Diagnosticul de laborator al bolii Aujeszky - stadopedie

Boala Aujeszky (AD, pseudorabiei, paralizie tabloid infecțioasă, ciuma mâncărime, senzație de mâncărime nebun) - boală acută Leaky cu animale / fermă de toate felurile, animalele cu blană și rozătoare. Primatele sunt stabile de la mamifere. Animalele tinere sunt mai sensibile decât adulții. Păsările nu sunt sensibile. AD este caracterizata prin semne de leziuni ale creierului și măduvei spinării, mâncărimi severe și zgârierea (toate speciile altele decât porcine).







Boala apare în toate țările europene, America de Sud și de Nord, Africa, Asia sub formă de enzootică și provoacă mari daune economice.

Virusul bolii Aujeszky (BWA) aparține familiei Herpesviridae. subfamilia Alphaherpesvirinae. genul Varicellavirus. În primul rând stabilit și a descris boala in Europa, maghiar de știință A. Aueski în opțiunile 1902g.AG la BWA ustanovleno.Metodom nu cruce AG înrudire BWA și simplu gerpesa.Virus izofluranul induce BHA, KSA, PA.

Diagnosticul se bazează pe date epizootice, simptome ale bolii, modificări pathoanatomice și rezultate ale studiilor de laborator.

Metode de bază de diagnostic de laborator: difuziunea virală sau mai imunofluorescența directă și indirectă, RDP, radioimunotest Me-Todd, test de piele, RN, RAC, ELISA și bioanaliză.

Izolarea virală. Pregătirea și prepararea materialului. Pentru a izola agentul cauzal al bolii lui Aujeszky, se utilizează creier, bucăți de plămâni, splină, ficat, ganglioni limfatici, amigdali, obținuți din autopsia animalelor moarte. În viața porcilor bolnavi, virusul poate fi izolat din secrețiile nazale, în care apare în ziua a 4-6 a bolii și persistă timp de 5-11 zile după recuperare. De la animalele avortați se utilizează fructe și placente.

Atunci când materialele de adunare pentru examenul virusologic trebuie să fie conștienți de distribuția inegală a virusului în diferite părți ale creierului, astfel încât să se evite erorile de diagnostic, trebuie luate cel puțin 2-3 probe din diferite părți ale creierului, situate la o anumită distanță unul față de celălalt. De obicei, la deschiderea pieselor selectate ale cerebelului, bulbului rahidian din diferite locuri ale emisferelor cerebrale ale nervului tesut.

Materialul colectat este plasat în sticle sau tuburi sterile de penicilină și este livrat la laborator într-un termos cu gheață. Materialul poate fi conservat într-o soluție tamponată de 50% glicerol (pH 7,2-7,4). Secretele cavității nazale sunt colectate cu tampoane sterile de bumbac, care sunt injectate în căile nazale și apoi imersate în eprubete cu soluție Hanks. conținând antibiotice.

În documentul de însoțire este necesar să se furnizeze informații despre imunizarea animalelor și a vaccinului utilizat.

În laborator, materialele sunt prelucrate prin metodele uzuale: se prepară o suspensie de 10%, se centrifughează la 3-5000 rpm timp de 15-30 minute. Materialele conservate cu glicerină sunt spălate preliminar din acesta.

Pentru o mai mare probabilitate de izolare a virusului și o scădere a numărului de probe testate, bucăți din diferite părți ale creierului de la un animal sunt combinate într-o probă comună, care este apoi măcinată, tratată cu antibiotice și examinată. Pentru o retenție mai bună a virusului în suspensie, se pot adăuga 1-2% din vițelul sanguin inactivat. Înainte de utilizare, suspensia trebuie depozitată într-o formă înghețată și congelată (minus 30 ° C) sau la 4 ° C.

Infecția animalelor. Ca model de laborator pentru izolarea virusului Aujeszky din materiale patologice folosesc de obicei doi iepuri cântărind 2-2,5 kg, care se administrează intramuscular sau subcutanat cu suspensie de 1 ml de 10% din materialul de testat. În acest caz, perioada de incubație durează 36-48 de ore, uneori durează 4-6 zile, iar în unele cazuri până la 12 zile.

Distinge encefalitic. meningeal, paralitic, zudnevuyu și forme șterse ale bolii. Cursul infecției experimentale depinde în mare măsură de modul de infectare.







Forma encefalitară începe cu anxietate. care trece într-o excitație puternică, - se execută în jurul valorii de animale de companie cușcă-nervos oglya dyvayas, el a remarcat midriază, agățării sau urechi, macinarea dintilor, scurgerea excesiva de saliva din gura. Excitația se înlocuiește cu depresie - pacienți iepuri se află pe partea ta sau pe stomac, spate labe întinse de multe ori, atunci când încercarea de a obține animalele își pierd echilibrul și cad. Moartea are loc în perioada unui atac de excitare sau opresiune; Moartea este adesea precedată de paralizia membrelor.

Forma Zune este cea mai tipică pentru iepurii cu injecție intramusculară sau subcutanată a materialului. În cazuri pozitive la animale, după o perioadă de incubație de 2-3 zile, există o mâncărime puternică în locul inoculării. Inițial, se observă anxietate generală, animalul se trezește adesea, privind înapoi la locul introducerii materialului, apoi începe să lingă și să scoată lana din această zonă. De multe ori se poate observa cum un iepure, cu amărăciune, răstoarnă pielea și țesuturile musculare care stau la locul injectării. Uneori mâncărimi se observă în alte părți ale corpului, ceea ce duce la anxietate deosebit de severă. Iepurele cade pe partea sa si poate muri brusc, fara a dezvolta paralizie, sau apar la scurt timp inainte de moarte.

Forma meningeală se caracterizează prin excitație puternică, răzuire a dinților și opistoton. Animalul cade pe partea sa și moare în prezența convulsiilor clonice. Cu toate acestea, la autopsie în plicuri meningeale, macroscopic, uneori nu sunt detectate urme de inflamație. Ele pot fi detectate numai histologic (urme de meningită limfocitară).

Cu forme încețoșate și fulgere ale bolii lui Aujeszky, majoritatea iepurilor nu prezintă simptome ale bolii. De obicei mor noaptea. Seara, în ajunul morții, animalul pare destul de normal, iar dimineața se află cadavrul într-o poziție caracteristică - pe partea sa.

Bioîncercările considerat pozitiv dacă iepurii sunt ucise cu semne clinic-glet ale bolii Aujeszky (clinica nervos, prurit, zgariere) 2-10 zile după inoculare o suspensie a materialului patologic. Dacă iepurii mor fără semne ale bolii lui Aujeszky, biotestul se repetă folosind materialul patologic din primul pasaj. Se crede că inocularea materialului în camera anterioară a ochiului de iepure are ca rezultat o formă caracteristică zudiformă a bolii. Țesuturile creierului și măduvei spinării, precum și organele parenchimatoase (plămâni, ficat) servesc drept material pentru izolarea virusului de la iepurii moarte. Moartea iepurilor după introducerea materialului patologic de la porcine sau animale purtătoare de blană fără semne de mâncărime și zgâriere poate indica izolarea tulpinilor de vaccin ale virusului Aujeszky.

Se arată că culturile celulare sunt la fel de sensibile la virusul Aueș-ki ca la iepuri; în plus, ele pot fi utilizate pentru diagnosticul de laborator al cursului atipic al bolii, în care experimentele de identificare a virusului în creierul porcinelor prin infectarea iepurilor produc rezultate negative sau atipice.

Infecția culturii celulare. Pentru izolarea virusului de la porcii morți, bolnavi și iepuri frecvent culturi primare utilizate tripsinizează celule de rinichi de porc și de tiroidă, gambe-ing semințe, fibrocite de embrion de pui, linia transplantabil PK-15, BHK-21. La virus, subculturile primului pasaj al rinichilor de porc și de bovine sunt foarte sensibile.

Când se izolează inițial un virus dintr-un material patologic, este mai bine să se introducă tuburile într-un tambur rotativ, ceea ce ajută la scurtarea timpului de apariție a acțiunii citopatogene. Pentru a identifica ultima eprubetă timp de 5 zile pe zi, văzută sub micro-scară. În absența modificărilor citopatice în a 5-a zi, culturile sunt supuse unei singure înghețări și dezghețări și se face un pasaj repetat. Fiecare material trece de 3-5 ori.

Odată cu izolarea primară a virusului, semnele de acțiune citopatogenă apar în ziua a 4-5a după inocularea culturii. În pasajele ulterioare, calendarul apariției CPD este redus la 15-20 de ore și devine mai pronunțat. Natura schimbărilor citopatice în diferite culturi nu poate fi aceeași, datorită diferitelor efecte ale virusului asupra celulelor epiteliale și fibroblastice. În cultura celulelor renale, a unui porc, a unui embrion de porc sau de iepure, efectele citopatogene ale virusului sunt exprimate în formarea de sincițiu. La început, apar focare de celule rotunjite, limitele între care dispar; iar nucleele se mută în centru și formează conglomerate înconjurate de o cochilie comună. După câteva ore, grupurile acestor celule au o formă sferică, în citoplasmă ele par granulare. Apoi, există o exfoliere profundă a celulelor de pe suprafața sticlei.

În cultura de fibroblaste de embrion de pui efect citopatogen virusului apare rotunjirii celulelor și apariția granulozitate vacuolar-TION citoplasmei, urmată de desprinderea celulelor de pe suprafața sticlei. Titrurile virusului în perioada de dezvoltare maximă a CPD ajung, de obicei, la 10 6,5 - 10 7,5 TCD 50 / ml.

Diagnosticul bolii Aujeszky se face dacă specia aparținând virusului izolat în cultura celulară este confirmată în PH. Tulpinile virale ale virusului formează simplasturi tipice. Tulpinile, de multe ori pasivate în cultura fibroblastelor de pui, determină o mai mică exprimare a formării simplasturilor și a proliferării celulelor. Tulpinile, trecute în cultura fibroblastelor embrionilor pui, reduc virulența lor de 10-50 ori.







Articole similare

Trimiteți-le prietenilor: