Lumina de la o lampă incandescentă printr-o serie de sisteme optice este trimisă la filtrul de lumină. Lumina monocromatică rezultată este trimisă în cuve cu soluție și solvent, în care o parte a luminii este absorbită. Trecuți prin sisteme optice
lumina intră în fotocelule. Amplitudinea curentului rezultat este proporțională cu magnitudinea luminii incidente. Este evident că mai multă lumină trece prin solvent decât prin soluție; în sistem există un dezechilibru optic, care este detectat prin abaterea săgeții galvanometrului sau prin extinderea pantei întunecate a lămpii indicator. Pe calea fasciculului de lumină care trece prin solvent, este plasată o diafragmă, conectată cu contorul fotocolorimetric. Rotația contorului-
, reduceți diafragma și atingeți echilibrul densităților optice și întoarceți acul galvanometrului la valoarea zero. Numărătoarea de pe tambur este egală cu densitatea optică.
Metodele refractometrice pentru determinarea proteinei totale din zer se bazează pe capacitatea soluțiilor proteice de a refracția fluxului luminos. La o temperatură de 17,5 ° C, indicele de refracție al apei este 1.3332 la aceeași temperatură, indicele de refracție al serului variază între 1,3480-1,3505. Datorită faptului că concentrația de electroliți și compuși organici neproteic care afectează puterea de refracție este scăzută și suficient de constantă în ser uman sănătos, valoarea indicelui de refracție al serului sanguin depinde în primul rând de conținutul de proteine. Calibrați instrumentul cu ser cu o concentrație cunoscută de proteine. Simplitatea face refractometrie metodă convenabilă pentru determinarea conținutului total de proteine din ser, deși într-o serie de boli, in special diabet, insuficiență renală cronică, utilizarea acestuia poate duce la erori semnificative.
Precipitarea proteinelor este procesul de îndepărtare a stratului de hidrat și a încărcăturii.
Două tipuri de reacții de precipitare:
1) saltingerea proteinelor este un proces reversibil; îndepărtează numai coaja de hidratare, proteina își păstrează structura și proprietățile native;
particulele de proteine formează agregate mari și precipită sub acțiunea gravitației (sediment).
-salting out din proteine cu sulfat de amoniu
-sărate din proteine cu clorură de sodiu
suprafața moleculei de proteină nativă este întotdeauna mozaică, există o alternanță a grupurilor hidrofile și hidrofobe ale resturilor de aminoacizi. Cu precipitarea ireversibilă a proteinelor, conformația nativă este întreruptă, mozaicul este pierdut și, prin urmare, capacitatea de a efectua funcții. Acest proces se numește denaturare
-precipitarea proteinelor de sărurile metalelor grele (CuSO4 și Pb (CH3COO) 2)
-precipitarea proteinelor prin acizi minerali concentrați (Concentrat HNO3 și Concentrat H2SO4.
- precipitarea proteinelor prin acizi organici (CCI3COOH și acid sulfosilicicilic)
Slăbirea este precipitarea reversibilă a proteinelor din soluții care utilizează concentrații mari de săruri neutre: sulfat de amoniu, sulfat de magneziu, clorură de sodiu. Mecanismul de sărare este deshidratarea moleculei de proteine și îndepărtarea încărcăturii. Procesul de sărare este afectat de: gradul de hidrofilitate al proteinei, încărcătura acesteia, greutatea moleculară. Prin urmare, sărarea diferitelor proteine necesită o concentrație diferită a acelorași săruri, diferite condiții de pH ale mediului. Acțiunea de sărare a ionilor depinde de capacitatea de deshidratare, caracterizată prin poziția din seria lizotropă a lui Hofmeister:
F-> Cl-> Br-> N03-> I-> CNS-
Li +> Na +> K +> Rb +> Cs +> Mg2 +> Ca2 +> Sr2 +> Ba2 +
Saltingul este folosit pe scară largă ca metodă de separare a proteinelor, izolarea proteinelor individuale, producerea de proteine în formă pură
Separarea proteinelor plasmatice din sânge în fracțiuni utilizând metoda Cohn este adesea folosită pentru a obține fracțiuni individuale de sânge utilizate ca sânge
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: