Exprimarea moleculelor de adeziune celulară a complexului de cadherină și rolul acestora în diagnosticul de

Exprimarea complexelor molecule de adeziune celulară caderină și rolul lor în diagnosticul în dermatozele buloase autoimune

Makhneva N.V. 1 Beletskaya L.V. 2







1 Instituția de Stat Institutul Regional de Cercetare Științifică și Clinică din Moscova. MF Vladimirsky, Moscova

2 FGU "Centrul Științific Federal al Transplantului și al Orgului Artificial. ak. VI Shumakov »Ministerul Sănătății și Dezvoltării Sociale din Rusia, Moscova

Cadherinele sunt un grup divers de proteine ​​glicozilate dependente de calciu. Anomaliile expresiei sau disfuncționalității acestor molecule conduc la consecințe distructive grave. În dermatozele buloase autoimune, a fost dezvăluită o încălcare a gradului de exprimare al complexului cadherin până la dispariția sa de la localizarea normală și apariția expresiei sale perverse în regiunea membranei bazale epidermice. Modificările evidențiate în expresia și localizarea caderinelor indică faptul că, sub influența factorilor etiologici și patogenitic, funcția de o genă trece la alte gene, adică când suprimați pe cineva și îi activați pe alții. Informațiile obținute pot fi folosite ca markeri de diagnostic suplimentar în diagnosticul diferențial al dermatozei bullous autoimune.

metoda de imunofluorescență indirectă

autoimune dermatozele buloase

3. Șoarecii lipsiți de desmocollin 1 prezintă fragilitatea epidermică, însoțită de defecte de barieră și diferențiere anormală,

M. Chidgey, C. Brakebusch, E. Gustafsson, A. Cruchley, C. Haill, S. Kirk, A. Mernitt, A. North, C. Tselepis, J. Hewitt //

Cadherinele reprezintă cel mai divers grup de proteine ​​glicozilate dependente de calciu. Acestea sunt implicate în principal în interacțiunile intercelulare, oferind aderența între două molecule identice care sunt exprimate pe suprafața a două celule de același tip [2, 5]. Domeniul citoplasmatic al acestor molecule joacă un rol important în legătură cu proteinele citoscheletului, contribuind la conservarea formei celulelor [6]. În plus față de contactul fizic, care este furnizat de cadherine între două celule, acestea facilitează transmiterea unui număr de semnale prin structura citoscheletului, controlând creșterea și diferențierea celulelor [5]. În piele, moleculele de adeziune asigură o organizare complexă care implică epiteliul, dermul, vasele, nervii, glandele. Și orice schimbări legate de anomalia de expresie sau disfuncție a acestor molecule pot duce la consecințe distructive grave [2, 3, 9].

Scopul studiului a fost de a determina gradul de exprimare a complexului de cadherină în dermatozele buloase autoimune și posibilitatea utilizării datelor obținute ca marker de diagnostic suplimentar pentru aceste boli.

Materiale și metode de investigare

Lucrarea a fost efectuată pe baza unui examen clinic și a unui studiu al materialului de biopsie al pielii pacienților cu dermatoze bullous autoimune.

Studiul gradului de exprimare complex caderinei realizat prin imunofluorescență indirectă utilizând anticorpi monoclonali (MAbs) șoarece complex anti-caderină, caderina anti-pan (SIGMA, SUA), la 47 de biopsii de piele intacte clinic si biopsii din zonele afectate de 45 de pacienți, dintre care 23 pacienți cu autoimună pemfigus vulgaris (pemfigus 11 pacienti, 9 - pemfigus seboreic, pemfigus vegetant un pacient, una - pemfigus frunză one - praneoplasticheskoy pemfigus), 16 pacienți cu bulos pemfigoid, 2 - liniar dependentă de IgA dermatozele buloase, 4 - epidermoliza buloasă dobândită. Ca secțiuni de control criostat de diferite tipuri de țesături. Felii pielea indivizilor sănătoși, pacienții cu cardiomiopatie dilatativă, felii de rinichi uman și inima felii de carne de vită. În această expresie complexă a caderinei a fost detectată în spațiile intercelulare ale bazale și straturile spinos ale epidermei (figura a), un folicul pilos în peretele derm arteriolare, timpane în cardiomiocite în zonele de contact celulă-celulă din tubii renali și glomeruli.

Sub anestezie locală soluție 2,0% de novocaină efectuat biopsie de piele (de la afectate clinic si zonele neafectate) de dimensiuni de 0,5 x 0,5 cm. Bucăți de țesut au fost congelate la -20 ° C, secțiuni criostat serie 4-5 micrometri în grosime au fost preparate într-un criostat microtom (-20 ° C) și utilizat într-un format fix (100% th rece acetonă (4 ° C) timp de 10 min). Secțiunile au fost apoi spălate cu soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), pH 7,0-7,4, timp de 3-5 minute. Când MKAT a fost aplicat pe secțiuni, preparatele au fost ținute timp de 18 ore la 4 ° C într-o cameră umedă. După clătirea timp de 3-5 min PBS (pH 7,0-7,4) secțiuni luminescente au fost tratate ser împotriva șoarece imunoglobulina ((Institutul de Epidemiologie si Microbiologie, Academia Rusă de Științe Medicale N.G.Gamalei ;. IMTEK, Moscova) pentru 50- 60 min într-o cameră umedă într-un termostat la 37,0-37,2 ° C, se spală din nou cu PBS 3-5 minute și se încheie sub lamelei într-un glicerol neutru 60%. medicamente studiat folosind un microscop cu fluorescență LEITZ Laborlux S (LEIKA) Preparatele au fost fotografiate pe film RF-3 cu lentilă x40 și ocular x3.

felii Partea utilizate în formă nefixată pentru a detecta imunoglobulina fixă ​​în spațiile intercelulare și în zona epidermei ale membranei bazale în pemfigus autoimune și dermatozele autoimune buloase cu leziuni ale joncțiunii dermo-epidermică (pemfigoid bulos, dermatozele buloase IgA dependentă liniar, epidermoliza buloasă dobândită), respectiv. secțiuni criostat, fixate cu 96 ° etanol, colorate cu hematoxilină și eozină pentru controlul morfologic scop.

Rezultatele studiului și discuția acestora

In studiul clinic ca intact si pielea afectată de 23 pacienți cu diferite forme de pemfigus găsite violarea expresiei complexului caderină. Astfel, în toate cele 11 de cazuri studiate pemfigus vulgaris, împreună cu ariile de exprimare caderinei normale în spațiile intercelulare, au dezvăluit dispariția acestei localizare la mascare sau exprimarea simultană a materialului -caderina pozitiv în stratul cornos și / sau pe suprafața pielii (figura b). În plus, în 5 cazuri detectate suplimentar peritsitoplazmaticheskaya sau expresie perinuclear în diferite elemente celulare bazale și straturi spinos cu zonă de reacție simultană în membrana bazală a epidermei. O imagine imunohistochimică similară a fost observată în cazurile de pemfigus vegetativ (1) și paraneoplastic (1). Dacă în cazul vegeteze pemfigus marcat doar expresia caderinei perinuclear în diferite elemente celulare, în cazul pemfigus paraneoplazic - site-uri suplimentare și în zona membranei bazale a epidermei. În plus, în ambele cazuri există o clustering de material cadherin-pozitiv în stratum corneum și sechestrarea acestuia pe suprafața pielii.







Interesant este faptul că expresia complexului cadherin cu pemfigul vulgar a fost observată în mod predominant (în 8 cazuri din 11) în spațiile intercelulare ale straturilor bazale și ale țesuturilor epidermice. În același timp, intensitatea luminiscenței în reacția imunohistochimică a fost diferită de exprimarea exprimată a complexului cadherin până la absența completă în locurile în care vezica intraepidermală a început să se formeze. În cazurile de formare a vezicii bazale nazale intraepidermale, a fost descoperit un fenomen paradoxal: o creștere a expresiei caderinelor în straturile suprabasale care constituie acoperirea vezicii urinare.

În toate cele nouă cazuri studiate pemfigus seboreice clinic zone intacte cât și în leziuni ale pielii relevat o imagine clară tulburări de expresie a caderinei: acestea sunt de la un nivel de expresie diferit în spațiile intercelulare ale bazale și straturile spinos până la dispariția completă din acumularea unui material specific în stratul cornos și reținerea acesteia pe suprafața pielii. În locul formării veziculei intraepidermal, la fel ca în cazul pemfigus vulgaris, marcată prin exprimarea caderinei exprimate în straturile suprabazale ale epidermei, anvelopa constitutivă. În plus, în 5 cazuri din 9 detectate în plus expresia perinuclear în diferite elemente celulare, iar în alte 3 cazuri - în regiunea membranei bazale a epidermei.

În zonele care formează bule intraepidermal observate pierderea joncțiunilor intercelulare pe secțiuni mai lungi ale epidermei, cu toate straturile sale și formarea atât nadbazalnyh (adâncime) și suprafața (la nivelul stratului granular) bule intraepidermal. Este interesant faptul că unul și același pacient poate observa simultan formarea de blistere la diferite nivele ale straturilor epidermei. Expresia amplificare caderina au fost detectate în citoplasmă keratinocitelor straturilor superioare ale epidermei, iar în unele cazuri (3 cazuri), ambele porțiuni din regiunea membranei bazale a epidermei.

Cu studiul simultană a zonelor intacte si afectate clinic doi pacienti pemfigus seboreice a relevat un model identic Immunomorphological - expresie complexă slăbire caderinei pe suprafața bazale și straturile spinos peritsitoplazmaticheskoy sau expresia perinuclear în celule individuale și sechestrarea elelementah celulare a materialului specific la suprafața pielii. Mai mult decât atât, într-un caz relevat expresia în zona membranei bazale epidermice.

În cazul pemfigus dispariția caderinei expresia moleculei de adeziune în domenii largi ale epidermei frunzelor menționate, în ciuda patologiei morfologice de localizare clasica intraepidermal superficial de vezică urinară, cu expresie proeminent cadherin în acesta complex.

In studiul secțiunilor criostat ale pielii pacientilor cu pemfigoid bulos, în toate cele 16 de cazuri studiate au prezentat exprimare defectuoasa a complexului caderină. Astfel, în majoritatea cazurilor (14 din 16), împreună cu porțiuni caderina conservare pe suprafața celulelor epidermei dispariției sau mascare exprimarea moleculelor de adeziune la expresia lor în zona membranei bazale a epidermei și zona perinucleara elementelor individuale de celule descoperite aglomerat materialul kadgerin- pozitiv sub excitat strat și sechestrarea pe suprafața pielii. Exprimarea complexului caderinei în zona membranei bazale a epidermei observate în 10 cazuri din 14, iar în locul formării de bule subepidermice de asemenea - pe capac și fund. Expresia cea mai pronunțată observată la subepidermice vezical anvelopei (în desen). În două cazuri, bulos caderina pemfigoid expresie complexă nu a fost observată în oricare dintre structurile epidermice.

Exprimarea moleculelor de adeziune celulară a complexului de cadherină și rolul acestora în diagnosticul de
Exprimarea moleculelor de adeziune celulară a complexului de cadherină și rolul acestora în diagnosticul de

Exprimarea moleculelor de adeziune celulară a complexului de cadherină și rolul acestora în diagnosticul de
Exprimarea moleculelor de adeziune celulară a complexului de cadherină și rolul acestora în diagnosticul de
Exprimarea moleculelor de adeziune celulară a complexului de cadherină și rolul acestora în diagnosticul de

Exprimarea complexului de cadherină. Tratamentul cu anticorpi monoclonali
la pan-cadherin. Metoda indirectă de imunofluorescență. X400:
a - secțiunea de criostat a unei persoane practic sănătoase. Exprimarea complexului cadherin în desmosomii spațiilor intercellulare (săgeată) ale epidermei; b - e: secțiuni criostatate ale zonei cutanate intacte clinic a pacienților cu dermatoze bullous autoimune. O mulțime de suprimare normală exprimare cadherin intercalate cu regiuni de expresie (săgeata) desmozomilor în spațiile intercelulare din pemfigus autoimună (b); c - pemfigoidul bulos. Exprimată expresia cadherinei pe capac (săgeată) a vezicii subepidemice; g - dermatoza buloasă dependentă de IgA liniară. Reacție în regiunea membranei bazale a epidermei (săgeată) cu sechestrarea unui material specific
pe suprafața pielii; d - epidermoliza buloasă dobândită. Pronunțată reacție
pe partea dermică (săgeată) a vezicii urinare subepidemice

În cele două cazuri studiate, dermatoză buloasă IgA dependentă liniar marcat expresia perinucleara a moleculelor de adeziune în unele keratinocitele și zona membranei bazale epidermice sechestrării materialul caderina pozitiv pe suprafața pielii (Figura g). O imagine similară imunohistochimică a fost observată în 4 cazuri de epidermoliză buloasă dobândită. În acest caz, expresia moleculelor de adeziune se găsește în părțile epidermale și dermice la locul de laminare a compusului dermo-epidermal. Cea mai pronunțată reacție imunohistochimică a fost observată la partea inferioară a vezicii subepidemice (figura e).

Sub influența diverșilor factori, incluzând autoanticorpi, are loc disocierea domeniilor intra- și extracelulare ale cadherinelor. În acest caz, domeniile extracelulare de caderină desprinse de pe suprafața celulară în timpul acantholysis, dar rămâne pe domeniul citoplasmatic al membranei, păstrând legătura cu citoscheletului, a avut loc împreună catenin. În cursul studiilor imunohistochimice, acest domeniu cadherin citoplasmatic / intracelular este destul de suficient pentru a lega anticorpi, rezultând reacții pozitive în localizarea atipică.

Astfel, acest studiu nu este numai posibilă stabilirea angajamentului cadherin proces complex imunopatologice in dermatozele buloase autoimune, dar, de asemenea, pentru a identifica caracteristicile expresiei sale în aceste boli. Acesta din urmă poate fi utilizat ca un marker suplimentar de diagnostic pentru diagnosticul diferential al dermatozelor buloase autoimune, în particular pemfigoid bulos și epidermoliză buloasă dobândită. Acest diagnostic dermatozelor buloase autoimune în stadiile incipiente ale bolii permite terapiei adecvate cu un risc redus de a continua aprofundarea procesului patologic la pacienții care suferă de dermatozele buloase autoimune.

Suskova V.S. MD profesor, șef. Laboratorul de Imunodiagnostică și Imunocorrectare a FSI "FNCTIO im. academician V.I. Shumakov "Ministerul Sănătății și Dezvoltării Sociale din Rusia, Moscova;

Snarskaya E.S. MD Profesor al Departamentului de Piele si Boli Transmisibile Sexual al Facultatii de Educatie Profesionala Postuniversitara a medicilor de la Universitatea de Stat din Moscova. IM Sechenov »Ministerul Sănătății și Dezvoltării Sociale al Federației Ruse, Moscova.

Vă aducem la cunoștință jurnale publicate în editura "Academia de Istorie Naturală"

(Factor de impact ridicat al RINC, subiectul jurnalelor acoperă toate domeniile științifice)

Jurnal științific ISSN 1812-7339 | ПИ №77-63397

Serviciul de asistență tehnică - [email protected]

Secretarul executiv al revistei Bizenkov M.N. - [email protected]



Materialele revistei sunt disponibile sub licența Creative Commons "Attribution" 4.0 World.







Articole similare

Trimiteți-le prietenilor: