Diagnosticul diagnostic al infecțiilor cu transmitere sexuală

Microscopia preparatelor colorate

Pentru detectarea trichomonazelor vaginale, frotiurile cu materialul după fixare pot fi colorate prin diverse metode, atât simple - colorare cu un singur colorant, cât și cele complexe - colorare cu mai multe coloranți. După vopsire, frotiurile sunt microscopate utilizând un sistem de microscop de imersiune și o mărire totală de 500 până la 1000 de ori. Materialul este luat din leziuni cu o sondă sterilă și aplicat pe o sticlă curată, degresată, cu un strat subțire uniform. După uscarea în aer, preparatele sunt fixate timp de 3 până la 5 minute în metanol sau în alcool etilic 96% sau într-un amestec de Nikiforov. Următoarele metode de pictură sunt cele mai des folosite:

1. Colorarea lui Romanovsky-Giemsa. Preparatul fix este plasat într-o soluție de colorant de lucru (soluție de colorant stoc diluat cu apă distilată într-un raport de 1:10), la 25 - 60 de minute, apoi se spală cu apă, se usucă și se mikroskopiruyut folosind sistemul de imersie. Kernel Trichomonas vopsite în culoarea violet sau violet-rubin, protoplasma - în albastru, blefaroplast, flageli, aksostil și cromatină boabe de protoplasmă sunt vopsite în roz sau roșu;

soluție apoasă de albastru de metilen 2. Colorare 1% (1 g albastru de metilen se dizolvă în 100 ml apă distilată, filtrată printr-un filtru de hârtie). In formularea este aplicată o soluție 1% de albastru de metilen timp de 1 minut, apoi clătite bine sub un jet de colorant rămas apă rece, se usucă și se mikroskopiruyut. Medicamentul este albastru. Petele de floră bacteriană în albastru de intensitate diferită. Trichomonas vaginalis forme diferite situate în mucusul dintre elementele celulare - shell poate fi văzut clar, miezul este poziționat excentric, intens colorate in albastru, oferta protoplasmă, mesh, vacuole lumină albastră, incolore.

3. Colorarea 0,5% soluție verde briliant (0,5 g verde strălucitor a fost dizolvat în 100 ml de apă clocotită distilată și se filtrează fierbinte prin hârtie de filtru). In formularea este aplicată o soluție apoasă 0,5% de verde strălucitor timp de 1 minut, colorant apoi clătite bine cu apă rece de la robinet, se usucă și se mikroskopiruyut. Medicamentul este verde - nucleele celulare sunt colorate verde, protoplasmul - în albastru deschis. Slab verde. Flora bacteriană este colorată în verde de intensitate diferită. Trichomonas vaginalis distinge forme diferite, ele sunt situate între elementele celulare din mucus, învelișul poate fi văzut clar, nucleul intens colorat în verde, este poziționat excentric, mesh protoplasmă, culoare verde deschis, vacuole incolore.

4. Colorarea prin metoda Gram modificată. Metoda se bazează pe proprietatea Trichomonas vaginalis și a altor microorganisme Gram-negative în anumite momente de albire în etanol, pentru a da bază dokrashivatsya colorant violet și, după aceea, portocaliu-roșu suplimentar.

- Soluție apoasă 1% de violet cristal (1 g violet cristal este dizolvat în 100 ml apă distilată la fierbere, soluția este filtrată fierbinte printr-un filtru de hârtie);

- soluție apoasă de Lugolei (2 g de iodură de potasiu se dizolvă în 300 ml de apă distilată, se dizolvă 1 g de iod pur în soluția rezultată, se filtrează printr-un filtru din hârtie;

- 96% alcool etilic;

- 1% soluție apoasă de roșu neutru (1 g roșu neutru dizolvat în 100 ml apă distilată și filtrat printr-un filtru de hârtie.

Preparatul este acoperit cu o bandă de hârtie de filtru și umplut cu 1% soluție de violet cristal timp de 1 minut. Asigurați-vă că nu există bule de aer între hârtia de filtru și sticlă, acestea fiind îndepărtate prin ciupirea benzii cu un flacon de sticlă umezit cu violet cristal din hârtia de filtru. După 1 minut, hârtia este îndepărtată, preparatul este spălat cu apă de la robinet și turnat cu soluție Lugol, care este păstrat câteva secunde înainte de întărirea frotiului. Apoi, restul soluției de Lugol se spală și se procedează la decolorarea preparatului în 96% alcool etilic. Decolorarea se realizează sub controlul ochiului, scufundându-se alternativ și scoțând medicamentul din alcoolul din sticlă. Produsul este decolorat până când fluxurile de colorant purpurii nu mai curg din secțiunile sale subțiri și devin gri-deschis. Preparatul se spală rapid cu apă de la robinet și apoi se vopsește timp de 3 minute cu soluție apoasă 1% de roșu neutru. Preparatul este clătit bine până când jetul de apă care se scurge din acesta devine transparent, uscat și microscopic. Dacă culoarea este corectă, preparatul este roșu-portocaliu în secțiuni subțiri, liliac-violet pe cele groase. Nucleul elementelor celulare (leucocite, celule epiteliale) reține parțial culoarea violetă de bază, adică în centru ar trebui să fie vopsite în violet, la periferie în portocaliu-roșu. Calitatea înaltă a culorilor este asigurată de încheierea în timp util a decolorării preparatului.

Trichomonas vaginalis pictat pal - mantaua sub forma unei benzi subțiri de plasă înconjoară protoplasmei portocaliu-roșu de culoare, nucleul de liliac sau violet, flageli si membrana unduitoare nu este vizibil. Un răspuns pozitiv trebuie să fie dat când se detectează numai formele tipice ale trichomonaselor vaginale. Dacă întâlniți (rotunjite, nu tipic pictat, etc. ..), dar similar cu Trichomonas vaginalis protozoare, este necesar să se re-examineze materialul luat sau de a face culturi pe medii nutritive.

Microscopia preparatelor colorate este o metodă simplă, ieftină și accesibilă, care nu necesită cercetări imediate și echipamente speciale. Cu toate acestea, are sensibilitate scăzută și specificitate.

Metoda de cultură

Metoda culturală este cea mai sensibilă și mai specifică. Trichomonasii vaginali dau o creștere bună pe mediile de nutriție artificială, cu condiția respectării regulilor de prelevare a probelor de material pentru cercetare și cultivare. Suplimentele nutritive ar trebui să conțină antibiotice pentru a suprima creșterea microflorei concomitente. Tricomonazele vaginale sunt anaerobe facultative. Creșterea optimă într-un mediu slab acid, cu un pH mediu de 5,8 - 6,3 și + 37 ° C, deci înainte de cultura, mediul de cultură trebuie încălzit dacă este păstrat în frigider. Este necesar să se evite supraîncălzirea culturii de peste 37-38 ° C, deoarece creșterea temperaturii în Trichomonas vaginal este mai slabă decât scăderea. Materialul pentru examinare din leziuni trebuie luat cu o sondă sterilă sau cu o bucle bacteriene. Materialul pentru studiu poate servi drept centrifugare de spălare cu soluție salină sterilă, care este introdus în mediul de cultură cu o pipetă sterilă Pasteur. O pipetă sterilă Pasteur trebuie utilizată atunci când tulpinile izolate sunt reutilizate.

Când crescute în medii lichide Trichomonas vaginalis demersal pentru a da naștere unui gros solid alb mat din care pipetă Pasteur ia materialele pentru studiu în preparat nativ. Examinarea microscopică a culturilor și de identificare trebuie efectuată, 3 - 5 zile, la rezultate negative în 7 - 9 minute și 11-17-a zi după însămânțare, deoarece durata ciclului de dezvoltare a Trichomonas vaginalis în cultura depinde de zona de plantare. Din partea de jos a preparatului nativ creștere preparat prin una dintre metodele descrise mai sus și lentile mikroskopiruyut 40 sau 90, ocular 7 sau 10. Vaginal Trichomonas în câmpul vizual poate fi smocuri simple sau mari, se deplasează în mod activ, mișcarea este în mod clar flageli vizibil si membrana ondulatorie. Posibilă determinarea Trichomonas vaginalis metoda culturii RNIF (reacția imunofluorescență indirectă).

Metoda culturală este pe termen lung, care necesită medii scumpe.

Metoda imunologică

O metodă imunologică pentru determinarea antigenului de suprafață al Trichomonas vaginalis reacție specifică imunofluorescență indirectă (RNIF) formând „TrihoSlayd“. Materialul pentru studiu sunt frotiuri de leziuni care sunt aplicate la un microscop curat dekolirovannoe smântânit (cu o gaură specială) sonde de unică folosință din sticlă steril cu un tampon de bumbac cu înalte proprietăți de sorbție. Când materialul este aplicat cu un tampon, suprafața diapozitivului este atinsă în mod repetat. După uscare în aer de droguri fix 5 min, cu 96% etanol sau acetonă (aplicat la medicament câteva picături de acetonă anhidră până la evaporarea completă). Medicamentele fixe sunt cel mai bine să nu se păstreze, deoarece în timpul depozitării Trichomonas vaginalis sunt distruse, ceea ce poate face dificilă pentru a corecta diagnostic. După fixare, se efectuează o "colorare" a preparatului, care are două etape. În prima etapă, medicamentul este aplicat 30 pl reactiv №1- specific protivotrihomonadnye AT - și a fost incubat într-o cameră umedă (pentru a se evita uscarea reactivului) la temperatura camerei sau la 37 ° C timp de 15 minute. Preparatul a fost apoi spălată cu apă distilată timp de 30 de secunde, se usucă în aer și aplicat reactiv 30 pl №2 - anticorpi protivotrihomonadnyh la anticorpi marcați cu FITC - se incubează timp de 15 minute într-o cameră umedă, la temperatura camerei sau 37 ° C După această preparare a fost spălată cu apă distilată timp de 30 de secunde, se usucă în aer și mikroskopiruyut la microscop luminiscenta cu ajutorul unui sistem de imersie în ulei sau apă. Formulările preparate pentru microscopie precum și în diagnosticul infecției cu Chlamydia prin IEF.

Trichomonadele sunt detectate sub formă de structuri polimorfe legate de membrană, cu o strălucire verde strălucitoare. Formele fluctuante pot pata flagelul. Flora bacteriană nespecifică este colorată în culoarea portocalie, celulele epiteliale, leucocitele, spermatozoizii fiind colorați în portocaliu și roșcat-maroniu. Este permisă o strălucire nespecifică difuză scăzută de verde a citoplasmei celulelor epiteliale, a mucusului și a microflorei străine. Rezultatul este considerat negativ dacă nu există luminiscență specifică în frotiu când cel puțin 10 elemente celulare sunt obligatorii.

Metoda RNIF are o sensibilitate ridicată și specificitate comparabilă cu metoda de cultură permite identificarea formelor non-viabile ale agentului patogen nu este definit în cultură. Spre deosebire de preparatele native, dezvăluie o formă atipică și fixă Trichomonas vaginal. Aceasta sporește semnificația sa diagnostică. Metoda RNIF este relativ ieftin, ușor de a efectua, nu necesită echipament special, vă permite să monitorizeze vizual calitatea materialului de captare și a obține un răspuns în termen de 40 - 60 de minute. Toate acestea îl fac metodă de alegere pentru diagnosticul de trichomonie urogenitală.

Diagnosticul final al bolii este posibilă după detectarea agentului patogen sau prezența anticorpilor în evacuarea leziunilor în sânge sau microscopice metode ale unui pacient, studii bacteriologice și imunologice (serologice).

În scopul de a îmbunătăți controlul bolilor cu transmitere sexuală, se recomandă crearea de unități ca structurale ale laboratorului central, concentrându-le tot felul de studii pentru microscopice, virusologice, diagnosticul bacteriologic, serologic imunologic al infecției.

Studiile de laborator într-un laborator centralizat sunt realizate prin toate metodele disponibile:

1. Pentru a diagnostica studiu sifilis darkfield microscop preparare nativ sau ganglionilor limfatici punctiformă separate; de sânge serologice și lichidul cerebrospinal în RNC, reacția Kahn microreaction pritsepitatsii cu reacție de imobilizare a antigenului cardiolipin pal treponemes, modificări de reacție imunofluorescență, imune reacții de adeziune ELISA la modificări, hemaglutinare pasivă.

2. Pentru diagnosticul preparatelor de cercetare gonoree colorate cu albastru de metilen (Brilliant Green) și metoda de studii de culturi Gram, determinarea activității betalactamază culturilor pure gonococ, gonococi susceptibilitatea la antibiotice sau alte medicamente, care prezintă reacția Borde_Zhangu.

3. Pentru diagnosticul preparatelor de cercetare trichomoniasis native și colorate cu metilen metoda albastru și Gram și metoda de creștere în medii nutritive.

4. Pentru diagnosticul preparatelor de studiu Chlamydia pătată conform cu Romanovsky-Gimza, PIF, folosind anticorpi monoclonali, ELISA, studiul culturii.