Studii biochimice ale leucocitelor

Test de sânge

Studii biochimice ale leucocitelor

Studiile de tip cytochemical ocupă un loc important în diagnosticul diferențial al hemoblastozei. În plus față de semnificația teoretică mare, rolul lor în clarificarea diferitelor forme de leucemie este incontestabil. Dezvoltarea metodelor eficiente de diagnostic diferențial și terapie a leucemiei acute, în special a leucemiei limfoblastice acute a copiilor, a devenit posibilă numai după introducerea în practica clinică a metodelor de diagnosticare citochimică.

Cercetările cytochemice se efectuează în frotiuri de sânge, în leuco-concentrate, în măduva osoasă. Ele se bazează pe utilizarea reacțiilor chimice specifice de culoare pentru determinarea diferitelor substanțe din celule. Într-un studiu citochimic, se utilizează o evaluare semicantitativă a rezultatelor, folosind principiul G. Astaldi (1957), bazat pe detectarea unei culori specifice de grade diferite de intensitate. În funcție de ele, elementele investigate sunt împărțite în patru grupe: negative (-), slab pozitive (+), pozitive (++) și brusc pozitive (+++).

Pentru a cuantifica rezultatele, 100 de celule de un anumit tip sunt numărate și diferențiate conform principiului indicat, atunci numărul de celule cu aceeași intensitate de culoare este înmulțit cu numărul de plusuri corespunzătoare grupului dat, suma acestor produse fiind unitățile convenționale de unități. Activitatea enzimelor este exprimată în unități convenționale sau sub forma unui coeficient mediu de coeziune chimică (SCC). Coeficientul mediu citochimic este calculat conform formulei Keplow în modificarea lui Astaldi și Verga:

unde numerele (1, 2, 3, 4) indică intensitatea culorii; literele (a, b, c, d) - numărul de celule numărate cu o anumită intensitate de culoare (reacție citochimică).

Metoda de evaluare semiquantitativă este orientativă, dar face posibilă compararea distribuției substanțelor studiate în diferite elemente celulare sau în aceleași celule în anumite condiții patologice. Trebuie totuși să se țină seama de faptul că metoda citochimică poate fi utilizată doar ca supliment la alte metode de investigare - morfologice, imunologice, citogenetice.

Datorită glicogenului, cerințele energetice ale celulelor sunt furnizate în principal. În special, datorită reacțiilor de glicogenoliză, se formează energia necesară funcției de fagocitoză. Glicogenul localizat în citoplasma celulelor. Pentru detectarea citochemică a glicogenului, reacția PAS cea mai frecvent utilizată sau reacția SHIK (pentru numele reactivului - acidul Schiff-iodic).

reacția PAS-pozitiv poate produce, de asemenea substanțe, cum ar fi glicozaminoglicani, mucopolizaharide, glicoproteine, mukoprotei HN și colab. Glicogen pot fi ușor diferențiate de alte substanțe sau probe cu salivă α-amilază.

Proba cu saliva. Medicamentul este plasat în salivă proaspăt sărată într-un termostat la 37 ° C timp de 30 de minute, apoi este colorat cu procedura de mai sus. Când medicamentul este incubat, a-amilaza conținută în saliva scindează glicogenul și, atunci când reacționează cu reactivul Schiff, culoarea roz nu se dezvoltă în glicogen.

O probă cu a-amilază. Medicamentul este plasat într-o soluție de a-amilază (1 ml de amilază filtrată este dizolvată în 40 ml de soluție de clorură de sodiu 0,85%) timp de 30 de minute într-un termostat la 37 ° C.

Valori normale. În frotiuri din sângele periferic și măduva osoasă de glicogen conținute în citoplasmă neutrofile diferite grade de maturitate, dar, de preferință, în mai matur (ca abundente și difuze granulație fină). În citoplasma megacariocitelor și trombocitelor, glicogenul este definit ca granule unice mari. În sângele oamenilor sănătoși valoarea neutrofilelor intens colorate (+++) variază% din 2 la 12 numărul total de neutrofile, intensitatea medie a culorii (++) - în termen de 72-90%, ușor colorat (+) - 4-18 %. SCC a glicogenului în neutrofilele persoanelor sănătoase este de 1,71-2,04 (Cost EA 1975), și conform datelor lui VB Letsky (1970) - 2,52. La pacienții vârstnici și senile a existat o scădere semnificativă a SCC a glicogenului la 1,98 (Germanov VA Sergeeva TM 1972).

În limfocitele de oameni sănătoși, glicogenul este conținut sub forma unui număr mic de granule în 10-12% din celule. În megacariocite, glicogenul este detectat sub formă de granule (de la un singur la 30-50), asemănător cu grupurile de plăci de sânge. Numărul de megacariocite pozitive la glicogen este de 60% din numărul total de megacariocite.

Semnificația clinică. limfotsitov4 Număr crescut glikogenpolozhitelnyh (70-80%) este tipic pentru boli limfoproliferative, in special pentru leucemie limfocitară cronică (glicogen definit ca Kibbles). Creșterea conținutului de glicogen în neutrofile este observată în diferite procese inflamatorii, diabet, policitemia vera. Diminuarea observată la agranulocitoza, boala radiatii, leucemie mielogenă cronică - aproximativ 2 ori comparativ cu norma, in special in progresia bolii (glicogen totală determinată prin tehnici biochimice, poate fi chiar crescută datorită leucocitoza). Când purpură trombocitopenică și simptomatice număr trombocitopenie Forme glikogenpolozhitelnyh megacariocitelor a redus semnificativ (după splenectomie este readus la valori normale).

La celulele leucemice cu leucemie mieloblastică acută, glicogenul nu este deloc prezent sau distribuit difuz sau sub formă de granularitate fină; în leucemia limfoblastică acută - sub formă de granule mari localizate în citoplasmă în jurul nucleului; În leucemia monoblastică acută, celulele blastice conțin o cantitate mică de glicogen difuz colorat; cu eritromeloza acută, glicogenul sub formă de granule se găsește în eritroblaste.

Lipidele sunt localizate în citoplasma celulelor, în principal în membranele organelilor și se găsesc predominant în granulocite neutrofile. Ele joacă un rol important în permeabilitatea membranelor. Celulele din măduva osoasă și din sângele periferic conțin lipide simple sub formă de grăsimi neutre, acizi grași liberi, precum și lipide complexe - fosfolipide. Studiul citochimic se bazează pe utilizarea substanțelor care se dizolvă în grăsimi (Sudan III, Sudan IV, Sudan negru etc.). Pentru a identifica grăsimile neutre, se folosește Sudan III, colorând grăsimea la portocaliu. Lipoizii sunt mai bine identificați de Sudan în negru (colorarea neagră). În studiile hematologice, colorarea frotiurilor este mai frecvent utilizată în Sudan III.

Vedeți tehnici de pictura:

Semnificația clinică. Creșterea CSS a lipidelor a fost observată la vârstnici. O creștere a conținutului de lipide în neutrofile se observă în leucemiile acute mieloblastice și monoblaste, cu evoluția leucemiei mieloide cronice. Cu leucemie acută nediferențiată, celulele blastice conțin lipide într-o cantitate mică (2-3%). Reducerea SCC a lipidelor a fost observată în timpul foametei terapeutice. Reducerea conținutului de lipide în neutrofile se evidențiază în reumatism, în procesele inflamatorii. În leucemia limfoblastică acută, lipidele din celulele blastice nu sunt detectate.

Peroxidaza (mieloperoxidaza)

La om, peroxidaza se găsește în leucocite, trombocite, în lapte, precum și în țesuturile în care apare metabolismul eicosanoidei. Un grup protetic este un protogem. Reacția catalizată de peroxidaza, peroxid de hidrogen este redusă prin compușii care acționează ca donor de electroni, cum ar fi ascorbat, chinone sau citocromul C. Reacția catalizată de complex peroxidaza și are un total arata dupa cum urmeaza:

Peroxidaza este localizată în primul rând în granularitatea specifică a citoplasmei granulocitelor, este un marker al celulelor de natură mieloidă. Este absent în celulele limfoide. Având în vedere specificitatea neutrofilelor, începând cu fazele timpurii de maturare, enzima a fost numită mieloperoxidază. Activitatea peroxidazei este supusă fluctuațiilor mari.

Vedeți tehnici de pictura:

Valori normale. În sângele oamenilor sănătoși, activitatea peroxidazei este detectată în principal în citoplasma granulocitelor, într-o măsură mai mică și monocite impermanent. Enzima apare în celule la etapele de promilocitare și la mieloblaste mai mature. Limfoblastele nu conțin peroxidază. 3-16% dintre neutrofile sunt colorate pozitiv (+++), 60-90% pozitive (++), altele sunt pozitive (+) (Cost EA 1975). SCC a peroxidazei în neutrofilele persoanelor sănătoase este de 2,5 (Lecky VB 1970). Eozinofilele se caracterizează printr-o reacție puternic pozitivă la peroxidază.

Semnificația clinică. În celulele blastice, activitatea enzimatică este ridicată în leucemia mieloblastică acută. La pacienții cu leucemie mielogenă cronică, în special în stadiul terminal, SCC scade la 1,6; o activitate slabă a enzimei este observată în leucemia monoblastică acută și este absentă în leucemia limfoblastică acută. Determinarea activității mieloperoxidazei ca marker al seriei mieloide este utilizată pentru diagnosticul diferențial al leucemiei acute mielo-blastice și limfoblastice. Scăderea activității enzimatice a fost observată cu infarct miocardic, reumatism, tuberculoză și tumori.

Fosfatază alcalină

Activitatea fosfatazei alcaline este detectată pentru prima dată în stadiul metamelocitelor, crește pe măsură ce se diferențiază de neutrofile segmentate și apoi scade din nou odată cu vârsta celulelor. Activitatea enzimatică este determinată în granule specifice citoplasmei. Fosfataza alcalină se referă la grupul de enzime hidrolitice clivaj diferite esteri fosforici într-un mediu alcalin (pH optim 9,6), realizează hidroliza odnozamegtsennyh ortofosfat esteri. Cea mai comună definiție a activității enzimatice prin metoda de cuplare azo.

Vedeți tehnici de pictura:

Semnificația clinică. Creșterea activității enzimei în citoplasmă neutrofilelor observate în policitemia vera, mielofibroza cronică, anemii aplastice. Creșterea activității fosfatazei alcaline în citoplasmă neutrofile în nelimfoblastnyh leucemii acute - trăsătură favorabilă deoarece acești pacienți sunt mai susceptibile de remisie. Creșterea activității enzimei detectată la copii în primele șase luni ale unităților de viață 150-159. creste activitatea enzimatică in timpul sarcinii in multe procese inflamatorii, boli hepatice cronice, infecții, tumori maligne, cetoacidoză diabetică, care iau contraceptive orale, sindromul Down, infarct miocardic, și altele. O scădere mai accentuată a activității fosfatazei alcaline (la absența completă) este observată în leucemia mieloidă cronică. care poate servi ca un diagnostic diferential de important complement al leucemiei mieloide cronice și mielofibroza și reacțiile leukemoid m tip heloid. Reducerea activității enzimei este observată în bolile virale, inclusiv hepatita infecțioasă, boli de iradiere, siclemia, boli ale țesutului conjunctiv.

Acid fosfatază

Activitatea fosfatazei acide se găsește predominant în limfocitele din sângele periferic și neutrofile (maxim la mielocite neutrofile); localizarea este asociată cu lizozomii de citoplasma celulară. Acid fosfataza este o enzimă hidrolitică (acțiune optimă la pH 5.2). Pentru studiile citochimice, se folosesc de obicei metodele de cuplare azo. Naftolfosfaty sub influența fosfatază acidă clivat pentru a forma un drum liber-naftol, care reacționează cu sarea de diazoniu. Ca rezultat, în locurile determinate de activitatea enzimatică a precipitatului a colorantului azoic de culoare roșie pe fond verde.

Vedeți tehnici de pictura:

Valori normale. În celulele sanguine, activitatea enzimatică este detectată la 12% din granulocitele mature și în limfocite. În cazul neutrofilelor din sângele periferic al persoanelor sănătoase, activitatea enzimei fluctuează în intervalul de 11-72 de unități. adică SCC este 0,386; în limfocite - 25,0-28,8 unități. care este, SCC este 0.286. La copii, activitatea fosfatazei acide în neutrofile este mai mare decât la adulți.

Semnificația clinică. Activitatea fosfatazei acide este crescută în leucemia acută - monoblastic mieloide și, mai ales în leucemia acută promielocitică (în formă difuză), leucemia limfoblastică acută (sub formă de granule). Creșterea activității enzimei este observată în neutrofile în timpul proceselor inflamatorii (pneumonie acută), tuberculoza, infarct miocardic, infecții acute chirurgicale, tumori maligne. Creșterea activității enzimatice în limfocite observate în amigdalită cronică, la diferite boli alergice după imunizare.

Esterases nespecifică

Nespecific esterază - un grup de enzime (hidrolaze) de specificitatea scăzută a scindeaza esterilor acizilor carboxilici cu catenă scurtă de carbon. Localizați în citoplasmă celulele, în principal în lizozomi. Activitatea acestor enzime în grade diferite, este detectată în toate tipurile de leucocite (maximum granulocite imature și monocite). Cea mai mare activitate a fost observată în monocitele din sânge. Pentru a determina activitatea enzimei folosind diferite substraturi (α-naftilatsetat, naftol-AS-acetat, naftol-AS-D-cloracetat, etc.). Sub influența substratului nespecific esteraza este eliberat naftol liber, care conferă o colorare de culoare cu săruri de diazoniu.

dehidrogenază

Dehidrogenazele sunt enzime care catalizează reacțiile de reducere a oxidării care implică două substraturi. Unele dintre ele sunt direct implicate în procesul de oxidare biologică, efectuarea transferului de protoni din substratul de oxidare trece la un alt substrat. Dehidrogenaza catalizează o astfel de reducere, ca donor de hidrogen specific și acceptor acestuia. Dehidrogenazele sunt prezente într-o mare varietate de celule și țesuturi. Ele sunt localizate în citoplasmă și mitocondriile, pot fi detectate la o expunere cytochemically celulă cu substrat corespunzător care acționează dehidrogenază în prezența compușilor tetrazoliu care sunt capabile de a accepta protoni pentru a forma compuși colorați insolubili.

Valori normale. La persoanele sanatoase, LDH și α-GPDH detectat sub formă de granule de culoare albastră în neutrofile, limfocite, trombocite și mieloblasti din sângele periferic, granulocite, megacariocite, eritro și măduva osoasă normoblasts.

SDC a SDG de limfocite este de 1,10 ± 0,05; a-GDDH - 0,80 ± 0,08. La copii, activitatea LDH este detectată în 46% din limfocite. La adulți, punctiformă de măduvă osoasă la 88% din celule nediferențiate au o activitate enzimatică (+), toate celulele eritroide nucleate și granulocite sunt active pe (+) sau (++).

Semnificația clinică. Creșterea activității LDH și α-GPDH în granulocite observate la pacienții cu tumori maligne. Scăderea activității detectate în limfocite în timpul atacurilor de astm, leucemie limfocitară cronică, în granulocite - în leucemia mieloidă cronică.

Articole similare

• Explorând modul în care călătoria afectează viața unei persoane, l

• Morfologie și citochimie a leucemiei acute - reacții citochimice

• Studiu bacteriologic și concluzii

Trimiteți-le prietenilor: