Ordinul Ministerului Sănătății al URSS din 31.07.78 N 720 „ON imbunatati ingrijirea pacientilor cu boli chirurgicale purulente și consolidarea măsurilor de combatere a infecțiilor nosocomiale“
Anexa N 2. INSTRUCTIUNI de control bacteriologic SET măsuri de igienă în instituțiile medicale (secțiile chirurgicale, secțiile de psihiatrie și unitate de terapie intensivă)
1.1. Instrucțiunea privind controlul bacteriologic al unui complex de măsuri sanitar-igienice și controlul sterilității dispozitivelor medicale este destinată angajaților laboratoarelor bacteriologice și stațiilor de dezinfecție din cadrul sistemului Ministerului Sănătății, care efectuează un control bacteriologic.
<*> - Instrucțiunea a fost elaborată de Institutul de Cercetare Științifică de Dezinfecție și Sterilizare al Ministerului Sănătății al URSS.
1.2. laborator bacteriologic al stațiilor sanitar-epidemiologice și de dezinfectare sunt monitorizate cel puțin de două ori pe an, laboratoare bacteriologice ale instituțiilor medicale controlate condiții de igienă (contaminarea diferitelor obiecte și aer), o dată pe lună, și controlul sterilității instrumentelor, pansamente, lenjerie chirurgicale, de mână chirurgi si piele câmp chirurgical (opțional) - 1 dată pe săptămână.
1.3. Următoarele sunt obiectivele cercetării în domeniul monitorizării bacteriologice:
- diverse obiecte ale mediului;
- un sistem de transfuzie de sânge cu mai multe utilizări.
- sonde, catetere, bugete, mănuși de cauciuc și alte produse din cauciuc și materiale plastice;
- suturi chirurgicale pregătite pentru utilizare;
- Mâinile chirurgilor și pielea câmpului de operare.
2.1. Studiul contaminării microbiene a aerului.
2.1.1. Studiul bacteriologic al aerului include:
- determinarea conținutului microbian total în 1 cm3. m de aer.
- Determinarea conținutului de Staphylococcus aureus în 1 cm3. m de aer.
2.1.2. Eșantionarea aerului pentru examinarea bacteriană se efectuează în următoarele încăperi:
- departamentele și secțiile de resuscitare și terapie intensivă și alte spații care necesită condiții aseptice.
2.1.3. Eșantioanele de aer sunt luate prin metoda aspirației folosind aparatul Krotov.
Viteza aerului este de 25 de litri pe minut. Cantitatea de aer extrasă ar trebui să fie de 100 de litri pentru a determina numărul total de bacterii și 250 de litri pentru a determina prezența Staphylococcus aureus. Studiul de aer prin metoda sedimentării este permis în cazuri excepționale.
2.1.4. Pentru a determina conținutul total de bacterii în 1 cc. m de prelevare de aer se efectuează pe agar nutritiv 2%. Culturile sunt incubate la 37 ° C timp de 24 de ore, apoi lăsate timp de 24 de ore la temperatura camerei, numără numărul de colonii crescute și recalculate pentru 1 cu. m de aer. Dacă coloniile de ciuperci de mucegai au crescut pe plăcile de agar nutritiv, ele sunt numărate și numărate pentru 1 cu. m de aer. În protocol, numărul de mucegaiuri este indicat separat.
Notă: Când deplasați dispozitivul Krotov dintr-o cameră în alta, suprafața acestuia este tratată cu o soluție de dezinfectant. Masa, articulațiile interne și capacul dispozitivului de pe partea interioară și exterioară sunt șterse cu alcool (70 °).
2.1.5. Pentru a determina prezența Staphylococcus aureus, eșantionarea se efectuează pe agar de sare galbenă (JSA). Plăcile sunt plasate într-un termostat la 37 ° C timp de 24 de ore și ținute timp de 24 de ore la temperatura camerei. Coloniile suspecte de stafilococ sunt supuse unei microscopii obligatorii și identificării ulterioare.
Cu agar vitelline-sare sunt colonii stafilococice întâi îndepărtate care formează halo prismatica în jurul coloniilor (reacția letsitovitellaznaya pozitiv) este supus un studiu suplimentar și colonii de asemenea pigmentate letsitovitellaznoy cu reacție negativă. colonii suspecte sunt subcultivate pe plăci cu agar cu sânge sau lapte. Studii ulterioare se efectuează pe schema lor.
Schema de studiu bacteriologic pentru stafilococ.
Semănarea pe mediu opțional (sare de gălbenuș, lapte-sare sau agar de sare de lapte). Mediul de însămânțare este păstrat într-un termostat la 37 ° C timp de 2 zile sau o zi într-un termostat și încă 24 de ore în lumină la temperatura camerei.
2-3. A doua sau a treia zi.
Înfășurarea pe agar înclinat pentru investigarea ulterioară a cel puțin 2 colonii suspectate de stafilococ aureus. Pentru studiu, coloniile, care dau o reacție lecitovitellară pozitivă, în primul rând, sunt oprite. Dacă nu există astfel de colonii pe plăci, coloniile pigmentate care sunt similare în morfologie cu stafilococul sunt supuse unor investigații suplimentare. Dacă există prezența simultană a coloniilor de stafilococi pe plăcile care diferă în pigment, cel puțin două colonii de diferite tipuri trebuie deșurubate.
Tuburile de test cu inoculare sunt plasate într-un termostat la 37 ° C timp de 18-20 ore.
4. A patra zi.
După o incubare de 24 de ore, se verifică morfologia, proprietățile tinctoriale (pete Gram) și prezența activității de coagulare a plasmei în tulpinile izolate. Trebuie remarcat faptul că natura creșterii culturii pe agar înclinat într-o serie de cazuri face posibilă "anticiparea" apartenenței sale la speciile de Staphylococcus aureus sau stafilococ epidermal. Primul, ca regulă, dă o creștere abundentă, uniformă și suculentă, a doua - o creștere foarte slabă și inegală în cursul însămânțării.
Gramația Gram este efectuată printr-o metodă convențională. Sub microscop, pete de gram de Staphylococcus este un cocci violet-albastru, aranjat în grupuri sau grupuri mici ("dantelă").
Activitatea de coagulare în plasmă este verificată în reacția de coagulare în plasmă (RCP).
Având în vedere rezultatele RCP și activitatea lecitovitelazei în 70-75% din cazuri, în a patra zi a studiului se poate confirma că tulpina izolată aparține tipului de Staphylococcus aureus și a fost dat un răspuns adecvat. Diagrama prezintă posibilele combinații ale rezultatelor determinării activității de coagulare a plasmei și lecitovitelazei.
Dacă cultura are doar plazmokoaguliruyuschey sau activitate doar letsitovitellaznoy, este necesară răspunsul final pentru identificarea altor semne de patogenitate (fermentare manitol în condiții aerobe - AFM sau activitate DNAse).
În aceste cazuri, răspunsul este dat în funcție de rezultatele obținute în determinarea caracteristicilor numite.
Dacă este necesar, o reacție pentru a determina activitatea de DNază sau fermentarea anaerobă a manitolului poate fi efectuată în a 4-a zi a studiului.
Determinarea antibiogramei se efectuează numai după izolarea culturii pure, în funcție de indicații (alegerea metodei de tratament etc.).
Culturile izolate de Staphylococcus aureus sunt supuse fagotipării.
Contabilizarea rezultatelor fagotipiei, determinarea sensibilității la antibiotice, activitatea de DNază. Problema finală a răspunsului.
Criterii de evaluare a contaminării microbiene a aerului în clinicile chirurgicale
2.2. Studii de contaminare microbiană a obiectelor de mediu.
2.2.1. Examenul bacteriologic de contaminare microbiană a obiectelor de mediu prevede identificarea Staphylococcus Pseudomonas aeruginosa, bacterii coliforme și aeromanad (strict pe probele). Eșantionarea de pe suprafețele diferitelor obiecte se efectuează prin spălare.
2.2.2. spălările Luand produc tampon steril de bumbac pe un băț, montat în tub sau tifon, 5x5 cm, în pungi de hârtie sterilizate sau în vase Petri. Pentru a umezi tampoanele în tuburi cu tampoane, se toarnă 2,0 ml soluție salină sterilă. Când se folosesc servetele, o soluție fiziologică sterilă este administrată în tuburi sterile de 2,0 ml. Șervețelul este confiscat cu forceps steril, umezit cu soluție fiziologică dintr-un tub de testare, după ștergerea obiectului studiat este plasat în același tub de testare.
2.2.3. Atunci când se controlează obiecte mici, bulele sunt preluate de pe suprafața întregului obiect. Atunci când se controlează obiecte cu o suprafață mare, se efectuează proiecții în mai multe locuri ale obiectului investigat, cu o suprafață de aproximativ 100-200 metri pătrați. cm.
2.2.4. Pentru a izola stafilococilor face semănat direct pe un vas Petri cu agar vitelin-sare (vezi. Schema de cercetare asupra Staphylococcus aureus). In plus, ca mediu de stocare utilizat bulion cu 6,5% clorură de sodiu bulion cu glucoză 1%, a fost turnat în eprubete în 0,5 ml, în care se însămânțează la 0,2-0,3 ml de spălare fluid. Tuburile inoculate au fost incubate la 37 ° C timp de 20-24 ore, după care fac semănat pe VSA (vezi. Diagrama de studiu de Staphylococcus aureus).
2.2.5. Pentru a identifica bacteriile din grupul E. coli, însămânțarea se efectuează pe mediul de îmbogățire, pentru care un tampon (șervețel de tifon) este imersat în bulion de 10-20% biliar sau mediu Kessler. O zi mai târziu, incubarea la 37 ° C se face prin transferul la mediul Endo. Coloniile suspecte pe mediul Endo sunt microscopate și încrucișate în cea de-a doua probă de fermentație, mediul Hissa cu glucoză. Mediul este lăsat să stea timp de 24 de ore la 43 ° C.
Notă: Când se utilizează bile de porc pentru prepararea bulionului biliar, concentrația bilei trebuie să fie de 20 de ori mai mică.
2.2.6. Pentru a identifica Pseudomonas aeruginosa, culturi speciale nu pot fi produse. De obicei, coloniile Pseudomonas pot fi detectate pe agar sanguin sau pe mediu Endo. Coloniile suspecte de Pseudomonas aeruginosa sunt încrucișate pe un agar tivit care conține 2-5% glicerol sau manitol. Coloniile de Pseudomonas aeruginosa dau pe suprafața agarului de toamnă o creștere abundentă cu o nuanță verzui, o consistență uleioasă cu un miros caracteristic de miere. Cultura selectată este colorată cu Gram, proprietățile hemolitice microscopate sunt determinate prin însămânțare pe o ceașcă de agar sanguin.
O listă indicativă a obiectelor supuse controlului bacteriologic:
A. Sala de anestezie
1. Tubul de incubație
2. Masca aparatului de anestezie
3. Aparat de anestezie cu teasc
4. Tubul ondulat
7. Sac de respirație
8. Mâinile anesteziologilor - resuscitatori, surori -
Se amestecă toate componentele mediului, cu excepția glucozei și a acidului tioglicolic.
Cistina este pre-dizolvată într-o cantitate mică de apă distilată, cu adăugarea treptată de soluție de hidroxid de sodiu 10-20% până când este complet dizolvată. Amestecul se alcalinizează cu soluție de hidroxid de sodiu 10% până la pH 8,0-8,2, se fierbe într-un cazan cu o manta de abur sau la foc deschis, cu agitare constantă până la topit cu agar de 5-10 minute. Puteți autoclava pentru 20 de minute la 100 de grade. apoi se adaugă apă fierbinte la volumul inițial, se adaugă glucoză și acid tioglicolic, se filtrează printr-o țesătură, pH-ul este setat la 7,2 - 7,3. Se adaugă o soluție de resazurină, se amestecă și se distribuie în tuburi sterile de 20 ml. Sterilizați timp de 20 de minute la 120 °.
Mediul tiooglicolic poate fi depozitat înainte de însămânțare, protejându-l de lumină, la temperatura camerei timp de cel mult 7 zile de la data preparării.
Notă: 1. Este permisă prepararea mediului fără soluție de resazurină de sodiu.
2. Utilizarea altor soiuri de agar este permisă, dar cu o cantitate pre-viciată.
- principal
- Ordinul Ministerului Sănătății al URSS din 31.07.78 N 720 „ON imbunatati ingrijirea pacientilor cu boli chirurgicale purulente și consolidarea măsurilor de combatere a infecțiilor nosocomiale“
Articole similare
-
Utilizând aplicația tuneit, setând sunetul cu telefonul smartphone, funcția de notificare de la
-
Cum se închide aplicația moderne ui (metro apps) pentru ferestrele 10, 8
Trimiteți-le prietenilor: