Ereditate, gene, ADN # 133; Se pare că aceste cuvinte au încetat de mult să fie termeni științifici, au intrat în viața de zi cu zi și sunt familiarizați cu toată lumea acum un elev de liceu, să nu mai vorbim de elevi. Dar majoritatea dintre noi nu am văzut niciodată nici un ADN, pentru a vedea totuși - este chiar real chiar și acasă. Într-una din laboratoarele genetice de pe perete atârnă, de exemplu, o astfel de instrucțiune:
Cum să identificați ADN-ul în sine
- Găsește ceva. care conține o mulțime de ADN. De exemplu, mazărea verde (dar puteți ficatul de pui, laptele de hering sau ceapa).
- Puneți în mixer aproximativ 100 ml (jumătate de cană) din acest produs, adăugați 1/8 linguriță de ceai și 200 ml (sticlă) de apă rece. Bateți timp de 15 secunde. Mixerul vă va "găti" supa de celule de mazăre.
- Trageți prin amestec un filtru sau o bucată de nailon (stocarea este destul de potrivită). În rezultat, adăugați carnea 1/6 din cantitatea sa (aproximativ 2 linguri) de lichid de detergent (de exemplu, pentru feluri de mâncare) și se amestecă bine. Lăsați timp de 5-10 minute.
- Se toarnă lichidul prin tuburi de testare sau alte recipiente de sticlă, astfel încât să nu se umple mai mult de o treime din volum.
- Se adaugă în fiecare tub pentru un pic, sau sucul stors de ananas, o soluție pentru lentilele de contact și se agită ușor, de cotitură și îndoire a tubului (dacă vă va agită prea puternic, rupe ADN-ul și nu vor vedea nimic).
- Înclinați tubul și turnați lent în el alcool etilic, astfel încât acesta să formeze un strat de amestec de mazare deasupra acestuia. Lăsați, alcool până când amestecul nu este împărțit în mod egal. ADN-ul va pluti în sus sub formă de fulgi.
- Cu un baston de lemn (creion), prindeți-i și examinați-i sub microscop.
Desigur, pentru lucrătorii științifici această instrucțiune este la un fel de glumă și niciuna dintre ele nu distinge ADN-ul în felul acesta, dar dacă este cu adevărat folosit, atunci va funcționa! Randamentul ADN-ului va fi totuși mic, iar substanța - nu foarte pură, dar este posibil să se vadă fibrele subțiri lungi - cristalele ADN - într-un microscop.
Ce se întâmplă cu mazărea verde sau cu ficatul de pui în timpul manipulărilor descrise și de ce ADN-ul devine în cele din urmă separat de toate celelalte substanțe care sunt în celulă foarte multe?
1. Selectați un obiect
ADN-ul se știe că există în fiecare celulă, ceea ce înseamnă că puteți alege din orice material - chiar și din oase de animale, solzi de pește sau de lemn, în cazul în care celulele nu sunt atât de mult în comparație cu volumul de matrice extracelulară.
În general, înainte ca cercetătorul să nu aibă nevoie de o sarcină specială, el încearcă să aleagă un țesut pentru muncă, în care substanța intercelulară este mică și multe celule sunt ele însele. Și este de dorit ca țesutul să se descompună cu ușurință în aceste componente, iar celulele nu sunt supraîncărcate cu proteine (cum ar fi mușchii). lipide (cum ar fi grăsime) sau polizaharide (cum ar fi celulele creierului).
2. Fragmentați țesutul de pe celule
Țesătura mixer din care vom extrage substanța eredității, se împarte în celule separate: mecanic pentru a sparge este necesară conexiunea dintre ele, de regulă, mult mai puțin efort decât pentru deteriorarea celulei in sine. Și, ca și cu metoda noastră de selecție, ADN-ul mai mult de celule necesare sau mai mici decât întregi, nedeteriorate, este clar că conserve de mazăre sau hering sărat pentru astfel de experimente nu funcționează - este mai bine să ia ceva proaspăt înghețat, dacă sunteți sigur că produsul este decongelat în câteva timpii de depozitare.
Un pic de sare trebuie să fie adăugat la soluție astfel încât celulele să nu se rupă înainte de timp: presiunea internă a conținutului pe membrana celulară din interior este echilibrată de soluția salină a soluției din exterior.
3. Eliberăm macromoleculele
În ceea ce privește filtrarea, este necesară pentru mecanic pentru a elimina din celula sorteaza contaminanți tulbureală inclusiv bucăți de țesătură mari - toate aceleași substanțe pe care le vom prelucra amestecul nu va fi capabil să pătrundă adânc în aceste conglomerate și pentru extracția ADN-ului ele vor fi inutile.
Într-un astfel de rezultat al procesării, tot conținutul celulei va dispărea în exterior și va apărea în soluție, care devine foarte vâscos, vâscos și mult mai transparent decât suspensia celulară. Schimbarea consistenței soluției este un semn că liza a avut succes.
nu se toarna prea multă soluție în recipient, mai sunt multe de turnat acolo, în plus, amestecul, dacă este în exces, va fi dificil de amestecat.
5. Suntem eliberați de proteine
Ceea ce nu este numai în mixul nostru! Cu toate acestea, proteinele de aici sunt cele mai multe și ele formează cele mai puternice complexe cu ADN-ul. Există metode, proteine atunci când sunt eliminate din soluție în mai multe etape. De exemplu, unele dintre ele se denaturează cu ușurință și se precipită atunci când se adaugă soluții de săruri concentrate. În condiții de laborator, aceste metode funcționează bine, iar din sedimentul, cercetatorii sunt eliberate, tubul de testare, prin plasarea câteva minute într-o centrifugă. După toate acestea, fragmente celulare mai mult sau mai puțin mari, proteine denaturate și alte impurități sunt în partea de jos, formând un precipitat foarte gros, iar supernatantul a fost turnat într-un alt tub de testare un lichid care conține acid principal nucleic - ADN sau ARN - nu funcționează. Cu toate acestea, condițiile în etapa de curățare acasă va trebui să sări peste partea suntem interesați în materialul donând - așa că va rămâne # 132; în filmul proteic # 147;
Vom proceda imediat la purificarea ADN-ului din proteine reziduale cu ajutorul enzimelor speciale, pentru a distruge acele molecule care sunt capabile. Este substanța care conține suc de ananas. Ei înșiși - aceeași proteină, astfel încât ananasul, din care sucul presat trebuie să fie în stare proaspătă: enzima nu este cea mai mică șansă să rămână neschimbate în compot sau alimente conservate. Care este soluția pentru curățarea lentilelor, atunci dacă o să o utilizați - nu uitați să puneți tableta pentru a îndepărta depozitele de proteine! În sine, soluțiile pentru depozitarea lentilelor de contact nu sunt substanțe active - altfel ochii noștri nu ar fi afectați.
Faptul că enzimele au funcționat, puteți judeca prin reducerea vâscozității soluției. Dacă nu se întâmplă acest lucru, puneți amestecul într-un loc cald (aproximativ 37 ° C) timp de o jumătate de oră, uneori poate fi necesar să adăugați mai mult suc de ananas sau o soluție de curățare a lentilelor.
6. Am precipitat ADN-ul din soluție
Acum ADN plutește în soluție de la sine. Proteinele nu se mai agață de ea, fragmente de tot felul de molecule din amestec sunt încă multe. În condiții de laborator, fragmentele inutile sunt îndepărtate prin amestecarea completă a soluției cu fenol și / sau cloroform. Solvenți organici, culegerea proteinelor capabile # 132; pe el însuși # 147; mai greu decât apa și prin urmare amestecul ulterior al mănunchiului din centrifugă se scufundă în fund. După fundul centrifugării tubului de testare a fenolului există și / sau cloroform cu proteine dizolvate în ele și, în partea superioară, o fază apoasă care conține ADN. Apa este colectată într-un tub separat și apoi este operată cu o soluție relativ curată.
Pentru centrifugele și lipsa solvenților organici, a căror funcționare necesită aceleași măsuri speciale de siguranță, această etapă de curățare în gospodării trebuie să fie ratată, iar ADN-ul este precipitat direct de la # 132; murdar # 147; soluție.
Observăm imediat - alcoolul etilic nu poate fi înlocuit cu vodcă sau parfumuri: concentrația în cazul în care alcoolul este scăzut și va scădea atunci când este amestecat cu faza apoasă la 60-65%. ADN-ul în stare cristalină nu va trece. În parte, din acest motiv, alcoolul este turnat într-un tub care conține un amestec care conține ADN, cu atenție, acoperind-o. soluție apoi straturile inferioare de alcool amestecat ADN-ul parțial va începe procesul de cristalizare a acizilor nucleici, și se ridică la suprafață (în cazul în care un alcool mai concentrat), sub formă de fulgi.
În cazul în care alcoolul este turnat pe partea de sus nu va funcționa și toate amestecate fără speranță, atunci numărul de etanol mici au nimic nu funcționează, dar atunci când o mare începe să se cristalizeze, nu numai ADN-ul: în sedimentele va scădea și reziduuri de proteine, și altceva de la sursa celulelor.
7. Ce am obținut?
cristale pure ale ADN-ului seamănă cu bile de fibre încâlcite, dar nu uitați că puteți vedea cristale este substanța, nu macromolecula, și spune prin aspectul lor, care conține genele pe care acidul nucleic izolat este, desigur, imposibil. Pentru a afla, trebuie să dizolvați din nou ADN-ul. Cu toate acestea, # 132; citiți # 147; secvența de nucleotide la domiciliu, din păcate, este imposibilă: pentru aceasta avem nevoie nu numai de dispozitive speciale, ci și de reactivi costisitori.
Cu toate acestea, dacă ați considerat deja bine cristalele și le-ați uscat, puteți urmări modul în care ADN-ul se dizolvă. Se umflă la început, similar cu o meduză gelatinoasă, și numai câteva zile mai târziu soluția devine omogenă. Procesul poate fi accelerat, tubul de test dacă este mai des agitat.
Dorim începutul succesului la geneticieni și biologi moleculari!
Articole similare:
Dezoksiribonu. și așa mai departe. E. Kotina.
Pentru fiecare - în funcție de genom! George Biserica.
Am citit ADN-ul: de o sută de ori mai rapid, de o mie de ori mai ieftin. E. Kleshchenko.
Trimiteți-le prietenilor: