Una dintre cele mai importante etape ale programului FIV este etapa embriologică. Acesta este modul în care se va executa fertilizarea de calitate ou procedura de evaluare se efectuează și zigoti de cultură ulterioare și a embrionilor depinde de rezultatul cu succes a fertilizării in vitro.
Stadiul embriologic al programului FIV nu durează mai mult de 6-7 zile. În mod condiționat, aceasta poate fi împărțită în mai multe etape, a căror descriere este dată mai jos.
Ziua "-1" - etapa pregătitoare
În acest stadiu, embriologul pregătește toate materialele necesare pentru procedura de perforare a foliculilor și fertilizare. În această zi, toate plăcile etichetate și numerotate, cutii Petri sunt puse pe încălzire (să fie respectarea strictă a modului de temperatură) și ekvilibrovku (ajustarea pH-ului la valori de 7,35-7,45) toate necesare mediu pentru spălarea foliculilor si ovocitelor si tratament de fertilizare a spermei.
Ziua "0" - puncția foliculilor (aspirația ouălor) și fertilizarea
La momentul puncție foliculară, ovulele sunt prezente ca-ootsitarno cumulus complex (PCC). Lichidul folicular este obținut în timpul verificării puncție embriologist transvaginal sub un stereomicroscop (sau ochiul liber) prezența PCC, care apar ca albăstrui cheaguri mucoase dimensiune de 5-10 mm. PCC-urile selectate rapid sunt plasate în mediul de cultură, unde specialistul evaluează preliminar cantitatea, calitatea și gradul de maturitate. Este important să se înțeleagă că morfologia complexului nu este întotdeauna posibil pentru a da o evaluare corectă a gradului de maturitate și starea oului.
În ovocitele perforate, trebuie să se completeze prima diviziune a meiozei, după care primul corp polar este separat. A doua divizie, de regulă, se află în etapa metafazei. Cromozomii formează o serie, creând astfel o placă metafază situată direct deasupra corpului polar. În acest caz, în ou, se realizează un bloc de meioză, care poate fi îndepărtată numai de un spermatozoid care pătrunde în membrană.
Fotografiile de mai jos prezintă exemple de ouă mature și imature. ovocitului uman cu parametrii „ideal“ are o lumină, citoplasmă este moderat granular, spațiu perivitelline mic intact primul corp polar, și o zonă străveziu incoloră circulară. Cu toate acestea, mai mult de 50% din totalul ovocitelor obținute în tsiklahstimulyatsii superovulatia au una sau mai multe anomalii morfologice!
Conform ideilor moderne, calitatea ovocitelor este esențială pentru dezvoltarea embrionului și debutul sarcinii clinice!
Spermatozoon, înainte de a pătrunde în ovocite, rezultând în fertilizarea ovulului, trebuie depășite mai multe obstacole. În primul rând, cumulul (Cumulus) - care penetrează mai adânc în el, sperma crește viteza sa, demonstrând faza de hiperactivitate. În al doilea rând, zona pellucidă (Zona pellucida) - aici spermatozonul se leagă de receptor.
După aceasta, se realizează o reacție în care membrana citoplasmatică a oului și membrana spermatozoizilor sunt combinate. Conținutul acrozomului spermatozoizilor este aruncat, se leagă de zona pelucidei și spermatozoidul penetrează prin membrana celulelor ouă fără a-și pierde activitatea.
Pe locul care se află între coaja oului și zona pellucidului, spermatozoidul își unește receptorii cu receptorii, care se află pe coaja de ouă. Aceasta contribuie la apariția unei reacții corticale, care devine cauza proceselor ireversibile în zona pelucidelor, ceea ce îl face inaccesibil penetrării altor spermatozoizii.
În mod similar, fertilizarea se efectuează în ciclul natural și în tehnica IVF. In infertilitate masculine severe, precum și o cantitate mică de / obținută prin extragere a ovocitelor transvaginală, procedura intracitoplasmatică transferul spermatozoizii direct in citoplasma ovocitului (intra-citoplasmatic Sperm Injection, ICSI abreviat sau ICSI). În primul rând microinjectarea spermei în ou a avut loc Yanagimachi Uehara și Japonia, în 1976. ICSI este cea mai comuna tehnica mikromanipulyatsionnoy inseminare artificială, care este în prezent utilizat pe scară largă ca un tehnologii de reproducere umană asistată. Procedura ICSI preced denudarea oocitului (preparatele enzimatice de tratament hialuronidază, denyudirovanie (indepartarea celulelor cumulus)), de prelucrare a materialului seminal (centrifugare simplu, centrifugare cu gradient de densitate, înota în sus).
Ziua "1" - evaluarea fertilizării:
În 16-18 ore după procedura ICSI sau 18-20 de ore după FIV, se evaluează prezența semnelor de fertilizare și a calității zigotului. Prezența în ovule a 2 pronuclei (PN) și 2 organisme polar (PB) indică dezvoltarea normală a procesului de fertilizare. Pronuclei sunt nucleele celulelor sexuale (spermă și ouă) care transportă jumătate din materialul genetic de la fiecare părinte.
In acest stadiu, este important de a respinge embrionii anormal fertilizate: monoploidy (1 pronucleul) triploide (3) și poliploizilor (4 sau mai multe).
Zigoții cu 3 nuclei (pronuclei) pot apărea ca rezultat al:
- Fertilizarea ovocitelor cu 2 sau mai multe spermatozoizi (cel mai adesea 2 ouă de spermatozoizi impregnate de calitate nesatisfăcătoare)
- Fertilizarea ovocitelor cu spermatozoizi anormali cu un set dublu de cromozomi (toate celulele umane au 46 de cromozomi - un set diploid). Oul matur și sperma au un set de haploizi de 23 de ani. Formarea unui spermatozoid cu un set dublu de cromozomi (46) are loc atunci când procesul de maturare a gameților este perturbat.
- Non-izolarea ovocitelor celui de-al doilea corp polar. Procesul de maturizare a ouălor este o transformare cromozomială care conduce la formarea unui oocit cu un set de cromozomi haploid. Haploiditatea se realizează prin alocarea a 2 corpuri polare. Primul este format în oul gata pentru fertilizare, al doilea poate fi văzut după fertilizare, adică În mod normal, două corpuri polare sunt văzute.
Poliploidele apar ca urmare a fertilizării unui ovul nesatisfăcător de mai multe spermatozoizi sau ca urmare a combinării factorilor de mai sus.
Ziua "2" - începutul strivirii
În cea de-a doua zi după fuziunea materialului genetic al spermatozoizilor și ovocitului, există o diviziune de strivire a celulei în 2 sau 4. Celulele embrionului zdrobit se numesc blastomere.
În această etapă, precum și în ziua "3", se estimează uniformitatea blastomerilor, ordinea orientării lor relativ una față de cealaltă și, dacă este posibil, numărul de nuclee din ele (în norma 1).
Ziua "3" - zdrobire
Într-o altă zi, embrionul, de regulă, conține deja 4, 6 sau 8 blastomeri. Programul genetic al embrionului este lansat la stadiul de 4 celule, la sfârșitul celui de-al doilea - începutul celei de-a treia zile de dezvoltare. Până în acest moment, embrionul sa dezvoltat exclusiv pe seama "stocurilor" acumulate în ou în timpul creșterii și dezvoltării ovarului. Se rulează în a treia zi a programului genetic al spermei, și în cazul în care „carte genetică“, în care programul codificat al dezvoltarii normale a embrionului, conține erori - unele „greșeli de tipar“ sau mutatii, embrionul se oprește în curs de dezvoltare. Acesta este un proces natural de selectare a embrionilor normali din punct de vedere genetic. Prin urmare, în stadiul de 4-8 blastomeri, până la 20% din embrioni se opresc în dezvoltare (așa-numitul "bloc de dezvoltare").
Motivele pentru calitatea slabă a embrionilor pot fi calitatea slabă a spermei sau calitatea slabă a ouălor. Se crede că dacă embrionul crește de la început, atunci problema este în ouă și dacă dezvoltarea primelor două zile merge bine și apoi problemele încep, atunci problema este de o calitate slabă a spermei.
Ziua 4 - morula
În a 4-a zi de dezvoltare a embrionului uman are un membru, de obicei, de la 10-16 celule, contactele celulă-celulă compactate progresiv și netezite embrionul suprafață (proces de compactare) - începe etapa morula (din morulae Latină -. Mulberry). In acest stadiu in vivo (in mama), embrionul se mută de la trompe în uter. Până la sfârșitul celei de-a 4-a zile de dezvoltare, o cavitate se formează treptat în interiorul morulei - începe procesul de cavitație.
M 4 (A): embrionul este complet compactat. Membranele celulare nu sunt clar vizibile, dar nucleele se disting.
M 3 (B): mai mult de 75% din blastomeri sunt compactați. Embrionul păstrează o formă sferică și o suprafață netedă.
M 2 (C): compactare parțială (aproximativ 50% din blastomeri), morfologie anormală a embrionului.
M 1 (D): compactarea a mai puțin de 50% blastomeri. Diferențele sunt fragmente denuclearizate și blastomere necompactate.
Exemplu de înregistrare - (M3) - Morula cu o compactitate de peste 75% din blastomeri.
Ziua 5 - blastocist
Deoarece cavitatea din interiorul morulei atinge mai mult de 50% din volumul său, embrionul se numește blastocist.
În mod normal, formarea blastocistului este permisă de la sfârșitul celei de-a patra până la mijlocul celei de-a șasea zile de dezvoltare, mai des în ziua a 5-a. Blastocist este compus din două populații celulare - trofoblast (trophectoderm (TE), un epiteliu cu un singur strat care înconjoară cavitatea) și masa interioară celulei (ICM (ICM) celulele dense aglomereze). Trophoblastul este responsabil pentru implantare - introducerea embrionului în epiteliul uterin (endometrul). Celulele trofoblastice dau naștere la toate membranele extraembryonic ulterioare ale fatului in curs de dezvoltare, precum și toate țesuturile și organele copilului va fi format din masa de celule interioare. Cu cât este mai mare cavitatea blastocistului și cu masa internă mai bine dezvoltată și cu trofoblast - cu atât este mai mare potențialul embrionului de a implanta. La atingerea cavitatea blastocist de dimensiuni considerabile, este subțiat prin întindere zona pellucida (ZP) este rupt și începe procesul de incubație (hașură) embrion de coajă lucios. Numai după terminarea acestui proces, blastocistul poate fi implantat (atașat) la endometrul uterului. Implantarea apare, de regulă, în ziua a 5-7 a zilei de dezvoltare a embrionilor.
1 grad - blastocistul timpuriu, cavitatea blastocistului mai mică decât jumătate din volumul embrionului.
2 grade - cavitatea blastocistului este mai mult de jumătate din volumul embrionului.
3 grade - blastocist total. Cavitatea ocupă complet volumul embrionului.
4 grade - blastocist mărit. Cavitatea blastocistului devine mai mare și începe să subțieze ZP.
5 grade - trophectoderma nu penetrează prin ZP.
6 grade - un blastocist care a ieșit din ZP.
Masa intracelulară (ECM):
A - dens ambalat cu un număr mare de celule.
B - gruparea mai liberă a numărului mediu de celule.
C - un număr mic de celule
A - multe celule care formează trophectodermul.
B - câteva celule.
C este un număr nesemnificativ de celule mari.
Un exemplu de înregistrare este (4AA) - un blastocist mărit, VKM - strâns împachetat cu un număr mare de celule, multe celule care formează un trophectoderm.
Hatching auxiliar
În ciuda faptului că medicina de reproducere în ultimii ani a înregistrat în mod semnificativ "un pas înainte", nu toate cazurile de tratare a infertilității de la prima încercare se încheie odată cu debutul unei sarcini mult așteptate. Pentru a îmbunătăți eficacitatea procedurilor în curs de desfășurare, până în prezent au fost dezvoltate o serie de metode specifice care sporesc șansele de implantare a embrionilor și dezvoltarea ulterioară a sarcinii. Una dintre aceste tehnici este extracția auxiliară (de la engleză la hatch out - "ieșită din ou").
fetus uman în primele stadii ale dezvoltării sale înconjurate de o glicoproteină înveliș transparent, strălucitor (nume latin «zonae pellucidae»), îndeplinește rolul unui înveliș protector, care prevede cortical embrion reacție de livrare selectivă a nutrienților și permite să se protejeze împotriva deteriorării mecanice. În procesul de diviziune celulară, sub influența mecanismelor naturale speciale și enzime, devine mai subțire și, la un anumit interval de timp (de obicei 5-7 ore fisiune) este rupt și „altoi“, care permite embrionul din ea si implantat cu succes in captuseala interioara a uterului - endometrului.
Cu toate acestea, din mai multe motive, acest proces, atât în condiții naturale cât și în condiții de FIV, nu merge întotdeauna corect, ceea ce împiedică sarcina ulterioară. Și această problemă în rezolvarea problemelor de implementare a specialiștilor de fertilizare in vitro este rezolvată cu ajutorul incubării auxiliare - supersecția artificială a plicului stralucitor al embrionului în laborator. Aceasta crește probabilitatea de implantare a embrionului și progresia ulterioară a sarcinii, cu condiția pregătirii corecte a endometrului pentru adoptarea unui ovul fertilizat.
Până în prezent, există mai multe tehnici de exploatare a ecloziunii, fiecare având propriile caracteristici:
- Mușchiul mecanic este un efect mecanic asupra plicului transparent al embrionului și se numește disecție parțială. Cu un micronedel special, carcasa strălucitoare este străpunsă de două ori la un anumit unghi, care formează o fantă îngustă prin care blastocista poate ieși rapid din cochilii strălucitoare.
- hașurarea chimice - efect special asupra unei soluții a pielii chimice corozive (soluție acidă Tyrode), care microinstruments aplicat la suprafața sa mică. Mantaua este format dintr-un diametru mic orificiu de 20 ± 7 um, după care soluția a fost îndepărtată, iar embrionul se spală de mai multe ori pentru a se evita efectele nocive ale substanțelor agresive în celulele sale.
- Eclozarea cu lumina laser - este realizată cu un fascicul laser subțire, care printr-o lentilă optică, făcând canelura fără contact pe carcasa (prin intermediul aplicării prin vătămare sau mai subțierea sale locale). Această tehnică este precisă, sigură și eficientă, în timp ce cea mai optimă formă este utilizarea razelor infraroșii cu un diametru de 1480 nm.
- Metoda Piezo - realizată cu ajutorul unui micromanipulator piezoelectric având microvibration de înaltă frecvență, lăsând locașurile conice pe o porțiune limitată a mantalei, contribuind astfel la subțierea acesteia.
În ciuda faptului că incubația auxiliară a fost considerată o procedură de rutină de mulți ani, este recomandabil să nu se folosească în toate cazurile de programe ART. În unele cazuri, ecloziunea este deosebit de relevantă, în timp ce în altele aceasta nu afectează frecvența sarcinii.
Specialiștii au stabilit o serie de indicații posibile pentru efectuarea acestei manipulări în programele FIV:
- vârsta femeii este de peste 38 de ani
- fumat
- mai multe încercări anterioare de succes în domeniul FIV
- parametrii morfologici slabi ai embrionilor
- Plicul îngroșat al embrionului și alte anomalii ale acestuia
- niveluri ridicate de hormon de stimulare a foliculului în sânge
- transferul de embrioni după crioconservare
În aceste cazuri, tehnica de incubație auxiliară poate fi cea mai eficientă.
Trimiteți-le prietenilor: