Site de restricție. Enzimă de restricție. VNTR-polimorfism.
Polimorfismul lungimii fragmentelor de restricție (RFLP) a fost unul dintre primele. Faptul că aceste enzime de restricție (enzime de restricție) și modul în care acestea funcționează sunt descrise în capitolul 7. Fiecare enzimă de restricție taie molecula de ADN care să recunoască o secvență specifică de nucleotide la aceasta, care se numește un situs de restricție.
Dacă apare o mutație în locul de restricție, indiferent unde este localizată și secvența de nucleotide se modifică, atunci enzima de restricție nu recunoaște un astfel de situs modificat și nu taie molecula ADN în acest loc. În același timp, enzima de restricție continuă să taie locurile de restricție învecinate neschimbate.
Ca rezultat, unul dintre fragmentele de restricție din ADN-ul mutant este mai lung decât fragmentele corespunzătoare din ADN-ul nemutant. Pentru a detecta prezența unui situs de restricție polimorfic în ADN, după digestia cu o enzimă de restricție, el este supus la electroforeză.
În timpul electroforezei, fragmentele ADN sunt distribuite în funcție de greutatea lor moleculară. În mod tipic, după restrângerea ADN-ului genomic, se formează sute de mii de fragmente. Aceste fragmente sunt denaturate, adică sunt convertite într-o singură notă, acestea sunt transferate într-un filtru de nitroceluloză cu care sunt strâns legați. Amintiți-vă că această procedură se numește Southern blotting.
Deoarece unele enzime de restricție taie destul de des ADN-ul, căutarea polimorfismului poate fi efectuată utilizând diferite sonde de ADN care au fost anterior marcate cu fosfor radioactiv. Acestea pot fi sonde pentru secțiuni de gene sau orice alte secvențe ADN, locația cărora este cunoscută.
Astfel, mutațiile în gene pot fi detectate dacă aceste mutații schimbă locul de restricție pentru anumite enzime de restricție. În prezent, sunt cunoscute sute de restrictaze care recunosc diferite secvențe nucleotidice. La dispoziția cercetătorilor există mii de sonde ADN la diferite părți ale genomului.
Utilizarea acestor capacități a condus la identificarea multor mii de situri polimorfe în genomul uman. In majoritatea cazurilor, RFLP este sistemul dvuhallelnuyu (prezența sau absența unui situs de restricție), oricât de înaltă frecvență astfel de polimorfisme a fost folosit cu succes in cartografierea multor gene boli ereditare, inclusiv mukovistsi-doză, neurofibromatoza de tip 1, și multe altele.
număr semnificativ mai mare de alele, și deci o mai mare diversitate genetică, precum și valoarea informațiilor de la un alt tip de polimorfismul ADN care sunt numite variabile numerice repetitive în tandem sau VNTR-polimorfism.
Descriindu-se diferitele tipuri de ADN care apar în genomul uman, am menționat repetatele minisatellite. Aceste repetări sunt împrăștiate în genom, secvența principală a acestora poate include până la 80 de nucleotide, iar numărul de repetări ale secvenței principale poate varia foarte mult.
Detectarea polimorfismului VNTR porniri, precum și identificarea RFLP, taierea ADN-ului genomic cu o enzimă de restricție specifică, electroforeza fragmentelor, Denaturarea și Southern blot. Diferența constă în faptul că sondele ADN specifice pentru o anumită repetare minisatelită sunt folosite pentru hibridizare.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: