Efectele citopatice sunt evaluate prin microscopia culturilor celulare. În funcție de gradul de afectare celulară, se izolează virusurile cu citopatogenitate ridicată sau moderată. Propagarea virușilor în culturile celulare este însoțită de perturbări în morfologia celulelor monostrat. Anumiți viruși determină modificări citopatice caracteristice, care (luând în considerare imaginea clinică a bolii) vă permit să puneți rapid un diagnostic preliminar. De exemplu, multiplicarea paramyxovirusurilor (pojar, oreion, virus PC) este însoțită de apariția unor celule multinucleare gigantice caracteristice; adenovirusurile provoacă formarea de acumulări de celule rotunde mari, iar atunci când se reproduc herpesvirusuri, celule de formă rotunjită se răspândesc difuz prin monostrat.
Formarea plăcilor. "Plăcile" se numesc colonii negative - zone de celule distruse care arată ca zone de iluminare pe monostraturi de celule acoperite cu agar. În unele cazuri, doza și citopatogenitatea virusului sunt exprimate în indivizi care formează plăci (PFU).
Includerea Taurului. Mulți viruși determină apariția în celulele infectate a formărilor caracteristice - grupuri de proteine virale sau particule vizibile într-un microscop luminos. Includerea taurului poate fi localizată atât în citoplasmă (corpuscul Guarneri cu variolă), cât și în nucleele celulelor (adenovirusuri).
Absența efectului citopatic. Anumiți viruși (de exemplu, virusul rubeolei) nu prezintă un efect citopatic. Acestea pot fi detectate prin interferența unui alt virus care poate provoca degenerarea celulelor infectate.
Fenomenul hemadsorbției. Multe celule infectate cu virusuri dobândesc abilitatea de a absorbi pe suprafața lor o varietate de celule roșii din sânge. Fenomenul hemadsorbției are mecanisme generale cu hemaglutinare și se manifestă în stadiile incipiente, înainte de manifestarea efectului citopatic, în absența sau expresia sa slabă.
"Reacția de culoare". Un indicator apare în mediul de cultură folosit pentru a menține celulele. Creșterea celulelor este însoțită de acumularea de metaboliți, de o schimbare a pH-ului mediului și de o schimbare a culorii indicatorului. Infecția culturilor cu un virus inhibă brusc metabolismul celular, iar mediul își păstrează culoarea originală.
Diagnosticarea rapidă. Pentru a identifica rapid infecția virală, s-au dezvoltat multe metode de diagnosticare rapidă, bazate pe detectarea virusului Ag. De exemplu, testul ELISA, care detectează virusurile de suprafață Ar, este folosit pe scară largă pentru diagnosticarea precoce a infecției HIV.
Determinarea cantitativă a virusurilor este realizată în două moduri - Studiul infecțioase și cuantificarea Ag virale. Determinarea titrului virusului infecțios este dependentă în mare măsură de metoda de cercetare cantitativă; y bacteriofag raportul infectivitatea particulelor este de aproximativ 1 (adică, fiecare particulă virală este capabil de a provoca infectie), acest raport este de 1:10 (uneori mai mare din cauza unor factori de rezistență acțiunea virusingibiruyuschego) pentru virusuri animale.
Definiția infectivity of viruses. Cea mai accesibilă formă de cuantificare este numărarea numărului de "plăci" virale. Testele infecțioase directe sunt utilizate pentru a determina doza infecțioasă (ID) sau doza letală (LD) a virusului în cauză (de obicei exprimată în lg). ID50 - diluție, infectând 50% din celule; LD50 este o diluție care ucide 50% din celulele sau animalele afectate.
Identificarea particulelor virale Ag și virale. Metoda cea mai comună este reacția cantitativă de hemaglutinare. Metoda se bazează pe capacitatea virușilor de a sorbi pe suprafața eritrocitelor animalelor și oamenilor. Microscopia electronică cantitativă este utilizată pentru a calcula numărul total de particule de virus (dar nu infecțioase) în obiectul investigat (de exemplu, lichid de cultură).
Studiul morfologiei virusului este posibilă numai cu ajutorul microscopiei electronice, unul la mai multe ori, această metodă nu este disponibilă din cauza lipsei unui astfel de dispozitiv costisitor și complex. Mai mult, mulți agenți patogeni sunt asemănători din punct de vedere morfologic, ceea ce reduce valoarea acestei metode. Metoda cea mai răspândită de microscopie a conținutului vezicula și extractele de țesuturi de vopsitorie (contrast negativ), urmat de numărarea RHK sau DNA conținând virusuri. Microscopia electronică vă permite să găsiți rapid orto- și Paramyxovirusilor în evacuarea tractului respirator, virusurile herpetice la un vezicule lichide și rotavirusurile în materiile fecale.
Metode serologice de identificare
Cu majoritatea infecțiilor virale, reacțiile imune care sunt folosite pentru diagnostic se dezvoltă. Reacțiile celulare sunt, de regulă, evaluate în teste de citotoxicitate a limfocitelor pentru agenți infecțioși sau celule țintă infectate sau determină capacitatea limfocitelor de a răspunde la diverse Ar și mitogene. În lucrările laboratoarelor practice, severitatea reacțiilor celulare este rar determinată. Au fost găsite mai multe metode de identificare a AT antivirală.
PH se bazează pe suprimarea efectului citopatogen după amestecarea virusului cu AT specific. Un virus necunoscut este amestecat cu antiseruri comerciale cunoscute și, după o incubare adecvată, este introdus într-un monostrat de celule. Absența decesului celular indică o nepotrivire între agentul infecțios și AT cunoscut.
Inhibarea hemaglutinării. RTGA este folosit pentru a identifica virușii care pot aglutina diferite celule roșii din sânge. Pentru a face acest lucru, mediul de cultură care conține agentul cauzator este amestecat cu un antiser comercial cunoscut și introdus în cultura celulară. După incubare, capacitatea culturii de hemaglutinare este determinată și, în absența acesteia, se face o concluzie privind incompatibilitatea virusului cu antiserul.
Inhibarea efectului citopatic prin interferența virușilor. Torus reacție fiind efectul citopatic capabil datorită interferenței virusului utilizat pentru patogen identifi-katsii, interferează cu celebrul virus CPE în cultura CHUV-tatea celulelor. În acest scop, mediul de cultură care conține virusul în studiu, ceea ce face ser comercial (de exemplu virusul rubeolei bănuit), incubat și infecta o a doua cultură; 1-2 zile în a face cunoscut virus citopatogen (de exemplu, orice echovirus). În prezența efectului citopatic concluziona că prima cultură a fost infectat cu un virus, aplicat respecta AT.
Imunofluorescență directă. Printre alte teste cel mai larg a găsit reacția de imunofluorescență directă (cea mai rapida, sensibila si reproductibile) .Naprimer, identificarea CMV efectului citopatic necesită cel puțin 2-3 săptămâni, iar utilizarea monoclonal marcat AT identificarea este posibilă după 24 de ore. Fiind dat un set de astfel de reactivi , acestea pot fi aplicate în cultura infectată cu virusul, se incubează, se spală și reactiv nu este obligat să examineze prin microscopie cu fluorescență (în permite să se identifice prezența fluorescentei klet infectate k).
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: