Principala metodă de izolare a culturilor pure de microorganisme este metoda propusă de R. Koch. Principiul său este de a obține o cultură curată dintr-o colonie separată. Cu toate acestea, această metodă nu este aplicabilă pentru izolarea microorganismelor care nu cresc sau cresc slab pe medii dense. Astfel de microorganisme includ unele bacterii, multe alge și protozoare.
Fig. 6.2. Cultură de însămânțare a microorganismelor
pe suprafața unui mediu dens cu o spatulă:
a - spatulă de Drigalsky; б - cernerea; in - creștere
microorganisme după cernere
La alocarea unei culturi pure de microorganisme aerobe cultură drive-ing sunt însămânțate pe suprafața mediului dens. Procedura este după cum urmează. Se topește într-o baie de apă fierbinte sterilă și răcită la 50 ° C mediu nutritiv conținând agar sau gelatină, turnat în plăci sterile Petri. După cadrul solidifica la suprafața sa este aplicată dintr-o șarjă de cultură picătură pipetă sau diluarea acestuia în picătură de apă sterilă și sticlă spatulă Drigalski clorhidric steril partiționat pe suprafața mediu solid într-un vas Petri. În plus, aceeași spatula freca suprafața mediului secvențial în al doilea, al treilea și al patrulea plăci. De obicei, în primele două cești după incubare se observă o creștere continuă a microorganismelor, în timp ce în cele două cresteri ulterioare ale coloniilor izolate (figura 6.2). Diseminarea culturii acumulative poate buclei bacteriologice prin metoda obositoare a accidentului vascular cerebral. În acest caz, acumulativ cul-rotund sau diluarea acestuia selectat buclă și pe suprafața dense strokes pro-drive medie în ordinea prezentată în Fig. 6.3. Înainte de fiecare cursa nouă, bucla este sterilizată în flacăra arzătorului.
După însămânțare vase Petri au fost plasate într-un incubator acoperă în jos la apa de condensare formate pe plăcile de acoperire la solidificarea agarului, nu a împiedicat obține colonii izolate. Plăcile sunt păstrate în termostat timp de 1-7 zile, în funcție de rata de creștere a microorganismelor. Avansarea colonii izolate sunt ecranate în buclă pe suprafața conică a mediului dens in vitro sau într-un mediu lichid.
Metodă de însămânțare profundă. Coloniile izolate de microorganisme microaerofile și anaerobe facultative sunt adesea obținute prin însămânțare în profunzime. Pentru a face acest lucru, un mediu nutritiv dens este pre-turnat în tuburi de 15-20 ml și sterilizat. Imediat înainte de însămânțare, pro-etichetele sunt plasate într-o baie de apă fierbinte, astfel încât mediul se topește. Semănarea se efectuează din diluțiile culturii de depozitare în apa de la robinet sterilă. Diluțiile sunt preparate astfel încât, la însămânțarea a 0,5-1,0 ml de diluție, se obțin colonii izolate. Se determină gradul de diluare
densitatea unei culturi cumulative. Semănarea se face, de regulă, dintr-
ultimele patru diluții. În acest scop, se introduc 0,5-1,0 ml dintr-o diluție a culturii reproduse într-un tub de testare cu un mediu topit și răcit la 48-50 ° C. Se mănâncă ma
Materialul este amestecat cu grijă, rotind tubul între palme.
Fig. 6.3. Diagrama secvențelor (7 - 5)
Cultura de însămânțare a microorganismelor pe suprafața unui mediu dens printr-o buclă
în jurul flacăra arzătorului este apoi îndepărtat din dopul tubului, marginea de ardere într-un tub de flacără al arzătorului, iar conținutul tuburilor turnat rapid într-un vas Petri sterilă. După ce mediul agarizat sa solidificat, vasele Petri sunt plasate într-un termostat. Coloniile cultivate în grosimea mediului este tăiat cu un bisturiu steril, tuburi capilare recuperate sterile sau pur și simplu în buclă și transferate într-un mediu lichid, favorabil dezvoltării microorganismelor alocate.
Dificultăți speciale apar în izolarea culturilor pure de anaerobe obligatorii. În cazul în care contactul cu oxigenul molecular nu cauzeaza moartea celulelor dintr-o dată, însămânțarea se realizează pe suprafața mediului în vase Petri, dar imediat după plantare cupe plasate în anaerobă. Cu toate acestea, metoda de reproducere este adesea folosită. Esența ei constă în faptul că Accumulate diluție TION-cultură se realizează în topit și răcit la 45 - 50 ° C mediul de agar. Realizați 6-10 diluții consecutive. Apoi, mediul în tuburi se răcește rapid și se toarnă amestecul de suprafață sterilă ste-strat de parafină și ulei de parafină (în raport de 3: 1), care contracarează penetrarea pre-aer în interiorul mediului de agar.
Uneori, mediul nutritiv agarizat, după însămânțare și amestecare completă, este transferat în tuburi sterile Burri. Este posibil să se utilizeze capilar Petka pi-Pasteur, care câștigă în dilutie etape cul acumulative adecvate în mediul de agar topit. Capătul capilarului este sigilat. Dacă finanțat cu succes diluarea culturii într-unul din tuburile (tuburi pi petok Pasteur Burri) cresc colonii izolate. Pentru a extrage coloniile care au fost formate, procedați după cum urmează. strat de parafina a fost îndepărtat cu un ac steril, și un mediu de agar coloană suflat cu grijă din tubul într-un vas Petri sterilă prin trecerea de gaz care nu conține oxigen printr-un ac capilar sau plasat între peretele tubului și mediul de agar. Mediul agarizat din tubul Burri este suflat, trecând gazul printr-un capac de vată de vată.
În unele cazuri, mediul dens al tubului este îndepărtat, oricum. Tubul este încălzit ușor, tot timpul în timp ce acesta se rotește rapid peste flacăra arzătorului. În acest caz, agarul printr-un adiacent direct-sredstvenno la perete, este topit și conținutul tubului sub formă de coloană agar-lea este ușor să se strecoare într-un vas Petri sterilă. Coloana agar tăiat lancet steril și coloniile care extrag prin captarea lor în tub capilar E-steril sau buclă. De asemenea, le puteți tăia cu o lancetă sterilă. Coloniile extrase sunt transferate într-un mediu lichid favorabil dezvoltării microorganismelor eliberate. În cazul în care colonii izolate obținute în capilar, după dezinfecție suprafață meticuloasă clorhidric sale de rupere forceps steril deschise și parcele ka-capilară este izolat conținând coloniile se transferă într-un mediu steril.
Pentru prepararea coloniilor izolate prin metoda însămânțării profunde și prin metoda diluțiilor, se recomandă utilizarea unor medii nutritive clarificate.
Metoda de rotire a tuburilor de testare. Când ei doresc să obțină colonii izolate de bacterii anaerobe, caracterizate printr-obligatorii ai o sensibilitate deosebit de ridicată pentru oxigen (anaerobi extreme), folosind metoda lui R. rotative tuburilor Hungate. Esența lui este după cum urmează. Mediul de agar topit inoculat cu bacterii, la un curent constant prin tub steril gazul inert eliberat de impuritate oxigen. Tubul este apoi închis cu un dop din cauciuc și plasat orizontal în clema care rotește tubul. Mediul agar este distribuit uniform pe pereții tubului și solidificat cu un strat subțire. Un strat subțire de mediu de agar din eprubetă umplut cu un amestec de gaz permite obținerea de colonii izolate clar ochi unarmed NYM vizibile (vezi. Fig. 6.4). Se aplică, de asemenea, modificarea metodei R.Hangate. În acest caz, mediul agar topit la un curent constant al unui gaz inert steril este turnat în tuburi de testare. Tubul este apoi închis cu un dop de cauciuc și plasat orizontal în clema care rotește tubul. După cadru pentru tubul de perete tuple se intareste produc insamantarea medie în tubul într-un curent de gaz steril printr-o buclă bacteriană, efectuarea bar într-un tub rotativ în direcția de la partea sa inferioară până la gât (fig. 6.5). Uneori, pentru a obține o cultură pură este doar o cultură într-un mediu dens, dar mai mult cultură în mediu de creștere solidă se repetă de 2-3 ori. Ca semințe, se utilizează o cultură obținută dintr-o colonie separată.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: