Ereditate, gene, ADN. Se pare că aceste cuvinte au încetat de mult să fie termeni științifici, au intrat în viața de zi cu zi și acum sunt familiarizați cu fiecare student de liceu, ca să nu mai vorbim de studenți. Dar majoritatea dintre noi nu am văzut niciodată nici un ADN, deși să vedem că este un lucru foarte real chiar și acasă. Într-una din laboratoarele genetice de pe perete atârnă, de exemplu, aici este o astfel de instrucțiune:
Cum se selectează ADN-ul
1. Găsiți ceva care conține o mulțime de ADN. De exemplu, mazărea verde (dar puteți ficatul de pui, laptele de hering sau ceapa).
2. Puneți în mixer aproximativ 100 ml (jumătate de cană) din acest produs, adăugați 1/8 linguriță de sare și 200 ml (sticlă) de apă rece. Bateți timp de 15 secunde. Mixerul vă va "găti" supa de celule de mazăre.
3. Întindeți amestecul printr-un filtru sau o bucată de nailon (stocarea este destul de potrivită). În pulpa obținută, se adaugă 1/6 din cantitatea (aceasta va fi de aproximativ 2 linguri) de detergent lichid (de exemplu, pentru feluri de mâncare) și se amestecă bine. Lăsați timp de 5-10 minute.
4. Se toarnă lichidul prin tuburi sau alte recipiente de sticlă, astfel încât să nu se umple mai mult de o treime din volum.
5. Se adaugă la fiecare tub pentru un pic, sau soluția de ananas sau lentile de contact de suc stors și ușor se agită, de cotitură și îndoire a tubului (dacă se agită prea puternic, rupe ADN-ul și nu vor vedea nimic).
6. Înclinați tubul și turnați lent puțin alcool etilic, astfel încât acesta să formeze un strat peste amestecul de mazare. Lăsați până când alcoolul și amestecul sunt egale. ADN-ul va pluti în sus sub formă de fulgi.
7. Cu un baston de lemn (creion), prindeți-le și examinați-le sub microscop.
Desigur, pentru oamenii de știință această instrucțiune este într-o oarecare măsură o glumă și niciuna dintre ele nu distinge ADN-ul în acest fel, dar între timp, dacă îl folosiți cu adevărat, totul se va dovedi! Randamentul ADN-ului va fi, totuși, mic și substanța - nu foarte pură, dar este foarte posibil să vedem fire lungi subțiri - cristale ADN - într-un microscop.
Ce se întâmplă cu mazărea verde sau cu ficatul de pui în timpul manipulărilor descrise și de ce, în analiza finală, ADN-ul este separat de toate celelalte substanțe, care sunt foarte multe în cușcă?
1. Selectați un obiect
2. Fragmentați țesutul de pe celule
este necesară pentru a rupe mecanic legătura între ele, de regulă, un efort mult mai puțin decât de a deteriora celula in sine: Țesătura mixer de la care vom obține divizări substanță eredității în celule separate. Și, ca și cu metoda noastră de izolare ADN-ului necesita mai mult sau mai puțin celule întregi, nedeteriorate, este clar că conserve de mazăre sau hering sărat pentru astfel de experimente nu funcționează - este mai bine să ia ceva proaspăt înghețat, dacă sunteți sigur că produsul este topită în timpul depozitării de mai multe ori.
O mică cantitate de sare trebuie adăugată la soluție, astfel încât celulele să nu se rupă înainte de timp: presiunea conținutului interior pe membrana celulară din interior este echilibrată de presiunea excesului de soluție salină.
3. Eliberăm macromoleculele
Nu vărsați prea multă soluție în recipient, mai sunt multe de turnat, în plus, dacă amestecul este în exces, va fi dificil de amestecat.
5. Suntem eliberați de proteine
Ce nu e în amestecul nostru! Cu toate acestea, proteinele sunt - mai ales, cu ea, ele formează complexele cele mai stabile cu ADN-ul. Există tehnici în care proteinele sunt eliminate din soluție în mai multe etape. De exemplu, unele dintre ele sunt ușor denaturate și precipitat prin adăugarea de soluții saline concentrate. In laborator, aceste tehnici funcționează bine, iar din sedimentul, cercetatorii sunt eliberate prin plasarea tuburilor, pentru câteva minute într-o centrifugă. După aceea, toate fragmentele mai mult sau mai puțin mari de celule, proteine denaturate și alte impurități sunt în partea de jos, formând un precipitat foarte dens și turnat într-un alt tub de testare, lichidul supernatant care conține acid nucleic în principal - ADN sau ARN - nu funcționează. Dar, la domiciliu, această etapă de purificare trebuie să rateze o parte din sacrificiul ne interesează substanța, - va rămâne un „prizonier al proteinei.“
Vom proceda imediat la purificarea ADN-ului din proteine reziduale cu enzime speciale care pot distruge aceste molecule. Aceste substanțe conțin sucul de ananas. Ei înșiși - aceeași proteină, astfel încât ananasul, din care sucul presat trebuie să fie în stare proaspătă: enzima nu este cea mai mică șansă să rămână neschimbate în compot sau alimente conservate. În ceea ce privește soluția de curățare a lentilelor, dacă o veți folosi - nu uitați să puneți o tabletă pentru a îndepărta depozitele de proteine! În sine, soluțiile pentru depozitarea lentilelor de contact nu conțin substanțe active - altfel ochii noștri nu ar fi afectați.
Faptul că enzimele au funcționat poate fi judecat prin reducerea vâscozității soluției. Dacă nu se întâmplă acest lucru, așezați amestecul într-un loc cald (aproximativ 37 ° C) timp de o jumătate de oră, uneori poate fi necesar să adăugați mai mult suc de ananas sau o soluție de curățare a lentilelor.
6. Am precipitat ADN-ul din soluție
Acum ADN plutește în soluție de la sine. Proteinele nu se agață de ea, chiar dacă epava a diferitelor molecule în amestec este încă o mulțime. În condiții de laborator, aceste părți nedorite îndepărtate, amestecând bine soluția cu fenol și / sau cloroform. Solvenții organici care pot lua proteine „peste“, mai grele decât apa, și, prin urmare, stratificarea ulterioară a amestecului într-o centrifugă se scufunda la fund după centrifugarea tuburilor din partea de jos sunt fenol și / sau cloroform cu proteinele dizolvate în ea și mai sus. - Faza apoasă care cuprinde Faza apoasă este colectată într-un tub separat și apoi funcționează cu o soluție relativ curată.
În absența centrifugelor și a solvenților organici, a căror funcționare necesită măsuri de securitate speciale, acest stadiu de curățare la domiciliu ar trebui să fie ratat și ADN-ul precipitat direct din soluția "murdară".
Notă o dată - pentru a înlocui vodca alcool etilic sau parfum imposibil dacă concentrația de alcool este scăzută și scade atunci când este amestecat cu faza apoasă până ADN 60- 65% în stare cristalină nu va merge. În parte, din acest motiv, aruncați alcool într-un tub care conține un amestec care conține ADN trebuie să fie atent, stratificându-l de sus. Apoi straturile inferioare de alcool parțial amestecat cu soluția de ADN va începe procesul de cristalizare a acizilor nucleici, și se ridică la suprafață (în cazul în care un alcool mai concentrat), sub formă de fulgi.
Dacă se toarnă alcool pe partea de sus nu va funcționa și toate fără speranță amestecate, apoi cu o cantitate mică de etanol nu reusesti, iar atunci când o mare începe să se cristalizeze, nu numai ADN-ul: în sedimentele va scădea și reziduuri de proteine, și altceva de la sursa celulelor.
7. Ce am obținut?
cristale pure ale ADN-ului seamănă cu bile de fibre încâlcite, dar nu uitați că puteți vedea exact substanța de cristal, nu macromolecule sale, și spune prin aspectul lor, care conține gene de acid nucleic izolat este, desigur, imposibil. Pentru a afla, trebuie să dizolvați din nou ADN-ul. Cu toate acestea, „citi“ secvența de nucleotide în casă, din păcate, este imposibil: necesită nu numai echipamente speciale, dar, de asemenea, reactivi scumpi.
Cu toate acestea, dacă ați examinat bine cristalele și le-ați uscat, puteți urmări modul în care ADN-ul se dizolvă. Se umflă la început, devenind ca o meduză și numai după câteva zile soluția devine omogenă. Procesul poate fi accelerat dacă tubul este adesea agitat.
Dorim succese genetiștilor începători și biologilor moleculari!
Trimiteți-le prietenilor: