Invenția se referă la glicoproteine îmbogățite cu hidroxipropilenă, care pot fi obținute din surse de plante și la utilizarea lor farmaceutică și cosmetică.
Este cunoscut faptul că unele glicoproteine de origine animală, cum ar fi colagenul și proteoglicanii, au efecte benefice asupra pielii atunci când sunt aplicate local ca atare sau când sunt încorporate în formulări adecvate.
Colagenul, care este o glicoproteină bogată în prolină și hidroxiprolină, este utilizat în special ca atare sau combinate cu alte baze de polipeptide în tratamentul ridurilor și a altor pete inestetice legate de hidratarea pielii slabă și elasticitate. Cu toate acestea, colagen animal are limitări în utilizarea sa din cauza riscului de contaminare cu virusuri și toxine. Deși compușii de origine vegetală nu implică un astfel de risc, până în prezent utilizarea lor în produsele cosmetice a fost destul de limitată: de exemplu, formulările cosmetice sunt cunoscute care conțin extracte brute de plante, cum ar fi Aloe sau chiar produse întregi vegetale la sol, cum ar fi avocado.
glicoproteine de plante cunoscute numite estensinami care sunt derivate din celulele vegetale în faza de proliferare și au o structură similară cu colagen animal. În EP-A-05334078 descrie utilizarea cosmetică a extensines având o greutate moleculară medie mai mare de 100.000 daltoni. Cu toate acestea, metodele de extracție extensines descrise până în prezent, care implică extracția materialelor vegetale de diferite origini prin soluții saline apoase, urmată de purificare cu acizi puternici, cum ar fi acidul tricloracetic, nu permit obținerea unor produse adecvate pentru cosmetice, din cauza problemelor legate de solubilitate, repetabilitate și persistența caracteristicilor lor chimico-fizice.
S-a descoperit acum că este posibil să se obțină glicoproteine bogate în hidroxiprolină structurale similare cu extensinele descrise mai sus, dar cu o greutate moleculară mai mică. masă și solubilitate mai mare în soluții apoase acide printr-o metodă care implică cultivarea in vitro a celulelor din plante selectate și extracția cu soluții acid-alcool ale celulelor care cresc într-un mediu adecvat.
Glicoproteinele pot fi obținute conform invenției, au proprietăți, cicatrizare, tonifiere și promovarea peliculogene hydrating unui nivel mai ridicat decât cele de colagen. Prin urmare, glicoproteinele acestei invenții pot fi utilizate în formulări cosmetice sau dermatologice pentru tratamentul pielii uscate, psoriazis, ihtioza, mătreață, keratoza, riduri, acnee, eczeme, dermatoze inflamatorii, îmbătrânirea pielii și toate celelalte aplicații pentru care utilizarea anticipată a animalelor colagen.
Soluțiile apoase ale glicoproteinelor din prezenta invenție rămân stabile fără nici o polimerizare a glicoproteinelor care conduc la formarea de produse insolubile. În plus, viscozitatea acestor soluții este deosebit de ridicată și nu depinde de concentrații; Concentrația de 0,1% are în mod neașteptat aceeași putere de formare și hidratare ca și soluțiile de colagen 1% sau albumină vegetală de 5%.
tesut calli Plant în urma sterilizării și adăugarea opțională a agenților antibacterieni frecvent utilizate pentru inocul mediilor de cultură lichid adecvat așa cum este descris în manualul menționat anterior Dobbs și Roberts. Un mediu deosebit de potrivit pentru prezenta invenție este mediul Skoog și Murashige. Adăugarea de aditivi specifici, cum ar fi prolina, agenți reducători, etilenă sau compuși capabili să elibereze etilenă, cum ar fi etefon sau acidul L- aminotsiklopropankarbonovaya, pot fi adecvate pentru a crește productivitatea sau producția de glicoproteine dorite.
Se preferă utilizarea acidului naftilacetic, cum ar fi auxina, 6- (dimetilamino) -purina ca o citokinină, vitamine și 3% zaharoză ca sursă de carbon.
În funcție de materialul ales, poate fi benefică adăugarea vitaminei C pentru a împiedica produsul final să obțină o culoare maro.
Timpul de fermentație poate varia de la 3 la 12 zile și este preferabil între 5-6 zile. Imediat după terminarea mediului de cultură de fermentație este centrifugat, iar masa celulară se extrage cu alcool, de preferință etanol, în prezența acizilor minerali diluați, de preferință acid clorhidric sau sulfuric. Acest procedeu inactiveaza unele enzime care pot pune în pericol stabilitatea glicoproteinele conform invenției, în particular tirozinoksidazu, polifenoloxidază și care promovează polimerizarea glicoproteine cu formarea consecutivă a produselor insolubile.
Extracția de alcool în prezența acizilor minerali face posibilă extracția completă a glicoproteinelor principale și, în cele din urmă, a fost extrem de selectivă. Pe lângă etanol, pot fi utilizați și alți alcooli miscibili cu apa, cum ar fi metanol sau izopropanol. Extractele alcoolice apoase rezultate sunt neutralizate și apoi concentrate și încălzite la o temperatură de 70-100 ° C, preferabil aproximativ 80 ° C, până când depunerea proteinelor denaturate este completă. Suspensia este apoi limpezită prin concentrare și lichidul este supus unei ultrafiltrare fracționată pentru a îndepărta substanțele cu greutate moleculară ridicată și greutate moleculară mică. Ultrafiltrarea se efectuează utilizând membrane de polisulfonă având o cutoff de greutate moleculară de 10.000-40000 Dalton, cum ar fi Centricon R sau Romicon R. Fibrele acestora pot fi goale sau alternativ răsucite. Produsul filtrat rezultat este supus electrodializei pentru îndepărtarea substanțelor nedorite, cum ar fi sărurile și zaharurile cu greutate moleculară scăzută. După filtrare și dializă, soluția obținută poate fi utilizată ca atare în preparate cosmetice sau farmaceutice sau poate fi concentrată la un volum mai mic și apoi liofilizată sau măcinată fin.
Aminoacid - Suprafață vârf,% Asp - 4,399 Glu - 4,328 Hyp - 17,505 Ser - 7,065 Gly - 6,056 His - 1,782 Arq - 2,471
Thr - 4,739
Pro - 10,036
Ala = 8,2
Remorcher - 2.388
Val: 6.162
Met - 1,154
Ile - 2,479
Leu - 5,525
Phe - 1,862
Lys - 14, 254
Datele prezentate mai sus se referă la procentul din numărul total de aminoacizi prezenți în amestecul de glicoproteină. Zaharurile din acest amestec sunt arabinoză și galactoză. Raportul dintre aminoacizi și zaharuri este o medie de 2: 1 pentru diferite produse.
Așa cum s-a menționat mai sus, produsele prezentei invenții pot fi utilizate atât în aplicații farmaceutice cât și cosmetice. Pentru produsele farmaceutice, produsul poate fi încorporat în geluri sau unguente sau poate fi aplicat pe țesături medicinale pentru tratament special pentru arsuri sau răni. În acest caz, produsul este, de obicei, supus sterilizării sau filtrare sterilă și liofilizare.
Preparatele cosmetice și dermatologice din prezenta invenție pot fi preparate conform metodelor convenționale. Exemple de forme de administrare sunt spray-urile apoase, loțiunile, soluțiile, emulsiile, gelurile, unguentele și cremele.
Preparatele cosmetice și dermatologice ale invenției pot conține glicoproteine hidroxiprolină bogate într-o cantitate de la aproximativ 0,01 până la aproximativ 50% gr., Preferabil de la 0,05 la 5 gr.%, Precum și excipienți convenționali. Cu această stabilitate ridicată a glicoproteinelor prezentei invenții, pot fi preparate preparate farmaceutice și cosmetice care conțin mai mult de 50% glicoproteine bogate în hidroxiprolină solubile.
Glicoproteinele din această invenție pot fi adăugate preparatelor farmaceutice și cosmetice ca atare sau pot fi microencapsulate astfel încât să asigure un efect de hidratare pe termen lung. Microcapsulele pot fi hidrofile sau lipofile. Formulările din prezenta invenție pot include alte ingrediente active care au activitate complementară sau utilă în scopul dorit.
Prezenta invenție este ilustrată în continuare prin următoarele exemple.
Exemplul 1
Obținerea calusului și a culturii lichide Gingko biloba pentru producerea glicoproteinelor
Este explant pregătit de frunze tinere de Gingko biloba frunze prin spălare în 0,1% Tween 80 (Tween 80 R). Placile sunt tăiate în secțiuni de aproximativ 0,5 cm și sterilizate anterior timp de 1 minut cu 75% etanol. Apoi, sterilizarea se completează cu o soluție de hipoclorit de sodiu 2% și spălarea triplă a explantului în apă sterilă. Explantele rezultate sunt transferate într-un vas Petri în mediu Murashige & Skoog conținând 3% sucroză, cu adaos de Lynsmeyer & Skoog vitamine și hormoni, cum ar fi acidul și acidul naftilacetic 2,4-diclorofenoxiacetic. Produsele sunt incubate în întuneric la 23 ° C timp de 20 de zile. La sfârșitul acestei perioade, se obțin calli friabil care cresc ușor și dezvolta rânduri continue în timpul subcultivarea în aceleași condiții în care pot fi utilizate pentru propagarea într-un mediu lichid. Calli utilizate pentru innokulirovaniya baloane Erlenmeyer conținând 200 ml de mediu Murashige și Skoog suplimentat cu acid naftipuksusnoy și 6- (, Ndimetilamino) purină, Lynsmeyer & Skoog vitamine și 3% zaharoză ca sursă de carbon. Baloanele sunt incubate cu agitare în lumină continuă timp de 4 zile, după care biomasa celulară este recoltată pentru extracția glicoproteinelor.
Exemplul 2
Obținerea de glicoproteine din celulele Gingko biloba
5 I din cultura obținută conform exemplului 1 au fost centrifugate la viteză mică și celulele colectate (greutate umedă de 1,5 kg) au fost extrase cu 1,5 I etanol 70% conținând acid sulfuric 1%. Extracția se repetă de două ori, prin extragerea cantitativă a principalelor glicoproteine. După neutralizare, extractele sunt filtrate pentru a elimina turbiditatea și se concentrează în vid la 50 ° C până la eliminarea completă a etanolului. Concentratul apos este încălzit la 85 ° C timp de 30 de minute și centrifugat din nou pentru a îndepărta precipitatul care este aruncat. Soluția limpede rezultată este ultrafiltraată utilizând o membrană Centricon R cu o limită de tăiere de 40.000 Dalton pentru a exclude substanțele cu greutăți moleculare ridicate.
Exemplul 4
Preparate cosmetice
100 g de emulsie ulei-în-apă conține, g:
Soluția din Exemplul 2 sau 3 a fost 10,0
Acetat de alcool lanolină PEG-10 - 2.0
Alcool cetiar stearic - 1,5
Palmitat de palmitat 2,0
Acid stearic - 7.0
Octil octanoat 7,5
Potasiu de potasiu - 0,5
Conservanți - Dacă este necesar
Aromă - Dacă este necesar
Apă purificată - Cât de mult este necesar până la 100
Exemplul 5
Preparate cosmetice
100 g de emulsie ulei-în-apă conține, g:
Soluția din Exemplul 2 sau 3 a fost 10,0
Cetil stearil glucozid - 5.0
Uleiul de jojoba - 10,0
Isopropil miristat 8,0
Dimeticonă - 0,5
Antioxidant - Dacă este necesar
Conservanți - Dacă este necesar
Aromă - Dacă este necesar
Apă purificată - Într-o cantitate necesară la 100
Date experimentale suplimentare.
Exemplul 6
Preparate cosmetice
Soluție în apă, g:
O soluție de amestec din exemplul 2 sau 3 - 2,00
Imidazolidinil uree - 0,30
Metilparaben 0,20
Hidroxietilceluloză - 2,00
Exemplul 7
Preparate cosmetice
Gel, g:
O soluție a amestecului din exemplul 2 sau 3 - 1,00
Propilen glicol, diazolidinil uree, metilparaben, propil paraben - 1,00
Apă purificată - Dacă este necesar, până la 100 ml
2. Preparat cosmetic pentru hidratarea pielii cuprinzând, ca agent activ, un amestec de glicoproteine conform revendicării 1.
3. Preparat cosmetic conform revendicării 2, sub formă de pulverizare apoasă, loțiune, soluție, emulsie, gel, unguent, cremă.
Trimiteți-le prietenilor: