ISOPHERMANTS (ISOSEMES)
Când spunem „malat dehidrogenază“ sau „glucoză-6-fosfatazei“, ele, de obicei, se referă la o proteină care are activitate specifică formentativnoy, dar în realitate aceste nume includ toate proteinele care catalizează oxidarea malat la oxaloacetatului sau hidroliza glucozo-6-fosfat pentru a forma și glucoză.
În special, după izolarea malat dehidrogenază din diferite surse (de ficat de șobolan, E. coli) au arătat că enzimele ficatului și enzima din E. coli, care catalizează aceeași reacție, diferă în multe privințe în proprietățile lor fizice și chimice. Formele fizice distincte de enzime care au același tip de activitate catalitică poate fi prezent în diferite țesuturi ale aceluiași organism, diferite tipuri de celule și țesuturi unice, chiar și într-un organism procariot, cum ar fi E. coli. Această descoperire a fost făcută prin utilizarea unor metode electroforetice de separare proteine, prin care s-au detectat activitate enzimatică specifică electroforetic forme diferite.
Valoarea diagnosticului izoenzimelor
Izoenzimele de lactat dehidrogenază serică sunt detectate după electroforeză pe geluri de amidon, agar sau poliacrilamidă. La această valoare, izozimele poartă o sarcină diferită și sunt distribuite pe electroforegrama în cinci locuri diferite. În plus, izozimele pot fi detectate datorită capacității lor de a cataliza reducerea coloranților incolori într-o formă colorată insolubilă.
Un set tipic de reactivi pentru detectarea izoenzimelor dehidrogenazei include:
1) substrat reconstituit (de exemplu, lactat);
3) colorantul într-o formă oxidată (de exemplu, sarea de nitrotetrazoliu albastru);
4) purtătorul de electroni de la NADH la colorant [de exemplu, fenazinmetasulfat (FMS)];
5) tampon; ioni de activare (dacă este necesar).
Lactatul dehidrogenază catalizează transferul a doi electroni și un ion de la lactat la
Fig. 7.8. Reacția catalizată de β-lactat dehidrogenază.
(Figura 7.8). Dacă electroforetograma pulverizează amestecul de mai sus și apoi incubate cu reacția de transfer de electroni conjugat va avea loc doar în acele locuri unde există lactat dehidrogenază (fig. 7.9). Densitatea culorii relative a benzilor poate fi cuantificat de un fotometru de scanare (fig. 7.10). Izoenzimă cu taxa cel mai negativ desemnat.
Natura fizică a izoenzimelor
Enzimele oligomerice formate de diferiți protomeri pot fi reprezentați prin mai multe forme. Adesea, un țesut specific produce în principal unul dintre protomeri. Dacă o enzimă oligomerică activă (de exemplu, tetramer) poate fi construită din astfel de protomeri în diferite combinații, se formează izoenzime.
Izoenzimele de lactat dehidrogenază diferă la nivelul structurii cuaternare. Molecula oligomerică a lactatului dehidrogenazei (greutate moleculară 130.000) constă din patru protomeri de două tipuri, H și M (ambii cu o greutate moleculară de aproximativ 34.000). Activitatea catalitică este posedată numai de molecula tetramerică.
Fig. 7.9. Localizarea lactatului dehidrogenazei pe electroforegrame utilizând sistemul de reacții conjugate.
Dacă ordinea conectării protomerilor nu contează, atunci protomerii pot fi aranjați în cinci moduri:
Markert a luat condiții pentru distrugerea și reconstrucția structurii cuaternare și reușește să afle relația dintre izoenzime LDH. Divizarea și reconstrucția lactat dehidrogenazei I, și 15 nu conduc la formarea de noi izoenzime. În consecință, aceste două izozime conțin doar un singur tip de protomer. Când aceeași procedură a fost supusă la 1 amestec lactat dehidrogenazei, și 15 au fost de asemenea formează 12, 13 și 14. Raportul dintre izoenzime corespunde următoarei compoziției subunitar:
Sinteza H- și M-subunități, determinate de diferiți loci genetice și sunt exprimate diferențiat în diferite țesuturi (de exemplu, inima si musculare scheletice).
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: