Data expirării

Când se depozitează anticorpi la o temperatură sub zero, este important să nu folosiți frigidere fără gheață. Frigiderele obișnuite de uz casnic sunt înghețate și suferă cicluri de dezghețare liberă de mai multe ori pentru a preveni formarea înghețului.







Anticorpii conjugați trebuie depozitați în flacoane închise la culoare sau în flacoane acoperite cu folie de aluminiu.

modificări chimice, cum ar fi oxidarea și degradarea proteolitică a proteinelor are loc la temperatură moderată, dar amploarea acestor reacții este mult mai pronunțată la temperaturi ridicate. Anticorpii sunt în general păstrați la ≤ 4 ° C în recipiente de sticlă curate și sterile sau sticle din polipropilenă. Depozitarea la temperatura camerei duce deseori la degradarea și / sau inactivarea anticorpilor, de obicei ca urmare a creșterii microorganismelor. Pentru o durată de depozitare scurtă (de la o zi la mai multe săptămâni), soluțiile de anticorpi pot fi păstrate la 4 ° C fără pierderi semnificative de activitate.

Crioprotectori: glicerol și etilenglicol

Formarea cristalelor de gheață poate distruge structura proteinei și astfel poate cauza o pierdere a eficacității anticorpilor. Crioprotectorii, cum ar fi glicerina și etilenglicolul, sunt capabili să prevină formarea de legături de hidrogen între moleculele de apă și astfel să reducă înghețarea atunci când sunt adăugate la o soluție apoasă. Temperatura actuală de congelare depinde de compoziția / concentrația crioprotectorilor, vezi Tabelul 2.

Tabelul 2. Punctele de înghețare ale glicerinei și etilenglicolului (în grade Celsius) la diferite concentrații (în %%) în apă.

Notă: Etilenglicolul este toxic și trebuie utilizat cu prudență.

Dacă temperatura de depozitare este sub punctul de îngheț pentru o soluție de anticorpi cu crioprotectori, soluția se va solidifica. Totuși, în loc să formeze cristale de gheață, poate să apară vitrificarea, ca în cazul crioconservării celulelor / embrionilor cu DMSO. În timpul vitrificării vitrificării, integritatea structurală a anticorpilor este păstrată.

Pentru a crește stabilitatea, se adaugă glicerol sau etilenglicol la o concentrație finală de 50% și anticorpul poate fi păstrat la -20 ° C. Soluția de anticorpi trebuie depozitată în volume mici pentru a evita ciclurile repetate de îngheț-dezgheț.

Este important să utilizați glicerină sterilă, deoarece glicerina poate fi contaminată cu microbi.

Data expirării

Figura 1. Azida de sodiu la diferite concentrații inhibă creșterea bacteriilor Gram-negative. Din [2].

Sterilizarea și compușii antimicrobieni

Preparatele de anticorpi trebuie întotdeauna sterilizate prin filtrare utilizând un filtru de 0,45 microni și trebuie tratate în condiții aseptice pentru a preveni contaminarea microbiană.

agenți antimicrobieni, cum ar fi azidă de sodiu (NaN3) la o concentrație finală de 0.02-0.05% (g / v) și timerosal într-o concentrație finală de 0,01% (g / v) pentru a inhiba creșterea microbiană.

azidă de sodiu (NaN3) este toxic pentru majoritatea celulelor si organisme, inclusiv oameni (vezi. Figura 1) [1]. Cu toate acestea, bacterii gram-pozitive (streptococi, pneumococi, lactobacili) rezistente la azidă de sodiu, a se vedea. Figura 2) [2] [3] [4]. Azidă de sodiu inhibă citocromoxidază în lanțul de transport de electroni mitocondrial și este, de exemplu, apoptoza în celulele CGR-5 [5]. Anticorpii în soluția de azidă de sodiu nu trebuie utilizați direct în celulele vii sau în studiile in vivo. În plus, azida de sodiu previne majoritatea reacțiilor de cuplare. Azidul de sodiu poate fi îndepărtat prin filtrare pe gel sau prin dializă.







Notă: azida de sodiu a fost utilizată în pernele de siguranță ale mașinilor de generație mai veche.

Data expirării

Figura 2. Azida de sodiu nu poate inhiba creșterea bacteriilor gram-pozitive. Din [2].

Inhibitorii de protează împiedică scindarea proteolitică a proteinelor. Proteoliza anticorpilor poate deveni o problemă importantă pentru stocarea lichidului ascitic și a preparatelor serice, deoarece ambele ascite și preparatele serice conțin proteaze. Pentru a elimina această degradare, pot fi utilizate depozitare la rece și / sau inhibitori de protează.

Anticorpii în soluții (1 mg / ml) în timpul depozitării.

Proteina purtătoare sau proteina de umplutură, cum ar fi purificată albumină serică bovină (BSA) sau gelatină, pot fi adăugate pentru a dilua anticorpul la o concentrație finală de proteină de 1-5 mg / ml (0,1-0,5%).

Gheață uscată în timpul depozitării și transportului

Cercetări recente arată că gheața uscată în timpul depozitării și transportului de proteine ​​poate provoca soluție acidulare pentru depozitare, și va cauza agregarea proteinelor (cu formarea unui precipitat), în special atsidnymi proteine ​​(proteine ​​cu pI mai puțin de 7) [6]. Policlonal IgG tind să fie atsidnymi cu pI în intervalul 4.7-7.5 [7]. Flacoanele sigilate cu gaz și / sau pungi de plastic sigilate cu gaz (pentru ambalarea sticlelor) ar trebui utilizate pentru a minimiza daunele pe lângă reechilibrarea probelor la -80 ° C în congelator timp de câteva zile. Pachete Dri-Shield Umiditate Bariera Pungi de la 3M, produse Thermo Scientific ™ Nunc ™ Cryoflex și pachete IMPAK, cum ar fi 0203PM56OZETN și 05MP081OZE, pot fi utile.

Efectul oxidării moleculelor de anticorpi a fost studiat cu atenție, în special pentru anticorpii terapeutici. Resturile de metionină din lanțurile de anticorpi structurale, de obicei, sunt principalul loc de oxidare, atunci când este expusă la lumină intensă de anticorpi și / sau la temperatură ridicată [8]. Anticorpii conțin atât legături disulfurice intra și inter-lanț. antioxidanți folosiți în mod obișnuit, cum ar fi 2-ME și DTT, nu poate preveni bisulfura rearanjare [9]. în timp ce un alt antioxidant - metionină nu contribuie la restructurarea grupurilor disulfidice și poate fi cel mai bun antioxidant pentru depozitarea anticorpilor [Toate Fitchmun, Somatek, San Diego, California, SUA].

Activitatea nu este aproape pierdută dacă serul este stocat direct timp de zece ani la -20 ° C. Cu toate acestea, după eliminarea anticorpilor, o anumită pierdere de activitate a fost observată de mulți ani, deși foarte lentă. De asemenea, se pare că glicerolul nu este necesar pentru depozitare la -20 ° C timp de mulți ani sau chiar decenii, cu excepția cazului în care anticorpii sunt supuși ciclurilor repetate de îngheț / dezgheț. Anticorpii trebuie depozitați în concentrație ridicată.

Anticorpii monoclonali pot fi depozitați la -20 ° C în glicerol 50%. Este, de asemenea raportat că anticorpii monoclonali pot fi depozitate sub un sulfat de amoniu saturat sub formă de perle la 4 ° C sau -20 ° C timp de ani, fără pierderea activității sau a creșterii bacteriilor okisleniya.Liofilizatsiya (uscarea sau uscarea prin congelare din stare congelată) oferă o alternativă o metodă de stabilizare a anticorpilor care nu sunt rezistenți la îngheț. În majoritatea cazurilor, proteinele liofilizate pot fi păstrate la -20 ° C. Liofilizarea necesită echipamente scumpe și este intensivă pentru muncă.

Anticorpii trebuie depozitați în recipiente întunecate sau acoperite cu folie de aluminiu.

Fosfatază alcalină enzime și alte deosebit de sensibile la congelare conjugate, și, în general, acestea trebuie să fie depozitate la temperatura de 4 ° C, după conjugarea anticorpilor srok.Konyugaty scurte sunt cel mai bine păstrate pentru o perioadă lungă de timp la temperatura de -20 ° C, cu glicerol sau etilenglicol, la o concentrație finală de 50 %. In timp ce unele enzime conjugați pot fi depozitate la -20 ° C, fără crioprotector, probele congelate trebuie să fie proiectate pentru o singură utilizare pentru a preveni cicluri repetate de îngheț-dezgheț.

Anticorpi conjugați cu fluoresceină

Fluorescența poate scădea atunci când este expusă la lumină. Ca orice reactivi conjugați cu etichete fluorescente (și nu doar anticorpi), conjugatele de anticorpi trebuie protejate de lumină. Anticorpii conjugați cu fluorofor trebuie depozitați la 4 ° C și nu sunt congelați.

Lichstein H, Soule M. Studii asupra efectului azidei de sodiu asupra creșterii microbiene și respirației: I. Acțiunea azidei de sodiu asupra creșterii microbiene. J Bacteriol. 1944; 47: 221-30 PMID 16560767

Lichstein H, Soule M. Studii ale efectului Azidă de sodiu asupra microbiotica Creștere și Respirația: II. Acțiunea azidei de sodiu asupra catalazei bacteriene. J Bacteriol. 1944; 47: 231-8 PMID 16560768

Lichstein H. Studii ale efectului Azidă de sodiu pe microbian, creștere și Respirația: III. Efectul Azidă de sodiu asupra metabolismului de gaze de B. subtilis și P. aeruginosa și influența Pyocyanine privind schimbul de gaze a unei tulpini Pyocyanine-Free P. aerugino. J Bacteriol. 1944; 47: 239-51 PMID 16560769







Articole similare

Trimiteți-le prietenilor: