Materialul este luat din bolta posterolaterală a vaginului. Materialul din bolta vaginală posterioară nu trebuie utilizat, așa cum se acumulează în el celulele epiteliale colectate anterior. Conținutul este aspirat cu o pipetă de sticlă cu o cutie de cauciuc. Dacă aveți nevoie de mai mult material, puteți lua conținutul cu o lingură ginecologică. Materialul realizat cu un tampon de bumbac nu este potrivit pentru cercetare.
Conținutul este distribuit uniform pe diapozitiv. Frotiurile sunt uscate la aer și colorate.
Culoare albastru de metilen
Reactivul necesar
1% soluție apoasă de albastru de metilen.
Cursa de colorare
Pe drogul uscat sunt aplicate 1-2 picături de albastru de metilen, acoperite cu o alunecare a capacului. Păstrați timp de 1-2 minute. Apoi frotiul a fost spălat cu apă distilată, după cum urmează: la o margine a se aplica 1-2 acoperite cu sticlă picături de apă distilată, aplicat la marginea opusă a benzii de hârtie de filtru. Astfel, preparatul este spălat de mai multe ori până când se obține o culoare albastru palid, apoi se usucă.
Reactivul necesar
Se dizolvă 3 g de fucsină acidă în 100 ml de alcool 95 °.
La 12 ml din această soluție se adaugă 100 ml de apă distilată.
Cursa de colorare
Pe medicamentul uscat se toarnă magenta timp de 1 minut, apoi se clătește cu apă și se usucă. În același mod, puteți pata frotiuri și albastru de metilen.
1. Amestec de Nikiforov.
2. Soluția apoasă de hematoxilină (hematoxilină - 1 g potasiu alaun - 50 g iodură de sodiu sau de potasiu - 0,2 g apă distilată - 1000 ml, soluția se menține sub lumină timp de 14 zile, după care este gata de utilizare).
3. soluție apoasă de eozină 1%.
Cursa de colorare
Frotiurile uscate sunt fixate într-un amestec de Nikiforov (10-15 minute). S-a colorat cu soluție apoasă de hematoxilină timp de 7-10 minute până la o culoare violetă. Clătiți cu apă curgătoare. Se curăță cu o soluție apoasă de eozină 1% timp de 30 de secunde. Clătiți cu apă curentă și uscați.
Colorarea de către Romanovsky
Reactivul necesar
La vânzare există o soluție gata de vopsea a lui Romanovsky cu următoarea compoziție: azur II - 3 g; eozină galben-solubil în apă - 0,8 g; alcool metilic - 250 ml; glicerol 250 ml.
În comerț există, de asemenea, o vopsea uscată Romanovsky, din care se prepară soluția de colorant după cum urmează: 3,8 g de vopsea uscată Romanovsky dizolvată în 250 ml de metil pur sau alcool etilic (acesta din urmă este mai rău).
Soluția este lăsată timp de 3-5 zile, adesea tremurând pentru o mai bună dizolvare a vopselei. Apoi adăugați 250 ml de glicerină pură și lăsați din nou timp de 3-5 zile, tremurând periodic. Vopseaua preparată în acest mod este bine conservată pentru mult timp în sticle întunecate într-un dulap unde nu există acizi sau alcalii, fără agitare.
Soluția de vopsea Romanovsky recent preparată sau preparată este titrată înainte de utilizare, adică pată pentru mai multe frotiuri fixe timp de 25-40 minute cu vopsea diluată diferit (1-2 picături de vopsea pe 1 ml de apă distilată). Pentru un preparat bine colorat, setați numărul dorit de picături de cerneală pe ml și timpul de colorare.
Cursa de colorare
Pe podea pentru pictura sunt plasate frotiuri fixe, reprezentând bastoane de sticlă, așezate pe două muchii opuse ale cuvei. Apoi, frotiurile sunt turnate printr-o vopsea în diluția a 1-2 picături pe 1 ml de apă distilată. Vopseaua este turnată pe frotiu cât mai mare posibil, iar colorarea durează în funcție de temperatura aerului din cameră de la 25 la 45 de minute. Dacă temperatura în cameră este scăzută sau petele trebuie să fie vopsite mai repede, vopseaua diluată poate fi încălzită la 60-70 ° C (este imposibil să fierbeți-o la fierbere).
După finisarea vopselei, vopseaua este spălată (dar nu este drenată) de un curent puternic de apă și este așezată vertical într-un trepied din lemn pentru uscare.
Vopseaua diluată poate fi utilizată numai pentru o zi.
Papanicolau pătează
1. Amestec de Nikiforov.
2. Alcooli 95, 90, 80, 70 și 50 °.
3. Hematoxilina lui Harris.
4. 0,25% soluție de acid clorhidric.
5. Vopseaua portocalie G.
7. Alcool absolut.
9. Balsam canadian.
Prepararea hematoxilinei lui Harris
1 g hematoxilină se dizolvă în 10 ml de alcool absolut, se dizolvă 20 g de litiu de potasiu prin încălzire în 200 ml de apă distilată. După 24 de ore, ambele soluții sunt combinate și se adaugă 0,5 g oxid de mercur roșu sau galben. Soluția se încălzește la fierbere, se răcește și după 24 de ore se filtrează.
Prepararea soluției de colorant portocaliu
La 100 ml de soluție de alcool 0,5% de colorant portocaliu G se adaugă 0,015 g acid fosforic-tungstic.
Pregătirea vopselelor compozite (EA-36)
45 ml dintr-o soluție alcoolică 0,5% verde deschis, 10 ml dintr-o soluție alcoolică bismarkbraun 0,5%, 45 ml de 0,5% soluție de alcool de eozina gălbui (apă și solubil în alcool), 0,2 g de acid fosfowolframic , o picătură de soluție apoasă saturată de carbonat de litiu.
Cursa de colorare
Frotiurile după fixare sunt efectuate secvențial prin vase conținând alcooli 80, 70 și 50 ° și apă distilată. Apoi, 6 min Harris hematoxilină, se clătește ușor cu apă distilată și imersate (de 6 ori) o soluție de 0,25% de acid clorhidric. Apoi, timp de 6 minute, se pune într-un vas cu apă de la robinet și se clătește cu apă distilată. Apoi, petreceți 50, 70, 80 și 95 ° alcooli. Preparatele deshidratați, astfel, colorate timp de 1,5 minute Orange G colorantului, se clătește în două schimburi de 95 ° alcool si culoare timp de 1,5 min vopsea compozit (EA-36). Smeile sunt spălate din excesul de vopsea în trei schimburi de alcool 95 °. Preparate suplimentare ilumineze conducerea prin alcool absolut printr-un amestec de etanol absolut și xilen în volume egale și, în final, prin xilen și apoi închise în Canada balsamul.
Dintre coloranțele de mai sus, cele mai simple sunt colorarea fucsinului și a albastrului de metilen, dar aceste culori nu oferă o imagine completă a întregii imagini citologice. Testul Papanicolau este complex, necesită o mulțime de reactivi rari și costisitori, deci este mai puțin folosit în activitatea practică a laboratoarelor. Culoarea conform Romanovsky este potrivită pentru examinarea citologică a frotiurilor vaginale și se distinge în mod avantajos prin faptul că poate fi utilizată în orice laborator.
Compoziția celulară a frotiului vaginal
În frotiurile din vagin se disting patru tipuri de celule ale epiteliului plat.
1. Celulele de suprafață mari (35-55 microni), poligonale, nucleu mic (6 microni), picnotice. Celulele sunt mai des localizate separat. Citoplasma celulelor este foarte slab colorată, nucleul este întunecat. În număr mare se găsesc în principal în perioada 9-a până la a 14-aa ciclului menstrual.
2. Celulele intermediare sunt mari (25-30 microni), forma este neregulată, nucleul este mai mare, rotund sau oval. Celulele sunt adesea aranjate în straturi. Citoplasma pătează mai intens decât celulele de suprafață, nucleul este mai ușor. Acestea apar în toate fazele ciclului menstrual-ovarian.
3. Celule parabazice - de dimensiuni mai mici, rotunde sau ovale, cu un nucleu rotund mare. Diametrul nucleului este puțin mai mic decât lățimea marginii citoplasmei. Ele sunt adesea pictate în tonuri bazofile. Uneori trăsăturile morfologice ale celulelor parabazice nu se disting clar de celulele bazale.
Membrana mucoasă a vaginului este în mod normal căptușită cu un epiteliu plat multistrat. În funcție de raportul dintre celulele diferitelor straturi ale epiteliului, în frotiuri se disting 4 tipuri de reacții celulare care permit evaluarea stării funcționale a ovarelor.
1. Multe celule bazale și un număr mare de leucocite. Acest tip de frotiu indică o eșec severă a hormonilor ovarieni (estrogeni).
2. În frotiu un număr semnificativ de celule bazale, destul de mult de intermediar, un număr semnificativ de leucocite. Corespunde insuficienței moderate a hormonilor.
3. În frotiu, celulele intermediare predomină, uneori ele nu sunt clar conturate, ele pot sta în straturi. Celulele bazale sunt puține. Acest model de frotiu indică un grad ușor de deficit de estrogen.
4. Frotiul constă din celule de suprafață. Acest tip de frotiu corespunde unei secreții suficiente de estrogeni.
Investigarea frotiului vaginal nu poate fi efectuată în prezența proceselor inflamatorii (descărcare), după manipularea vaginală, cu aplicarea intravaginală a medicamentelor. După actul sexual, frotiurile sunt luate nu mai devreme de 24 de ore.
test de frotiu vaginal este utilizat pentru a determina indicațiile și controlul asupra rezultatelor terapiei cu hormoni. La femeile cu model frotiu normala ovarian-menstrual vaginal, în funcție de faza ciclului poate fi a treia sau a patra (faza de proliferare - al treilea tip de reacție, în timpul ovulației și în zilele după aceea - o a treia sau a patra).
Pentru a aborda problema stării funcționale a ovarelor folosite numarul citochimic (determinarea glicogen și enzime în celule) sau metode biochimice (care determină enzimele din conținutul vaginal, aciditatea, acidul lactic și alții.).
Luminescent și microscopia cu contrast de fază este, de asemenea, utilizată pentru studierea frotiurilor vaginale, ale căror date completează interpretarea stării funcționale a ovarelor. Pentru o evaluare mai exactă a frotiului vaginal, pe lângă tipul de celule și numărul acestora, se iau în considerare așa-numiți indici; Cea mai mare valoare pe care o au pentru a judeca despre încălcarea funcției ovarelor. Astfel de indici includ:
1) indicele karyopicnotic - raportul dintre numărul de celule de suprafață și nucleele picnotice față de numărul total de celule frotiu;
2) indicele atrofic (indicele celulelor adânci) - raportul numărului de celule bazale și parabazice la numărul total de celule frotiu;
3) indicele celulelor intermediare - raportul dintre numărul celulelor intermediare și numărul total al celulelor din frotiu;
4) indicele eozinofilic - raportul dintre numărul de celule de suprafață acidofilice și numărul total al celulelor suprafeței bazofile.
Toți indicii sunt exprimate ca procent.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: