Manualul metodic privind abilitățile practice pentru studenții care studiază la Departamentul de Histologie.
Aptitudini practice obținute la Departamentul de Histologie
Tehnica de microscopie cu lentile diferite: x8, x40, x90.
Citirea preparatelor histologice
Tehnica desenului histologic
Controlul tehnicilor de colorare histologică cu hematoxilină - eozină
Analiza electronogramelor și a structurilor grafice-logice.
Diagnosticarea structurilor histologice pe micro-preparate
Tehnica citirii frotiului sângelui periferic uman și numărarea formulei leucocitelor.
Compilarea protocolului preparatului histologic studiat.
profilare
Elevii de la Departamentul de Stomatologie diferențiază micro-preparatele de țesuturi care alcătuiesc dintele.
Studenții facultății pediatrice: diagnosticul frotiului sângelui periferic al unui copil de diferite grupe de vârstă.
Reguli de lucru cu microscop
Puneți microscopul într-o poziție convenabilă și selectați sursa de lumină
Aduceți microvintul în poziția de lucru, punctul din partea stângă a trepiedului ar trebui să se afle în mijlocul celor două riscuri
Așezați obiectivul de mărire mică la 8 în poziția centrală, rotind revolverul în sensul acelor de ceasornic.
Pentru a obține o iluminare uniformă a lentilei superioare a condensatorului, folosind o oglindă concavă.
Verificați dacă câmpul vizual este luminat uniform prin ocularul microscopului.
Așezați preparatul cu alunecarea capacului deasupra etapei microscopului
Instalați un obiectiv mic de mărire la o distanță de 0,8-1,0 cm de medicament, care lucrează cu un micro-șurub. Sub controlul ochiului pentru a obține o imagine clară
Setați un obiectiv de mărire mare la 40 în poziția centrală prin rotirea revolverului în sensul acelor de ceasornic
Obțineți claritate a imaginii prin lucrul cu un micro-șurub (2-5 rotații), în direcția mai frecventă pe sine, mai puține ori de la tine.
Când se termină lucrarea, mutați revolverul într-o poziție nefuncțională și scoateți medicamentul.
Citirea unui specimen histologic Schema de protocol care descrie un specimen histologic dintr-o histologie privată
Numele medicamentului
Culoarea preparatului (hematoxilin-eozină, orseină, hematoxilină de fier, etc.)
Principiul structurii organului
I strat-shell:
Număr de cochilii;
Numele fiecărei cochilii;
Straturi în cochilie cu numele țesuturilor generatoarelor lor. Specificați caracteristicile morfologice ale țesuturilor din straturile acestui organ. Indicați sursele de origine ale țesuturilor
Alte structuri din stratul coajă (prostată, sânge și limfă, trunchiurile nervoase, foliculi intramurale ganglionul limfoizi harafkternyh indicând caracteristicile lor morfologice.
II Parenchimal
Capsule - pentru a desemna materialul,
Trabekula - pentru a numi materialul,
Vasele sanguine (artere, vene), trunchiurile nervoase, gargolele intramurale.
2. Parenchim
Apelați tipul de țesut care formează baza organului parenchimal (epitelial, reticular)
Numele și descrie unitățile de bază ale parenchimului structurale (de exemplu nefronului, foliculi limfoizi, glanda secretoare separate, șuvițe epiteliale acin it.d.) sau părți principale parenchimul (de exemplu pulpă albă și roșie a splinei, cortexul și medula, zone)
Tehnica citirii frotiului sângelui periferic uman și numărarea formulei leucocitelor
Smear de culoarea sângelui uman în conformitate cu metoda lui Romanovsky
Studiu de a identifica celulele roșii din sânge în sânge frotiu eritrocitar are un diametru relativ constant (7,5mkm) nu conține nuclee, eozina colorate în roz (oksifilen) detectat în centrul unei iluminări mici din cauza subtierea.
Aflați pentru a identifica celulele albe din sânge, celulele roșii din sânge sunt mai mari ca dimensiune, au un nucleu, acestea sunt mult mai mici decât celulele roșii din sânge. Găsiți lovitură de cuțit la o mărire de mare, segmenoyadernye, leucocitele polimorfonucleare, eozinofinye, granulocite bazofile, limfocite, monocite.
Să înveți să găsești și să determini trombocite, de 2-3 ori mai puțin decât cel roșu din sânge, sunt de obicei colectate în grupuri.
Numărarea formulei leucocitelor
Pentru a număra cu o creștere de 100 de leucocite, determinarea apartenenței lor la un anumit grup, având în vedere celulele studiate anterior. Pentru a nu număra în aceeași secțiune, pur și simplu manual, după cum urmează, trebuie să mutați drogul cu șuruburile scării sau
Stăpânirea tehnicii de colorare histologică cu hematoxilină cu eozină
1.1. Microscopie de lumină
1.1.1. Dispozitiv microscop
1.1.2. Prepararea unui preparat histologic
1.1.2.1. Luarea și fixarea materialului
1.1.2.2. Deshidratarea și compactarea materialului
1.1.2.3. Prepararea felii
1.1.2.4. Colorarea preparatelor și încheierea lor în mediu de conservare
1.1.3. Metode de colorare a preparatelor histologice
1.1.3.1. Tipuri de coloranți
1.1.3.2. Metode generale de colorare
1.1.3.3. Identificarea structurilor non-celulare ale țesutului conjunctiv
1.1.3.4. Colorarea celulelor țesutului conjunctiv și a sângelui
1.1.3.5. Identificarea elementelor sistemului nervos
1.2. Electron microscopie
1.2.1. Principiul microscopului electronic
1.2.2. Caracteristicile preparatului
În histologie, citologie și embriologie, există numeroase metode de cercetare.
Aici luăm în considerare numai acelea care sunt asociate cu microscopia electronică și electronică a celulelor și țesuturilor moarte (fixe).
1.1. Microscopie de lumină
1.1.1. Dispozitiv microscop
1. Schema - structura unui microscop luminos.
Microscopul include 3 sisteme -
optice,
iluminat și
mecanice.
1. Sistemul optic include o lentilă și un ocular.
a) Obiectivul (1) este un sistem de lentile introdus în tub (2) de jos și îndreptat direct spre obiect (de aici numele).
Obiectiv obișnuit de mărire:
8. 20. 40 (obiective uscate), 90 (lentile de imersie).
Când se utilizează ultima lentilă, acesta trebuie să fie scufundat într-o picătură de ulei de cedru (imersie), aplicat pe coperta medicamentului.
b) Ochelarii (3) sunt introduși în tubul superior. Ocularele se aplică odată cu creșterea
7, 10, 15.
c) Mărirea rezultată a microscopului este un produs al măririi lentilelor și a ocularului, de exemplu:
2. Sistem de iluminat - sursă de lumină, oglindă, condensator și diafragmă.
a) Sursa de lumină (4) poate fi încorporată în microscop și poate fi amplasată în afara microscopului (de exemplu - o lampă de masă convențională).
b) Oglinda (5) colectează razele de la sursă și le direcționează către preparatul de jos.
O singură suprafață a oglinzii este plată, cealaltă este concavă;
acesta din urmă este utilizat în iluminatul artificial.
c) Condensatorul (6) este alcătuit din lentile care se concentrează asupra preparatelor luminoase. Ridicând și coborând condensatorul (cu un șurub), puteți ajusta focalizarea razei.
d) Diafragma (7) este montată în condensator; Acesta este un sistem de plăci opace cu o gaură în mijloc.
Limitează incidentul fluxului luminos asupra medicamentului.
Când se utilizează lentile mari de mărire, deschiderea diafragmei trebuie redusă - pentru a reduce aberațiile sferice.
3. Sistem mecanic - tub (2), trepied (8), coloană (9) și treaptă (10).
a) Coloana este conectată cu șuruburi macro și micrometrice, care ridică și
Coborâți tubul pentru a focaliza imaginea obiectului pe retina observatorului.
Macro-șurubul este utilizat atunci când se lucrează la mărire mică, iar micro-șurubul este utilizat la mărire mare.
b) tabelul de obiecte se poate deplasa într-un plan orizontal, ceea ce permite schimbarea ariilor de medicament care se încadrează în câmpul vizual.
Ca urmare, razele luminoase trec urmatoarea cale:
sursă de lumină (4) oglindă (5) condensator (6) diafragmă (7)
lentila medicamentului (1) tubul (2) ocular (3).
Ie microscopia este condusă în lumină transmisă, pentru care medicamentul trebuie să fie suficient de subțire.
Rețineți, de asemenea, că microscopul oferă o imagine inversată a obiectului.
1.1.2. Prepararea unui preparat histologic
1. Următoarele tipuri de preparate histologice se disting prin natura materialului luat:
a) secțiuni de organe (grosime de 5-15 nm);
b) frotiuri (sânge, măduvă osoasă etc.);
c) filme (peritoneum, dur dura mater) sau preparate totale
Cel mai adesea sunt folosite felii.
2. Pregătirea medicamentului include de obicei următoarele patru etape:
a) luarea și fixarea materialului,
b) deshidratarea și compactarea materialului,
c) pregătirea secțiunilor,
c) colorarea preparatelor și încheierea într-un mediu de conservare.
1.1.2.1. Luarea și fixarea materialului
1. Se taie bucăți mici (0,5 x 1 x 1 cm) de la organul adecvat și se scufundă în clemă (formalină, metanol etc.) - de obicei, timp de 24 de ore.
2. Se face fixarea pentru a preveni procesele de autoliza (auto-digestie) a țesuturilor. Acest lucru se realizează prin denaturarea (coagularea) proteinelor.
3. După fixare, probele sunt spălate cu apă curentă timp de mai multe ore.
1.1.2.2. Deshidratarea și compactarea materialului
1. Probele sunt apoi compacte, astfel încât în viitor acestea pot fi tăiate pe un microtom.
Adesea, parafina sau celloidina sunt folosite ca substanțe de etanșare.
2. Pre-probele sunt deshidratate (altfel etanșantul hidrofob nu poate penetra țesutul).
a) Pentru a face acest lucru, ei "cheltuiesc" pe o baterie de alcooli -
70%. 80%. 96%. 100% etanol -
pentru 24 de ore în fiecare alcool.
b) Pentru că parafina este insolubilă și în etanol, probele sunt apoi îmbătrânite într-un amestec de etanol-xilen și xilen pur.
3. a) Turnarea: Se pun probele într-un amestec de xilen-parafină și apoi în parafină lichidă
timp de 1-2 ore la 52-56 ° C.
b) Dați parafină, răciți, întărindu-vă; Tăiați blocul cu eșantionul închis și fixați-l pe un cub de lemn.
1.1.2.3. Prepararea felii
1. Cuburile sunt introduse într-un dispozitiv special - un microtom, - servesc la pregătirea secțiunilor.
2. a) Folosind sistemul mecanic micrometric, suportul pentru obiecte, împreună cu cubul, se deplasează pentru fiecare etapă cu o anumită distanță (de ex. 10 μm).
b) Un cutit de microtome, orientat sub un unghi fata de suprafata blocului de parafina, taie de pe el un strat subtire al corpului (taiat) de o grosime data.
3. Secțiunile sunt plasate pe suprafața apei calde pentru împrăștierea lor și apoi - pe diapozitiv.
1.1.2.4. Colorarea preparatelor și încheierea lor în mediu de conservare
1. Înainte de colorare, probele sunt eliberate din parafină, realizându-se pe o baterie de solvenți:
xilen, alcool 100%, 96%, 80%, 70%, 60%, apă (2-5 minute fiecare)
(Această serie se termină cu apă dacă se utilizează apoi un colorant solubil în apă.)
2. Pentru colorare, diapozitivele cu felii sunt plasate pentru o perioadă scurtă de timp
în soluția de colorant, spălată cu apă, tratată cu o soluție de alt colorant
(dacă este folosit și) și spălate din nou cu apă.
3. De droguri este din nou deshidratat (conducând o baterie de alcooli cu concentrație în creștere),
și apoi iluminați (în carbol-xilen și xilen) - pentru a elimina excesul de vopsea.
4. În cele din urmă, se aplică o drojdie de balsam canadian (în cazul unei tăieturi) pe medicament, sau
cedru ulei (pentru frotiuri de sânge) și acoperă cu o alunecare de acoperire.
Astfel, prepararea unei preparate histologice este foarte lungă și
laborioasă.
Dar, cu punerea în aplicare corectă a produsului poate fi stocat pe termen nelimitat pentru o lungă perioadă de timp.
1.1.3. Metode de colorare a preparatelor histologice
1.1.3.1. Tipuri de coloranți
Toate coloranții utilizați în tehnica histologică sunt împărțiți în 3 tipuri.
3. Calea razele dintr-un microscop electronic, în principiu, este aceeași ca și în lumină.
a) sursa de electroni este catodul (1),
iar forța motrice este diferența de potențial dintre catod și anod (2).
b) Anodul este situat în apropierea catodului și are o gaură în mijloc, prin care electronii alunecă.
c) Pentru a menține fluxul lor neabsorbit, în tubul microscopului se formează un vid înalt.
4. a) O bobină electromagnetică (3) servește ca condensator (focalizează grinzile pe eșantion (4)),
b) a doua bobină (5) - ca obiectiv (primește raze divergente de la eșantion);
c) și a treia bobină (6) - ca un ocular sau o lentilă de proiecție.
5. Razele care trec prin ultima bobină, apoi merg mai departe către ecranul luminescent (7) și îl fac să strălucească în locul unde cad electronii.
1.2.2. Caracteristicile preparatului
Materialul este luat în bucăți foarte mici (de ordinul a 1 mm 3),
iar fixarea este de obicei efectuată în două etape:
a) inițial, glutaraldehida (stabilizarea proteinei),
b) apoi - tetroxidul de osmiu (stabilizarea fosfolipidelor și a țesuturilor contrastante).
2. Materialul de etanșare
1. Probele, ca de obicei, sunt deshidratate,
și rășinile epoxidice sunt utilizate pentru a le compacta în continuare.
2. a) Turnarea se face în forme speciale,
b) solidificarea amestecului are loc prin polimerizarea acestuia într-un termostat,
c) și blocurile întărite arata ca mici lumânări.
1. Tăierea se face cu ajutorul unui ultrasunete;
grosimea lor este de 30-50 nm (comparați cu secțiunile microtomice - 10.000 - 20.000 nm).
2. Apoi, acestea sunt transferate în ochiuri (jucând rolul unui diapozitiv).
1. a) Colorarea secțiunilor este redusă la contrast lor folosind săruri de metale grele (plumb, wolfram, uraniu).
b) Aceste săruri se precipită pe fosfolipide din membrană și absorb electroni.
2. Prin urmare, locurile corespunzătoare ale celulei arată mai întunecată.
Manual privind abilitățile practice pentru studenții care studiază la Departamentul de Histologie
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: