Acasă | Despre noi | feedback-ul
Condiția prealabilă pentru obținerea unor secțiuni histologice bune este alegerea corectă a unghiului de înclinare a cuțitului și a unghiului de tăiere.
La un unghi de înclinare se înțelege unghiul format de suprafața inferioară a cuțitului cu planul de tăiere. Unghiul cel mai bun este unghiul la care planul de ascuțire a cuțitului este paralel cu suprafața superioară a blocului. De obicei este egal. Dacă cuțitul este instalat astfel încât unghiul de înclinare să fie mai mult decât optim, tăietura se va deforma, dacă tăierea mai puțin este imposibilă, deoarece lama cuțitului va aluneca doar pe suprafața blocului.
La unghiul de tăiere se înțelege unghiul dintre axa lungă a cuțitului și linia imaginară care trece prin centrul blocului paralel cu mișcarea saniei care transportă cuțitul. Valoarea unghiului de tăiere depinde de proprietățile materialului care este prelucrat: cu cât este mai moale, cu atât este mai mic unghiul și, invers, cu cât este mai greu, cu atât este mai mare unghiul. Cu un aranjament oblic al cuțitului, rezistența marginii de tăiere la suprafața blocului scade, ceea ce facilitează tăierea blocurilor moi.
Tăierea pe microtome
Pentru ca porțiunea să fie examinată într-un microscop, este necesar ca componentele structurale ale țesuturilor constituente să fie bine distingă în lumina transmisă și că tăierea este protejată împotriva eventualelor contaminări și deteriorări. Prin urmare, prelucrarea ulterioară a tăierii asigură colorarea, iluminarea și concluzia.
Blocul este supus tunderea prin îndepărtarea liber ceară de parafină pură (m. E. Tissue este situat). Pe părțile laterale ale blocului sunt lăsate doar sub forma unui material pad. Dacă nu produc o astfel de îndepărtare de parafină, secțiunile nu vor fi netede și încrețită (convexe), în mijloc, pentru motivul că parafină pură părți rămase este redusă în timp ce tăierea într-o măsură mai mare în comparație cu parafină impregnarea țesăturii.
Un moment neplăcut de contracție a feliilor poate fi redus prin supunerea unității la răcire (gheață), adică prin împrăștierea unei durități mai mari.
Pregătiți blocul de parafină pentru tăiere, dacă este necesar să obțineți benzi, este necesar să încercați să îi dați forma dreptunghiulară corectă. Blocul de parafină este fixat ferm în clema microtomei, paralel cu lungimea microtomului. Apoi, stabilind unghiul necesar de tăiere și unghiul corect al cuțitului, acesta este fixat cu șuruburi prin cleme și plasat sub bloc. Cu o poziție strict transversală a cuțitului, un obiect foarte dens provoacă vibrarea, care este însoțită de o scârțâire caracteristică și formarea de benzi transversale pe suprafața blocului.
După aceea, unitatea de alimentare cu șurub de reglare este setat astfel încât planul său superior era înainte cuțitul lamei 0.5-1 mm. Când se potrivesc preliminar la blocul de cuțit este terminat este setat la scară micrometrică, pentru o grosime (25-30 microni) secțiuni și mișcarea sanie cuțit începe unitatea de distribuție în sus cu ea până la primele secțiuni complet. Apoi produc bloc de simulare: se taie cu un exces de parafină scalpel, lăsând exprimate în jurul stratului de obiect nu este mai mare de 3,2 mm, și atașați unitatea de formă dreptunghiulară. Ulterior scală micrometric ajustată la grosimea slice dorită și trece la materialul de tăiere final.
Trebuie reținut faptul că mișcarea saniei cuțite de-a lungul pistei trebuie făcută fără probleme, fără efort inutil. Nu aplicați presiune pe mâner de deasupra, deoarece acest lucru duce la deplasarea stratului de ulei între suprafețele de alunecare și coborârea cuțitului, astfel încât tăieturile sunt neuniforme. Mișcarea cu un cuțit microtome la momentul trecerii peste bloc trebuie făcută rapid.
În mod corespunzător turnate mici bucăți de organe și țesuturi cu un regim de temperatură optimă în cameră sunt tăiate bine, iar tăierea, ca regulă, cade pe cuțit în stare îndreptată (unghiul de tăiere drept). La tăierea blocurilor mari și a materialului dur, secțiunile sunt adesea răsucite. Cu toate acestea, acest lucru poate fi evitat prin menținerea și ridicarea tăieturii cu peria la marginea frontală a tăieturii în timpul procesului de tăiere. Împotriva răsucirii feliilor ajută la reducerea grosimii acestora. Când cuțitul este în poziție oblică, tăieturile vor fi simple, dar tăierea va fi mai ușoară, iar tăieturile vor fi mai subțiri.
Din moment ce parafina găsește cuțitele, atunci pentru tăierea blocurilor de parafină este mai bine să folosiți cuțite de întărire solide, cu o pană groasă.
Grosimea secțiunilor de parafină variază de la 3-5 la 15 μm și depinde atât de calitatea materialului turnat, cât și de cuțit.
Este necesar să urmăriți faptul că tăietura nu a fost presată la cuțit, ca urmare, se produce lipirea și deteriorarea acesteia. Tăierea fină este îndepărtată cu grijă din cuțit cu o perie umedă (în direcția de la spate la lama) și transferată într-o ceașcă cu apă caldă (350-400 ° C). Așezați felii pe apă în mod necesar cu suprafața adiacentă cuțitului, care poate fi determinată de luciu caracteristic (partea superioară este întotdeauna mată).
Atunci când tăiați, asigurați-vă că firele de păr din perie nu cad sub marginea de tăiere a cuțitului, deoarece acest lucru duce la deteriorarea lamei.
Pentru lipire, felii îndreptate sunt luate din apă pe un diapozitiv pregătit; în acest scop, sticla este coborâtă la un capăt într-o ceașcă de apă, ținută sub o felie și luată prin fixarea acesteia cu un ac disecant pe partea de mijloc a paharului. Resturile de apă din jurul tăieturii sunt îndepărtate cu atenție cu o cârpă și călcate cu un deget de 2-3 straturi cu o cârpă uscată și caldă.
Din moment ce secțiunile de parafină de pe etichetă absoarbe apă, pentru a evita neînțelegerile în timpul procesării ulterioare (de ex. Colorarea), este necesar să le uscați temeinic, numai după ce procedați la vopsire.
Secțiunile insuficient uscate sunt ușor decojite în timpul vopsirii și, cel mai important, ele sunt prost eliberate de parafină atunci când sunt tratate cu xilen. Criteriul pentru secțiunile bine uscate este obținerea lor de transparență mai mare decât secțiunile albicioase, slab uscate.
Dacă trebuie să se grăbească cu culoarea, este recomandat svezheprikleennye și un pic uscat (în cuptor sau în aer) taie aparat platforma ușor podogrevet, aducând cu atenție ceara la semnele inițiale de topire, dar nu complet topit. O astfel de prelucrare facilitează o fixare mai puternică secțiuni pe un diapozitiv.
Pentru a vă asigura că felii aderă ferm la diapozitiv și nu se scot în timpul vopsirii, ochelarii sunt special procesați pentru degresare. Pentru a face acest lucru, se spală bine în apă fierbinte cu săpun sau pentru o perioadă lungă de fierbere în 2-3% soluție de sodă, apoi clătiți bine în apă fierbinte și clătiți (câteva ore) într-o apă cu săpun curgătoare.
Diapozitivele prelucrate și spălate în apă sunt șterse cu o cârpă de in, ținând geamul pe margini; și depozitate în alcool 960 sau într-un amestec de alcool cu eter, de unde sunt îndepărtate dacă este necesar, folosind pensete și uscate. Pe un tobogan bine degresat, apa ar trebui să se întindă într-un strat subțire, și nu se adună în picături.
Diapozitivele bune trebuie să fie din sticlă albă și să aibă o suprafață complet plană, grosimea acestora nu trebuie să depășească 1,2 mm.
Înainte de etichetarea efectivă a secțiunilor, sticla uscată este acoperită cu un strat subțire dintr-un amestec de proteine și glicerină.
Prepararea proteinei cu glicerină. Luați un alb proaspăt de ou (fără amestecul de gălbenuș), bateți cu o furculiță sau cu o spatulă până când se spumează și se toarnă pe un filtru larg poros, umezit cu apă distilată. Filtrarea durează aproximativ 24 de ore. La proteina filtrată se adaugă un volum egal de glicerină, se amestecă și se adaugă o bucată de timol pentru a preveni descompunerea.
Prepararea unui diapozitiv cu proteine. Pe o sticlă de sticlă uscată, se aplică o picătură mică de amestec de proteine cu glicerină cu o tijă de sticlă și degetul se întinde cu atenție cu un strat subțire. Mâinile trebuie spălate în prealabil, iar degetul, care este amestecat în pată, este prelucrat cu alcool. Stratul de proteină cu glicerină depus pe sticlă este laminat cu o mică încălzire (50-600), pentru care sticla este efectuată de 2-3 ori pe placa electrică fierbinte. După o astfel de prelucrare, diapozitivul este considerat gata și este posibilă lipirea de felii pe el.
Erorile posibile în producerea secțiunilor de parafină
Pentru a obține secțiuni histologice bune, este necesar să fie capabil să recunoască și să elimine în timp util cauza care agravează calitatea tăieturilor.
a) Tăierea este zdrobită.
1) parafină solidă
2) temperatură ambiantă scăzută
3) răcirea lentă a parafinei în timpul turnării
4) unghi mare al lamei
1) turnați materialul într-o parafină mai moale după pre-topirea unității într-un termostat
2) să respirați pe suprafața unității (încălzirea) înainte de fiecare mișcare a cuțitului sau să reglați el. placă lângă microtome
3) schimbați unghiul cuțitului.
b) Materialul turnat în procesul de tăiere scade din masa înconjurătoare de parafină.
1) când piesa a fost transferată în matriță pentru turnare, ea sa răcit.
1) este necesar să se topească incubator bloc și re-umplere, respectând cu strictețe regula de umplere, după ce materialul de topire preliminară este transferată către secțiunile intermediare (pentru îndepărtarea alcoolului), apoi impregnat din nou și turnat
2) turnarea este efectuată cu parafină răcită
3) îndepărtarea insuficientă a alcoolului înainte de impregnare.
c) planul tăieturii este neuniform, materialul este tăiat grav sau nu este tăiat deloc, cuțitul sări peste suprafața blocului.
1) supra-obosirea materialului în timpul cablajului și fixării.
Imposibil. Puteți să înmuiați puțin materialul numai dacă se aplică un strat de parafină fierbinte pe suprafața de tăiere înainte de fiecare mișcare a cuțitului (permițându-i să se răcească) sau respirați pe suprafața blocului.
d) Secțiunile sunt răsucite, se lipesc de suprafața cuțitului, se rup.
1) unghiul mic al cuțitului
2) parafină moale
3) temperatură ambiantă ridicată.
1) modificați unghiul de înclinare
2) turnați materialul într-o parafină mai tare și răciți blocul prin plasarea lui înainte de a tăia în frigider (puteți pune, de asemenea, o bucată de gheață pe suprafață)
3) lipirea, încrețirea sau ruperea secțiunilor, în special atunci când se taie organe bogate în țesut conjunctiv osos, cartilaginos sau dens, poate fi o consecință a electrificării lor.
plasat pe lama (la trecerea decupajului) picătură de apă și respira pe unitatea de lame, porțiunea lamei și frecarea partea adiacentă a piesei de cuțit de ceară de parafină.
e) Secțiunile sunt sfâșiate sau brăzdate.
1) crestăturile de pe lama cuțitului
2) parafină murdară (duză densă răzuieți tăietura și stricați lama);
3) materialul este slab decalcificat.
1) Reglarea sau deplasarea punctului și a cuțitului în suportul pentru cuțit
2) Turnarea în parafină pură
3) nu pot fi eliminate.
g) Planul tăieturii nu este uniform (albicioasă în partea centrală).
Se topește blocul și se conduce materialul prin secțiunile intermediare până la alcool absolut. După deshidratare se efectuează printr-un mediu intermediar, impregnat și turnat.
Trimiteți-le prietenilor: