Metoda Express pentru determinarea reactivului universal standard într-un tub de testare fără încălzire
Pentru a investiga posibila utilizare incoagulated de sânge proaspăt luat de la un deget (sau venă) imediat înainte de test, conservate sau sânge fără tratare prealabilă, precum și eritrocitele din tub, după formarea unui cheag și ser de sedimentare.
Procedura de efectuare a reacției. Testul se efectuează în tuburi de centrifugare cu un volum de cel puțin 10 ml. Pe fundul tubului făcut de o picătură de reactiv universal standard care constituie Rh grupa ser AB (IV), Diluat soluție 33% de dextran. Apoi se adaugă o picătură de sânge (sau eritrocite). Rotitoare conținutul tub circular frotiu de pe suprafața sa interioară, astfel încât conținutul răspândit de-a lungul pereților. Aceasta accelerează foarte mult aglutinarea și o face lobată mare. Aglutinarea pe peretele tubului are loc, de obicei, în primul minut, dar formarea unui complex stabil antigen-anticorp și o aglutinare limpede trebuie monitorizați timp de cel puțin 3 minute. Apoi, pentru a exclude agregarea nespecifică de eritrocite într-o eprubetă se adaugă 2,3 ml de soluție fiziologică și se agită timp de unu inversând tuburile de două ori (fără agitare!).
Interpretarea rezultatelor. Prezența aglutinării (fulgi mari pe fundalul unui fluid iluminat) indică un accesoriu rhesus pozitiv al sângelui examinat. Absența aglutinării (într-un tub de testat un lichid roz omogen colorat) indică o probă de sânge negative negativ Rh.
Metode de laborator pentru determinarea factorului Rhesus
Pentru a determina afinitatea rhesus a sângelui pacientului într-un laborator, se folosesc patru metode principale.
Metoda de aglutinare în mediu salin
Se utilizează seruri speciale care conțin anticorpi anti-rhesus compleți. Eritrocitele sub formă de suspensie de 2% într-o soluție izotonică de clorură de sodiu sunt combinate în tuburi cu zer antiresus. Tuburile sunt plasate timp de 1 oră într-un termostat la o temperatură de 37 ° C, după care precipitatul de celule roșii din sângele de la fundul tubului este examinat cu o lupă și luat în considerare în forma sa. În cazul în care un rezultat pozitiv (Rh +) precipita are un model caracteristic sub formă de filamente sau graininess. Cu un negativ (Rh-) localizat precipita uniform și are forma prezentată în mod corect cerc.
Metoda de aglutinare în prezența gelatinei
B două tuburi amplasate la 0.02-0.03 ml eritrocite de sedimente investigate. Apoi, primul tub s-a adăugat 2 picături (0,1 ml), soluție de gelatină 10% și 2 picături (0,1 ml) de ser anti-rhesus, al doilea (de control), tubul - 2 picături (0,1 ml), soluție de gelatină 10% și 2 picături (0,1 ml) de soluție salină.
Conținutul este ușor amestecat. Tuburile sunt apoi incubate într-un termostat la o temperatură de 45-48 ° C timp de 30 minute, după care se adaugă 5-8 ml de soluție fiziologică și tuburile sunt inversate de 1-2 ori pentru amestecare.
Rezultatul este luat în considerare prin vizionarea tuburilor cu lumină cu ochiul liber sau printr-o lupă. Dacă eritrocitele sunt Rh-pozitive, va avea loc aglutinarea lor. Lipsa aglutinării indică faptul că sângele testat este Rh-negativ. În tubul de control, ar trebui să lipsească aglutinarea eritrocitară.
Testul antiglobulin indirect (reacție Coombs)
Această reacție este cea mai sensibilă pentru detectarea anticorpilor incompleți la auto- și izoantigeni ai eritrocitelor. De regulă, se recurge atunci când există dificultăți în determinarea accesoriului Rh rhesus, asociat cu rezultate fuzzy obținute prin alte metode de investigare. Reacția se bazează pe utilizarea serului antiglobulină.
In tratamentul Rh-pozitiv eritrocite anticorpi anti-Rh incomplet vine să le învăluia, în legătură cu sensibilizarea antiglobulină ser care aglutinează eritrocite sensibilizate cum este globuline anticorp.
Tubul este realizat din ser Rh și eritrocite spălate cu soluție salină a fost plasat timp de 1 oră într-un incubator la 37? C, apoi se spală complet eritrocite. Următoarea etapă de reacție se desfășoară pe un plan. O picătură de globule roșii este amestecată cu o cantitate egală de ser antiglobulină și rezultatul este luat în considerare. Prezența aglutinării este un indicator care arată că eșantionul de sânge testat este Rh-pozitiv. Dacă nu există aglutinare, atunci sângele testat este Rh-negativ.
Reacția cu anticorpi monoclonali anti-D
O picătură mare (0,1 ml) de anticorpi monoclonali anti-D și o picătură mică (0,01 ml) din sângele testat sunt amestecate pe placă.
Reacția a fost observată timp de 3 minute. Atunci când se amestecă anti-D-MKA cu eșantioane de eritrocite Rh pozitive, se observă o aglutinare a petalelor care avansează rapid. Dacă sângele este rhesusotritsatelnaya, aglutinarea este absentă.
48. Testul compatibil pentru factorul Rh.
Echipamente: sânge donator, ser primitor, soluție de poliglucin 33%, tub de centrifugare, soluție fiziologică de clorură de sodiu, pipete.
a) Din veninul receptorului, luați 3-5 ml de sânge, centrifugați.
b) La fundul pipetele tub de centrifugă aplică diferite 2 picături de ser pacient, 1 picătură de sânge și 1 picătură de soluție poliglyukina 33%.
c) Se amestecă conținutul prin înclinarea tubului aproape în poziția orizontală și rotirea lentă în jurul axei, distribuind conținutul de-a lungul pereților într-un strat uniform.
d) Continuați procedura timp de 5 minute.
e) După 5 minute se adaugă 3-4 ml soluție fiziologică de clorură de sodiu.
e) Se amestecă conținutul prin înclinarea tubului de 2-3 ori pe un plan orizontal (nu se agită!).
Absența aglutinării, colorarea uniformă a tubului mărturisește compatibilitatea cu rhesus a sângelui donatorului și ale recipientului; prezența aglutinării - incompatibilitatea donatorului de sânge și a recipientului cu factorul Rh
După efectuarea primului test, este necesar să se efectueze un test pentru compatibilitatea cu Rh. Pentru aceasta, există 2 metode disponibile - reacția în mediul seric și în gelatină.
Prima metoda: in vasul Petri aplicat 1-2 picături de ser pacient și o mică picătură de sânge, după care a fost introdus timp de 10 minute într-o baie de apă (46
+48 ° C). Prezența aglutinării indică incompatibilitatea.
A doua metodă: o picătură mică de sânge donator este plasată pe fundul tubului, se adaugă 2 picături de soluție de gelatină 10% încălzită și 2 picături de ser din sânge ale pacientului. După 10 minute de incubare într-o baie de apă la. temperatura + 46- + 48 ° C, se adaugă 5 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu încălzită în tub. Prezența aglutinării evidențiază incompatibilitatea sângelui donatorului și ale beneficiarului.
Trebuie remarcat faptul că anticorpii izolați și anticorpii altor sisteme sunt detectați prin aceleași metode ca și anticorpii anti-Rh și unii - ca anticorpi ai sistemului ABO. Prin urmare, incompatibilitatea sângelui donator din acești anticorpi poate fi detectată atunci când aceste teste sunt efectuate pentru compatibilitate.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: