Celule de sticlă și cuarț
O caracteristică importantă a cuvei este transmiterea fluxului luminos de către pereții cuvei, aceasta depinzând de materialul din care este făcută cuva.
Cuveta din sticlă obișnuită nu este recomandată a fi utilizată nici chiar în apropierea ultravioletului, adică la 340 nm din cauza absorbției puternice a sticlei în această regiune a spectrului. Pentru funcționarea la lumina ultravioletă, este recomandat să se utilizeze cuve de fluorit, care sunt transparente pentru lungimi de undă de 125 ± 200 nm. Cuvele din sticlă borosilicată convențională sunt potrivite pentru măsurători în părțile vizibile și apropiate de UV ale spectrului. Pentru funcționarea în regiunea cu unde mai scurte (mai mică de 300 nm), sunt necesare cuve de cuarț.
În chimie clinică obișnuită utilizarea cuvete rectangulare cu pereți plane paralele, și o lungime de cale optică de 1 cm. Cuvete rectangulare, practic, nu schimbă direcția de ieșire lumina și mișcarea mică a cuvete nu conduce la erori de măsurare semnificative în fluxul luminos.
În spectrofotometre și fotometre moderne dreptunghiulare cuvetă de makrotipa polistiren (dimensiune 10 x 10 x 45 mm), este utilizat pe scară largă în care măsurătoarea este realizată într-un volum de circa 1 ml și polumikrokyuvetah (Figura 104) care măsoară 10 x 4 x 45 mm, volumul amestecului de reacție la aproximativ 0,5 ml. In microcuve fascicul trece printr-un canal îngust lățime și 2 mm în aceeași distanță de 10 mm ca în makrokyuvetah însă fasciculul trebuie să fie îngust. Pentru orientarea precisă a cuvetelor sunt necesare suporturi speciale.
Cuve din plastic au transparență bună în regiunile vizibile și UV, dar folosind cuvele din plastic întâmpină problema asigurării purificare toleranțe, rezistență la solvenți, deformări termice.
Cele mai multe cuve de plastic sunt concepute pentru o singură utilizare.
De asemenea, s-au creat fotometre în care fotometria se efectuează în tuburi rotunde de testare. Celula fotometrică a unor astfel de fotometre este proiectată astfel încât tubul să fie întotdeauna în aceeași poziție în fluxul de lumină (centrat).
În caz contrar, deplasarea ușoară a tubului din poziția prestabilită poate duce la erori mari, deoarece tubul este o lentilă cilindrică. O altă sursă de eroare este elipticitatea (abaterea de la forma cilindrică) a tubului. Eliminați această eroare numai prin experiment. Este necesar să puneți un marcator pe o parte a tubului și să instalați tubul mai târziu în fotometru numai în aceeași orientare. Ellipticitatea conduce la o modificare a lungimii optice standard a tubului și această deviere (eroare sistematică) trebuie determinată cu soluții standard și luată în considerare ulterior la procesarea rezultatelor. Desigur, această metodă este potrivită numai pentru tehnicile fotometrice manuale.
cuvele plus dreptunghiulare și eprubete din Fotocolorimetrele verticale grup cuvete fotometrie utilizat - 8- și microplăci cu 12 godeuri puțuri, plăci de 96 de godeuri și blocurile 9 godeuri (Figura 106). Tabletele sunt întregi și sunt prevăzute cu 8-12 benzi.
Găurile din benzi și plăci au o formă cilindrică cu un diametru mic, ceea ce duce la apariția unui menisc de lichid. Un menisc concav este similar cu o lentilă difuză, o lentilă de colectare convexă. Prezența unui menisc în formă de sferă plasează cerințe stricte privind poziționarea puțului în canalul optic al fotometrului. Pentru a compensa influența meniscului, gaura donatorului este uneori făcută sferică și fasciculul de lumină poate fi mai subțire și îl concentrează pe suprafața meniscului pe axa simetriei.
Cuva trebuie să fie curată și optic transparentă. Divorțul sau raidul
Pereții schimbă în mod evident absorbția. Cuvele de sticlă utilizate în zona vizibilă sunt curățate cu apă de la robinet și apă distilată. Soluțiile alcaline nu trebuie să rămână în cuve pentru o lungă perioadă de timp, deoarece alcalina dizolvă lent sticla, ceea ce duce la divorț.
Cuva poate fi curățată într-un detergent slab sau clătită cu un amestec concentrat de HC1. apă. etanol (1: 3: 4). Cuvele nu trebuie clătite niciodată cu soluții de curățare colorate, deoarece soluțiile tind să adsorb pe suprafață și să schimbe culoarea sticlei.
Cuvetele utilizate pentru măsurători în regiunea UV a spectrului ar trebui tratate cu o atenție deosebită. Zgârieturile invizibile, amprentele digitale sau urmele reziduale ale soluțiilor măsurate anterior pot afecta în mod semnificativ absorbția. O modalitate bună de a verifica cuvele este aceea că toate cuvetele folosite sunt umplute cu apă distilată, după care se măsoară absorbția fiecărei cuve față de semifabricat. Această valoare ar trebui, în esență, să fie zero.
În prezent, în unele fotometre se utilizează celule de flux. În aceste cuve, amestecul de reacție este alimentat printr-o pompă într-un canal îngust în care se măsoară densitatea optică. Celula de flux standard are un volum intern (în care măsurarea se face direct)
30 pl. În cuvele de curgere, eșantionul ulterior eliberează proba anterioară din cuvă. Pentru a evita efectul de transfer de la diferite probe de măsurare succesive (cuvetă spălate în mod fiabil), se recomandă să se treacă prin celula nu este mai mică de 10 ori volumul comparativ cu un volum de măsurare, care nu este mai mică de 300 microlitri.
Reducerea volumului cuvei de reacție are limitări. La administrarea manuală, chiar și cu ajutorul pipetelor automate, nu este de dorit să se lucreze cu volume mai mici de 8 - 10 μl, deoarece cu o astfel de dozare eroarea asociată cu volumul biotestului este substanțial crescută. Acest factor este deosebit de puternic atunci când se administrează soluții vâscoase. De regulă, raportul volumului biotestului / volumului reactivului de lucru în intervalul 1.10 - 1.200 este utilizat în chimia clinică. Prin urmare, cele mai frecvente sunt măsurarea cuvetelor cu un volum de aproximativ 1 ml.
În autoanalizatoarele biochimice se folosesc cuve de reacție cu un volum mic de până la 100 μl. În acest caz, dozarea se efectuează cu un interval de 0,1 μl. Pentru aceasta, sunt utilizate dozatoare speciale de seringi Hamiltonian și o procedură standard de dozare. În plus, se aplică scheme de dozare, cu separarea volumelor biotestului și a reactivului de lucru în vârful dopului de aer și adăugarea unui volum suplimentar de solvent din capătul bio-sondei.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: