Am intrat aici pe ergot. Am decis ca ea să creeze un subiect separat, vechii camarazi susțin. Subiectul pentru mine este topic, poate că altcineva este interesat de ea. Informația nu este a mea, de la o ineta de distanță, nu-mi amintesc unde.
Cultivarea culturii de ergot.
Sirop de porumb (Staley solids) - 5 g Saharoza - 10 g.
KH2P04 - 0,5 g.
MgS04 * 7H20 - 0,3 g. Agar - 20 g.
Distilate. apă până la 1000 ml. 2.NL563 (preliminar):
Extract de porumb (Staley solids) - 20 g. Sirop de porumb (Staley solids) - 10 g. Zaharoză - 20 g.
KH2P04 - 1 g.
MgS04 * 7H20 - 0,3 g. Distilate. apă până la 1000 ml. 3.NL500 (fermentare): succinat de amoniu - 30 g. Manitol - 30 g.
KH2P04 - 1 g.
MgS04 * 7H20 - 0,3 g.
1,2 propandiol 30 ml.
Distilate. apă până la 1000 ml. (aduceți PH la 5,1 cu acid clorhidric 10%).
(Greger D. Erge, D. Formarea derivatelor acidului lizergic în claviceps paspali de cultură adâncă Stevens et Hall., Microbiology, 1966, Vol.35, Issue 4, p.660-611).
Cultivarea și recuperarea alcaloizilor de ergot
Cultivarea și recuperarea alcaloizilor de ergot
Realizăm mediul de cultură, amestecând următoarele componente cu 500ml
apă distilată într-un balon cu gât îngust de 2 litri:
Ca (NO3) 2-1g
KH2P04 - 0,25 g MgS04 - 0,25 g KCI - 0,125 g
Fe2 (SO4) 3 * 6H2O - 8,34 mg ZnS04 - 3,44 mg
sucroză - 100g
pui de embrion de pui - 50g
Apoi aduceți volumul mediu la 1L prin setarea pH 4 cu o soluție de NH4OH și acid citric. Mediul preparat este sterilizat într-o autoclavă. Apoi, mediul este pre-tratat (ca în metoda Greger și Erge) cu o cultură de Claviceps purpurea. Apoi, acest caz este închis cu un dop din bumbac steril și se incubează timp de 2 săptămâni. Verificați periodic pH-ul și mențineți-l în jurul valorii de pH4.
După 2 săptămâni, cultura va fi observată vizual;) Acesta este mediul mamei. Luăm mai multe recipiente identice (flacoane) cu un volum de 1 gal cu dop de cauciuc. În ștecher, creați 2 găuri, în care introduceți 2 tuburi de sticlă - scurte și lungi. În partea superioară a inserției lungi, un filtru cu dop din bumbac steril și un tub de cauciuc se conectează la compresor (pentru acvarii). Un tub scurt este conectat (printr-un tub de cauciuc) la un tub lung din balonul Erlenmeyer, care are de asemenea două tuburi de sticlă de diferite lungimi și conține hipoclorit de sodiu.
Astfel, mediul cu cultura de C.purpurea este aerat cu succes (pentru că sunt aerobi) și puritatea culturii este menținută.
Dar totul este după aceea. Mai întâi, fermentatorul este dezasamblat și, ambalat în saci de kraft, este sterilizat într-o autoclavă. Flacoanele de 1 galon sunt umplute cu mediu de aceeași compoziție pentru 2/3 - 3/4 din volum și sunt, de asemenea, autoclavate. Într-un mediu steril, infectăm flacoanele de 1 galon cu lichidul mamă, colectăm fermentatorul și pornim compresorul. Trebuie respectate bulele de aer care trec prin mediul de cultură. Lăsați procesul timp de 10 zile la t = 25 ° C într-un loc suficient de întunecat.
După 10 zile, se face un mediu de cultură 1% alcool, adăugând cantitatea corespunzătoare de etanol 95%. Plecăm încă 2 săptămâni. După 24 de zile, cultivarea este oprită. adăugați la mediu 2% vin c-toe, se amestecă și se lasă timp de o oră. Soluția este apoi alcalinizată la pH 9 cu NH4OH și alcaloizii extrași cu benzen sau un amestec de cloroform și izobutanol. Apoi, din nou, extrageți 2% alcool alcoolic și apoi uscați sub vid. Obținem alcaloizi tartrați cel mai potrivit pentru depozitare. Înainte de sinteza ulterioară, ele trebuie transformate într-o formă liberă.
Aș dori să adaug de la mine că este mai bine să sterilizeze aerul care intră cu o lampă bactericidă plasată într-o țeavă. Spălați așa
mai fiabile.
Calea maghiară de obținere a alcaloizilor
1. Se mănâncă cu o ergot degresată cu eter de petrol.
2. Se amestecă cu o suspensie de oxid de magneziu (MgO ars) în apă și alcaloizii se extrag cu benzen.
3. Din extractul de benzen, alcaloizii sunt extrași cu acid tartric 2%.
4. Din extracția vinului, alcaloizii sub formă de tartrat sunt sărate cu NaCI
5. Precipitatul este amestecat cu oxid de magneziu și alcaloizii sunt extrași cu cloroform.
6. Extractul de cloroform este uscat cu Na2S04 anhidru și cloroformul este evaporat în vid într-un curent de CO2 la o temperatură nu mai mare de 60 ° C
Restul este turnat în cantitate de 5 ori de eter de petrol,
în alcaloizii precipitate, sub formă de precipitat floculat, se filtrează și se usucă.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: