Colorarea micro-preparatelor pentru detectarea flagelului,
capsule, spori și boabe de volute
Identificarea flagelului
Flagellatele bacteriilor sunt foarte subțiri și ușor de detașat. Prin urmare, ele pot fi detectate numai cu colorare specială sau cu ajutorul unui microscop electronic.
Identificarea flagelui în bacterii prin aplicarea metodelor convenționale de colorare cu coloranți anilină este imposibilă.
Flagellum, de regulă, devine vizibil dacă preparatul este pre-tratat cu mordant și apoi vopsit. Medicamentul gravat percepe mai ușor culoarea, dar cel mai important, flagelul, atunci când se depune pe ele, mordanții cresc și devin vizibili când sunt microscopici.
Există diferite moduri de colorare a flagelului, dar în fiecare caz în parte, în funcție de proprietățile individuale ale microbilor, trebuie să alegeți într-un fel sau altul.
Pentru a colora cu succes flagelul, trebuie respectate următoarele condiții:
1. Puritatea obiectelor și a ochelarilor trebuie să fie ideală.
2. Preparatul trebuie preparat dintr-o suspensie proaspătă de culturi de agar, nu mai veche decât cea zilnică și pentru unele specii (vibrio, bacil de fân) nu mai mult de 12 ore. O parte din materialul obținut din linia semințelor (mai aproape de apa de condensare), unde se transferă mai multă umiditate într-o eprubetă cu 1 până la 2 ml de apă de la robinet sterilă. Tuburile sunt incubate timp de 30-60 minute la temperatura camerei, apoi suspensia bacteriană este transferată într-o picătură de apă de robinet sterilă sau soluție salină aplicată pe alunecarea capacului. Atunci când se distribuie materialul pe alunecarea capacului, trebuie avut grijă să nu se deterioreze mecanic flagelul sau să-l îndepărteze de corpul bacteriei.
Frotiul trebuie să fie subțire, astfel încât persoanele să poată fi izolate una de cealaltă.
Apa pe sticlă trebuie distribuită într-un strat subțire pentru a accelera uscarea medicamentului și pentru a reduce pierderea de flagel.
Cea mai obișnuită metodă de a pata flagelul este folosirea metodei lui Leffler (Loffler). Metoda de pictura:
1. Pe un frotiu uscat și fix se toarnă mordantul într-o astfel de cantitate pentru a acoperi întreaga suprafață a geamului de acoperire și se așează timp de 3-5 minute la temperatura camerei.
2. După acest timp, preparatul este spălat cu grijă și bine spălat cu apă curgătoare.
3. Se prepară o soluție de fucsină (1 parte din soluție de alcool saturat de fucsină pe 10 părți apă) și preparatul se încălzește peste flacără până la apariția aburului.
4. Preparatul este spălat cu apă și microscopat.
Prepararea mordantului pentru detectarea flagelului de bacterii:
Se dizolvă 12 g de tanin prin încălzire în 48 ml de apă și la această soluție se adaugă 30 ml de soluție saturată de fucsin în 95% alcool etilic. Soluția este filtrată și depozitată într-un recipient din sticlă cu dop din sticlă măcinată. Mordantul este gata de utilizare la câteva zile după gătire și poate persista timp de câteva luni.
Pentru a detecta flagelul în protozoare, preparatele pot fi colorate într-un mod simplu, folosind albastru de metil, soluția lui Lugol sau metoda sofisticată a lui Romanovsky-Giemsa.
Detectarea capsulelor în bacterii
Capsulele nu au o afinitate pronunțată pentru vopselele de bază, astfel încât să detecteze capsule folosind diferite metode de preparare și coloritul lor micropreparatelor, în special având în vedere formarea și conservarea capsulelor de la diferite specii de bacterii.
Pentru a detecta capsula, aveți nevoie de un culori în interiorul capsulei și de un fundal exterior colorat.
Fundalul intern este reprezentat de o celulă microbiană colorată în interiorul capsulei. Și fundalul extern care înconjoară capsula poate fi natural sau artificial.
Dacă microbul menține capsula permanent, adică nu numai în interiorul microorganismului, ci într-un mediu nutritiv (Klebsiella), pregătirea pentru detectarea capsulelor pot fi preparate din culturi crescute in vitro în mediu de cultură. Și în acest caz, fundalul extern este creat artificial.
Dacă se formează germeni și reține capsula în interiorul microorganismului (antrax, ciuma, pneumococ), într-un astfel de caz este frotiu - amprenta organului afectat a ucis microorganisme (ficat, splina, ganglionii limfatici) sau din sputa, sângele conținut bubon. Fundalul exterior al capsulei va fi reprezentat de celulele țesutului.
Un micro preparat din cultura Klebsiella pentru a detecta o capsulă poate fi colorat folosind metoda Burri-Hins:
1. O picătură mică de carcasă neagră și o picătură de suspensie dintr-o cultură zilnică de agar de bacterii capsulare sunt aplicate pe o sticlă curată pură. Amestecul este agitat ușor cu o bucla. apoi un alt frotiu este făcut un frotiu, ca un frotiu de sânge.
2. După uscare în aer, și fixarea arzătorului cu flacără pregătire dokrashivayut timp de 2 - 3 minute carbol fucsin Tsilya diluat cu apă distilată 1: 1.
3. După terminare, preparatul este clătit ușor cu un jet de apă rece, uscat și microscopat. Pe fundalul unui tushev închis, se vor vedea celulele microbiene colorate, înconjurate de o capsulă incoloră. În absența unei capsule, la o celulă colorată în fuchsină, fundalul negru se apropie îndeaproape.
În acest caz, dacă diapozitivele preparat din materialul de testare, frotiu poate fi vopsit un colorant anilină, conform metodei lui Gram, conform metodei Romanovskgo - Giemsa. În fiecare dintre aceste trei metode de colorare pe fundalul celulelor țesutului colorat, se va vedea o capsulă incoloră care înconjoară celula microbiană colorată. Detectarea sporului.
Datorită grosimii cochiliei și a densității conținutului, sporii rămân nevopați când preparatul este tratat cu coloranți de anilină printr-o metodă simplă sau complicat de Gram.
Când se colorează de Gram sau de Leffler, o dispută din interiorul citoplasmei colorate a unei celule microbiene arată ca o granulă rotundă sau ovală care refractă puternic lumina.
Există mai multe metode de colorare a sporilor (Ziehl - Neelsen la Ganzen la Orzeszkowa et al.) Permiterea de a realiza o culoare contrastantă de spori din citoplasmă.
Metoda de colorare a micropreparatului:
1) La un preparat fix este suprapusă o fâșie de hârtie de filtru (pentru a proteja medicamentul de la precipitarea cristalelor de colorant) a fost turnat pe ea și soluția Ziehl lui. Preparatul este încălzit cu grijă timp de 3 până la 4 minute deasupra flăcării arzătorului. Pe măsură ce lichidul se evaporă, se adaugă colorantul.
2) Hârtia de filtru este îndepărtată și se aplică la un frotiu pe 2 - 3 picături de soluție 5% de acid (sulfuric, clorhidric, azotic sau acetic) timp de 30 de secunde.
3) Preparatul se spală bine cu un jet de apă rece și se usucă.
4) Colorat cu o soluție de Leffler albastru de metilen timp de 1 până la 2 minute.
5) Preparatul este spălat cu un curent de apă, uscat și microscopat. Pe fundalul albastru al citoplasmei, sunt vizibile spori de liliac-roșii.
Această metodă vă permite să detectați sporii nu numai în procesul de formare a acestora în interiorul celulei, ci și după ce sporii formați s-au vărsat din celula microbiană distrusă.
Pregătirea fuchsinului carbolic Tsilya:
10 ml. dintr-o soluție alcoolică saturată de fucsină se dizolvă în 100 ml soluție 5% de acid carbolic.
Detectarea boabelor volute
Cerealele de volute (substanțe de rezervă de natură polifosfată) pot fi găsite în celulele multor microorganisme.
În bacterii și actinomycete, granulele de volute sunt situate în citoplasmă, drojdii și ciuperci în vacuole. De regulă, volumul este mai mare în celulele tinere.
În starea nevopsită, granulele groase ale volutei sunt separate de restul plasmei printr-o refractare mai mare. Cu toate acestea, este mai bine să existe prezența boabelor de volute în preparatele colorate. Pentru detectarea boabelor volutei, se folosește culoarea albinelor Ligner albastru. Cerealele de la volute sunt astfel colorate în albastru-violet, iar protoplasmul - în albastru.
Colorarea diferențială a granulelor volute poate fi realizată prin diferite metode de colorare, inclusiv metoda Neisser. Neisser a dezvoltat și propus să identifice boabele de voluteină din celulele bacteriilor difterice.
Când se pictează conform metodei lui Neisser, boabele volute sunt vopsite în albastru sau maro închis, iar protoplasmul - în maro deschis.
Cerealele de volute pot fi dezvăluite prin colorare conform metodei Omelyansky. Pentru a face acest lucru, pentru un frotiu fix se toarnă carb fuchsin Tsil timp de 30 de secunde. Apoi vopseaua este drenată, preparatul este spălat cu apă și decolorat timp de 30-40 secunde cu o soluție de acid sulfuric 1%. Apoi acidul este drenat, preparatul este spălat cu apă și vopsit cu albastru de metil la o diluție de 1:40 timp de 30 de secunde. După spălarea cu apă, preparatul este uscat și microscopat.
Boabele volute cu această metodă de colorare sunt roșii de liliac și sunt vizibile în mod clar pe fundalul citoplasmei albastre.
Când se colorează prin metoda de preparare Gram volutin cereale ton și intensitatea culorii nu se diferențiază de citoplasmă, deci metoda de colorare Gram pentru detectarea boabelor volutin utilizate nu are nici un sens.
În unele microorganisme, substanțele de rezervă se acumulează sub formă de granule de carbohidrați. Ele pot fi detectate atunci când celulele sunt tratate cu soluția Lugol. Granulele de substanțe asemănătoare amidonului sunt colorate în albastru, iar granulele de polizaharide asemănătoare glicogenului sunt de culoare brun-roșcat.
Colorarea micropreparatelor din materialul de testare
Micro preparatele din sânge sunt colorate de Romanovsky - Giemsa, fuchsin, albastru de metil sau alți coloranți anilinici.
Pentru a observa etapele vegetative ale protozoare intestinale sunt paraziți de colorare intravitală soluție Lugol, soluții slabe de coloranți bazici (eozină, albastru de metil, etc.), la o diluție de 1: 1000 și chiar 1: 10000 pentru paraziții studiu mai detaliate preparate lichide clemelor fixe (lichid Schaudinn metil sau alcool etilic), și colorate cu hematoxilină, albastru de metil, fucsin, vopsea Romanovsky.
La examinarea microscopică a tampoanelor de urină, a lichidului cefalorahidian, a preparatelor sputa fixate colorate de Gram, Romanovsky - Giemsa, albastru de metil
diapozitivele fixe de conținut purulent ulcere punctates buboes, ganglionii limfatici, în funcție de agentul patogen Gram intenționat pătat de Storm, Romanovsky - Giemsa, argintare de Morozov.
Trimiteți-le prietenilor: