Ingineria genetică »Restricsează enzimele și restricționează ADN-ul
In timpul evolutiei bacteriilor au evoluat capacitatea de a sintetiza așa-numitele enzime de restricție (endonucleaze), care formează o parte a celulei sistemului (bacteriene) restricție de modificare. În bacterii, sistemele de restricționare-modificări sunt un sistem imunitar intracelular care protejează împotriva ADN străin. Spre deosebire de organismele superioare, în care recunoașterea și distrugerea virusurilor, bacteriilor și a altor agenți patogeni se produce extracelulară în protecția bacteriilor împotriva ADN străin (ADN-ul plantelor și animalelor în organism în care locuiesc) are loc intracelulară, t. E. Când ADN-ul străin pătrunde în citoplasma bacteriilor. Pentru a proteja bacteriile în timpul evoluției, sa dezvoltat, de asemenea, capacitatea de a "marca" propriul lor ADN cu baze de metilare pe anumite secvențe. Din acest motiv, ADN-ul străin din cauza lipsei sale de grupuri de metil în aceleași secvențe se topește (cut) în fragmente de diferite enzime de restricție bacteriene și apoi degradate de exonucleaze bacteriene la nucleo-tidov. Putem spune că modul în care bacteriile se apara impotriva, ADN-ul de plante și animale organismului pe care o locuiesc timp (agenți patogeni) sau permanent (ca saprofite).
Restricasile au fost izolate pentru prima dată din E. coli în 1968. Sa dovedit că aceștia au capacitatea de a taia (topi) moleculele ADN la diferite situsuri de restricție. Aceste enzime se numesc endonucleaze de clasa I. Apoi, endonucleazele din clasa II au fost descoperite în bacterii care recunosc în mod specific site-urile de restricție într-un ADN străin și, de asemenea, la aceste situri restrâng. Enzimele acestei clase au fost folosite în ingineria genetică. În același timp, s-au descoperit enzime de clasa III care topesc ADN-ul alături de locurile de recunoaștere, însă aceste enzime nu sunt importante în ingineria genetică.
Acțiunea „raționalizarea“ sistem restricție modificarea așa-numitei (secvență de recunoaștere) palindrom de baze azotate, care sunt situsuri de restricție ale ADN-ului. Palindrom secvență - o secvență de baze care se citesc la fel înainte și înapoi, cum ar fi secvența de litere radar. Deoarece componenta ADN-ului au direcția antiparalel, se consideră că o secvență palindrom dacă este identică, atunci când sunt citite în direcția de la 5'- la capătul 3 'al de sus și la 3'-o'-end pe circuitul inferior, și anume:
Palindromurile pot fi de orice dimensiune, dar majoritatea acelor palindromuri care sunt utilizate ca situri de recunoaștere pentru enzimele de restricție constau în 4, 5, 6 și mai puțin de 8 baze.
Restrictazele sunt un instrument absolut necesar în ingineria genelor pentru tăierea unor fragmente interesante (gene) de la moleculele ADN mari. Deoarece sunt cunoscute peste 100 de enzime de restricție, acest lucru permite selectarea enzimelor de restricție și excizia selectivă a fragmentelor din ADN-ul original.
Restriktaa caracteristică remarcabilă este faptul că acestea produc molecule șlițuri în mai multe fragmente de ADN (margini-restrik ing), prin care au format în capetele unei fibre este mai lung decât celălalt, formând un fel de coadă. Astfel de capete (cozile) se numesc capete "lipicioase" deoarece sunt capabile de auto-complementaritate.
Luați în considerare rezultatele restricției cu privire la exemplul uneia dintre cele mai cunoscute enzime de restricție EcoRl din sistemul de restricție-modificare E. coli. In loc de topire a ADN-ului la centrul secvenței de recunoaștere pas lindromnoy, ADN enzimatic se topește în afara centrului și produce 4 auto-complementare ( „lipicioase“), constând dintr-un număr diferit de nucleotide-tidov, și anume:
Acești "lipiciosi" capete în experimentele de inginerie genetică sunt folositori pentru că pot fi reconectați complementar la temperaturi scăzute, ceea ce permite închiderea efectivă a fragmentelor ADN.
După digestia de restricție ADN-ul a fost izolat din amestecul de fragmente de ADN restricție de restricție (ADN fragment de restricție), care apoi este nevoie să fie combinate cu vectorul. Pentru a izola fragmentele de restricție ADN electroforesate au recurs la această metodă, deoarece cu foarte ușor ADN restriktsirovannuyu prin fragmente fracționate mărime, fragmente de restricție și constantă datorită sarcinilor electrice la masă. Fragmentele din câmpul electric migrează în timpul electroforezei la o frecvență dependentă de mărimea lor (masa). Cu cât fragmentul este mai mare (mai lung), cu atât mai lent migrează în câmpul electric. Materialul în care se efectuează electroforeza este agaroza neacoperită și poliacrilamida. Pentru a identifica fragmente folosind aceste diy-bromură, fragmente de culori, ceea ce duce la ele mai ușor de detectat
Lectură recomandată:
Rezultatele studiului și discuția acestora. Reacțiile sistemului cardiovascular al bărbaților și tinerilor la influențe stresante, în funcție de tipul stresului și starea psihoemoțională a subiecților
În studiile la om, efectul stresului asupra SSS a fost studiat folosind o varietate de influențe stresante în apropierea situațiilor de mediu și adecvate caracteristicilor socio-biologice ale unei persoane. Cercetările efectuate au permis să se dezvăluie.
lipide
De interes special sunt lipidele algelor verzi-verzi. În formarea sistemului fotosensibil pentru eliberarea oxigenului, acizii grași polinesaturați, în special acidul L-linolenic, joacă un rol semnificativ, dar nu și clarificat. Cu toate acestea, nu.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: