul vaginal al fiecărui șoarece, de trei ori pe zi fac frotiuri. Pentru a obține materiale și a pregăti frotiuri, utilizați bucle de platină. Calcinat pe o lampă cu alcool, bucla este imersată în apă distilată și, împreună cu apa capturată de ea, este introdusă în vagin. Pentru a extrage buclele de mucus sunt purtate pe membrana mucoasă cu o mișcare ușoară de răzuire. Același șuviță este smocită pe suprafața diapozitivului. Pe un singur pahar, puteți aplica frotiuri de 3-sm. Fiecare lovitură este marcată cu un creion de ceară cu numărul care indică mouse-ul.
Frotiul este uscat în aer, fixat cu alcool și colorat de Romanovsky sau privit sub microscop, fără pată, într-un câmp de vedere întunecat. Prezența în frotiu a celulelor nenucleare (scale) care indică apariția estrului este considerată ca un diagnostic pozitiv. În cazurile îndoielnice, puteți deschide 1-2 șoareci. Diagnosticul este confirmat de detectarea uterului, mărită sub influența foliculinei.
Practic, detectarea prolanului în serul de măduvă poate fi efectuată între 40-120 de zile de trolling (din jumătatea celei de-a doua până la a cincea lună).
Obiectul de testare este un șoarece infantil (cântărind 6-8 g) sau un șobolan (cântărind 20-28 g).
Din venul de la mare care urmează să fie examinat, luați aproximativ 50 ml de sânge și puneți-l într-un loc răcoros pentru a separa serul. Acesta din urmă este administrat sub piele la trei șoareci sau șobolani în doze (ml):
Un total de șase injecții timp de trei zile (două injecții pe zi).
În ziua a 4-5a după începerea injecțiilor de la animale experimentale de 2-3 ori pe zi, frotiurile sunt preparate din mucus vaginal și examinate sub microscop. Dacă marea era o mânză, atunci sub influența prolanei din sângele șoarecilor sau șobolanilor infantile, se produce maturizarea sexuală - dezvoltarea foliculilor. Odată cu maturarea foliculilor, foliculul format în ele provoacă estrus, iar frotiul constă din celule nenucleare (scale). Dacă imaginea nu este clară, după 100 de ore după injecție, șoarecii sunt uciși. În cazul în care marea are un mânz, șoarecii pot stabili o creștere a coarnei uterine, iar în ovare - foliculi maturi, corpuri galbene sau foliculi plini de sânge.
De importanță decisivă sunt schimbările în ovare și uter, astfel încât să se judece reacția tuturor sau a unora dintre șoareci sunt uciși sau deschiși.
Reacția lui Fridman și a lui Schneider. Obiectul este servit de iepuri cântărind 900-1200 g, adică ajungând la pubertate. Femeile ar trebui să fie izolate de bărbați și chiar mai bune de la femei.
Zece mililitri de ser din calea examinată sunt injectate în vena urechii iepurelui. 36-48 de ore după injectare, iepurele produce o laparotomie și o examinare a ovarelor. După injectarea serului la locul foliculilor rupți sau în cazul în care se găsesc foliculi, cavitatea cărora este umplută cu sânge (Figura 36).
Fig. 36 ovare de iepure: pe partea stângă - cu o reacție pozitivă la sarcină, pe dreapta - cu un negativ (în conformitate cu NA Flegmatov).
După examinarea ovarelor, rana peretelui abdominal este suturată. După 2-3 săptămâni, același iepure poate fi folosit din nou (câteodată un animal poate fi utilizat de 5-6 ori). Cu injecții repetate, trebuie să țineți cont de posibilitatea de anafilaxie.
Avantajele acestei reacții includ scurtarea duratei acesteia la 48 de ore, în loc de 100 de ore cu metoda lui Koll și Hart.
Articole similare
-
Biocompatibilitatea materialelor dentare și metodele de evaluare a acestora - stadopedia
-
Metoda de rectificare în rezolvarea problemelor de construcție - stadopedia
Trimiteți-le prietenilor: