Vector - o moleculă de ADN capabilă de auto-replicare în celulele diferitelor organisme și asigură reproducerea (clonarea) și închise (expresie) încorporată în ea în mod artificial orice genă. Primul succes vector-vagon în ingineria genetică a devenit o plasmidă pSC101 circular. Ea poartă un situs de clivaj cu enzimă de restricție EcoR1 și este convertit sub acțiunea acestei enzime din inelul într-o moleculă liniară, capetele care pot „se ofili“ între ele, transporta o rezistenta la antibiotice tetraciclină gena de rezistență, și, astfel, să fie ușor de detectat în bacterii. Toate aceste proprietăți pSC101 utilizate pentru a crea un hibrid al primei clonare și ADN. Plasmida pBR322. are mai multe zone pentru a fi tăiate cu diferite enzime de restricție, este posibil să se „coase“ o varietate de fragmente de ADN în doi markeri ei pentru a selecta pentru medii bacteriene: în plus față de tetraciclină, plasmida codifică mai multă rezistență la ampicilină. Dacă una dintre aceste gene (de exemplu, gena de rezistență la tetraciclină) a fost tăiat cu enzime de restricție specifice, atunci când încorporarea în loc integritatea ADN-ului străin este perturbat fragment de genă și le desemnate indicația dispare. Aceasta permite selectarea plasmidelor hibride. Bacterii E. coli transformate, i. E. care conțin plasmide hibride cresc pe un mediu care conține ampicilină, dar nu cresc pe mediu cu două antibiotice, deoarece gena de rezistență la tetraciclină în inserția plasmid deteriorată. creștere selectivă vă permite să selectați și să crească numai celulele care conțin molecule de ADN hibride. Gene lacZ. în care este amplasat un polilinker sau o porțiune care conține 10 situsuri de restricție. Coloniile bacteriene care conțin normal și deteriorate ușor insera gene diferă dacă ai pus celulele în vase Petri miercuri. Dacă coloniile formate, de culoare albastră, aceste celule bacteriene nu conțin plasmidic inserarea de ADN străin. Celulele bacteriene care conțin o plasmidă cu formă de ADN integrat colonii necolorate. Genele precum lacZ sunt numite reporteri.
În plus față de plasmide, fagii și virușii au fost utilizați cu succes ca vectori. Au fost create mai târziu cosmide - un tip special de vectori care combină proprietățile plasmidului și fagului.
Metode de obținere a genelor necesare în ingineria genetică. Crearea de bănci de gene.
Introducerea genelor străine în celule și controlul expresiei lor.
Plasmida introduse celulele sunt introduse în celule primitoare prin transformare genetică (Transformarea celulelor de Escherichia coli). În anii '70. O metodă pentru introducerea ADN-ului in bacterii folosind clorura de calciu pentru a obține celule competente. Electroforeza se bazează pe principiul trecerii în emisiile de câmp electric de la un pol la altul, la o dependentă de mărimea ratei lor (permite monitorizarea poziției ADN-ului în gel). Otklonirovannuyu în vectori întreg ADN genomic sau o combinație de gene individuale organism numit bancă sau o bibliotecă de gene. ADN-ul genomic izolat și purificat din celulele corpului, apoi este supus la fragmentare folosind enzime de restricție, apoi donate molecule recombinante. Banca poate fi plină sau parțială. Numărul de clone este dependentă de mărimea genomului și mărimea fragmentelor de ADN. Prima bancă genetică a fost creată în 1976. pentru E. coli. bănci de gene servi ca material sursă pentru studiul de reglementare, structura si functia de gene si proteine din organism. În 1969 allaninovoy sintetizat ARN transferul de gene de drojdie. În 1976 segment sintetizat de ADN de E. coli conținând tirozina gena ARNt. Abordări descoperirea și izolarea genelor, metoda de selecție pe medii selective, hibridizare cu prepararea ADN radiomarcat, pentru a izola gene sunt de asemenea folosite metode imunologice metoda radioimmunoditektsii.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: