Scopul lecției: să vă familiarizați cu diferitele tipuri de medii de cultură utilizate în microbiologie. Aflați cum să preparați un mediu nutritiv în funcție de cuvinte. Să se familiarizeze cu metodele de sterilizare a mediilor nutritive.
Materiale și echipamente: reactivi chimici, balon, pâlnie, sticlă, gresie, hârtie de filtru, tifon, cântare, media prescripție nutritiv, autoclavă.
- Se prepară un mediu de cultură IPA, Czapek agar, amidon-amoniac, agar cartof foame mediu, mediul pentru a separa diferitele grupe de microorganisme.
- Congelați și filtrați mediul, pregătiți-le pentru sterilizare într-o autoclavă.
- Să se familiarizeze cu metodele de sterilizare a mediilor nutritive.
- Sterilizați mediul într-o autoclavă sub îndrumarea unui profesor.
medii nutritive. Este cunoscut o mulțime de mediu nutritiv pentru cultivarea microorganismelor (mai mult de două mii de nume au fost clasificate și Johann Lukas Schonlein Levin în 1930 g), dar numărul de ingrediente, acestea sunt componente esențiale, este relativ mic. Cu toate acestea, acestea variază de calitate media este foarte largă - de la soluții de săruri anorganice, care pot creste autotrophs pentru medii de creștere complex, care sunt preparate din hidrolizate din carne de sânge sau ser îmbogățit; acestea sunt utilizate în mod normal pentru izolarea microorganismelor patogene tip streptococi, care sunt foarte solicitante în compoziția mediului nutritiv. Există două tipuri de bază de medii de cultură: mediul sintetic așa-numitele, componentele principale ale care sunt cunoscute cu precizie (de exemplu, glucoza-sare mediu de cultură), și un mediu nutritiv empiric selectat de origine naturală, a căror compoziție nu este cunoscută cu precizie (acestea includ peptone, preparate din hidrolizat parțial proteine).
Alegerea mediului nutritiv depinde într-o mare măsură de scopul experimentului. Herbert a discutat cu perseverență despre utilizarea pe scară largă a materialelor sintetice nutritive. Cu toate acestea, trebuie să recunoaștem că au o serie de inconveniente practice. Microorganismele crescute pe aceste medii nutritive, de obicei, fenotipic sunt diferite de cele cultivate pe mediu bulion nutritiv in mod natural tip (de exemplu, compoziția și împărțirea la viteza). Multe bacterii au nevoie de un număr mare de factori de creștere, iar pentru unele dintre ele pentru mediu artificial nu este încă găsit, pe care le-ar putea reproduce. Este posibil ca toate aceste inconveniente vor fi în cele din urmă depășite, dar atâta timp cât mediul de compoziție necunoscută, cum ar fi supe, preparate din Digest utilizate pe scară foarte largă, cu toate că acestea contribuie la factorii incontrolabile de experiment.
Compoziția mediilor utilizate pentru bacterii în creștere, sunt necesare pentru a construi proteinele citoplasmei azot organogenă, carbon, hidrogen, oxigen, compuși anorganici care conțin fosfor, potasiu, sulf, sodiu, magneziu, fier și oligoelemente: cobalt, iod, mangan, bor , zinc, molibden, cupru și altele. Toate aceste elemente trebuie să fie într-un mediu nutritiv pentru compusul microorganism udobousvoyaemom, cerințele diferitelor microbi în acest sens nu sunt identice. Nevoia de oxigen și hidrogen satisface bacteriile, în principal datorită intrării celulei apei. Prin natura azotului microorganismelor asimilare sunt împărțite după cum urmează: una dintre ele este îndepărtat din simpli compuși de amoniu și azot, alții au nevoie de aminoacizi și alții scinda substanțe cu masă moleculară mare - peptone, care sunt produse de digestie enzimatică incompletă a proteinelor. Strict specii parazitare de bacterii proliferează numai în prezența native, adică. E. proteină nealterat. Sursa de carbon pentru bacteriile sunt în principal de diferite glucide: zaharuri, alcooli polihidroxilici, acizi organici și săruri ale acestora. Bacteriile nevoie satisfăcută elemente anorganice adăugate săruri mediu nutritiv: NaCl, KH2 P04. K2 HP04 și altele asemenea. D.
Oligoelementele care acționează ca sunt necesare catalizatori ai proceselor chimice în cantități foarte mici și intră în mediul de cultură cu peptonă, săruri anorganice și apă. Împreună cu elementele organice și anorganice enumerate, bacteriile au nevoie de factori de creștere, care în rolul lor corespund vitaminelor pentru animale. Sursa de factori de creștere sunt, se adaugă la produsele medii de cultură de origine vegetală și animală, care conțin nicotină structură, pantotenic, parabenzoynuyu acizi, vitamine. Nutrienții pot fi achiziționate doar atunci când un anumit mediu de cultură microbi de reacție, deoarece permeabilitatea membranelor celulare microbiene variază în funcție de pH. Nevoia de nutrienți și condițiile fizice pentru diferite tipuri de microbi nu este aceeași și astfel se elimină posibilitatea de a crea un mediu nutritiv universal.
Densitatea și mediile nutritive lichide se disting prin consistență. Se prepară medii nutritive dense; lichide nutritive prin adăugarea de agar sau gelatină la acestea. Agar-agar (în jeleu malay) este un produs de origine vegetală extras din alge marine. În apă agar-agar este dizolvat la o temperatură de 80-86 ° C, gelatinele la 36-40 ° C. Utilizarea mediilor de agar, datorită capacității lor de a menține densitatea la o temperatură de 37 ° C, a făcut posibil să se dezvolte microbii la optim pentru majoritatea dintre ei, la o temperatură de medii dense. Gelatină - o substanță de natură proteică de origine animală. În apă caldă, la o temperatură de 32-34 ° C, se umflă și se dizolvă, iar la o temperatură mai scăzută se transformă în jeleu. Cu toate acestea, la pH sub 6,3 și peste 7,0, densitatea gelatinei scade și se întărește.
Cerințe pentru mediile nutritive.
Suporturile nutritive ar trebui:
1. Conține nutrienții necesari pentru hrănirea microbului.
2. Au un răspuns de pH care este optim pentru speciile cultivate ale microbului.
3. Să aibă umiditate suficientă, deoarece microbii se hrănesc în conformitate cu legile de difuzie și osmoză.
4. Să fie izotonică.
5. Să fie sterilă, permițând astfel cultivarea culturilor microbiene pure.
Produsele nutritive sunt împărțite în medii generale și speciale.
Primul grup include peptonă din carne: agar, bulion, gelatină hrănitoare. mediu de uz general utilizat pentru cultivarea multor microorganisme și este utilizată ca bază pentru pregătirea suporturilor speciale, adăugând-i sânge, zahăr, lapte, zer și alte ingrediente necesare pentru reproducerea unui anumit tip de microb.
Mijloacele speciale de nutrienți includ selectiv (selectiv) și diferențial-diagnostic.
Medii elective (elective). Principiul creării de substanțe nutritive electivă se bazează pe satisfacerea nevoilor de bază biochimice și energetice ale tipului de microb pentru cultivarea pentru care sunt destinate. O anumită compoziție și concentrație de micronutrienți, factori de creștere la o valoare strictă a pH-ului asigură condiții optime pentru cultivarea unuia sau mai multor tipuri de microorganisme. Atunci când un material care conține un amestec de microorganisme diferite este semănat pe ele, va apărea mai întâi creșterea speciilor pentru care va fi opțional mediul.
Medii de diagnoză diferențială. Aceste medii nutritive sunt folosite pentru a determina speciile care aparțin microbului investigat, pe baza caracteristicilor metabolismului acestuia. Conform scopului lor, mediile nutritive diferențiate de diagnostic sunt subdivizate după cum urmează:
1. Medii pentru detectarea capacității proteolitice și hemolitice a microbilor, conținând în compoziția lor substanțe proteice: sânge, lapte, gelatină etc.
2. Medii cu substanțe chimice indiferente care servesc ca sursă de nutriție pentru unele tipuri de microbi și care nu sunt asimilate de alte specii.
3. Medii cu carbohidrați și alcooli polihidrici pentru detectarea enzimelor corespunzătoare.
4. Medii pentru determinarea capacității de reducere a microbilor.
Structura mass-diferențiale de diagnostic pentru detectarea enzimelor saccarolitic și redox, indicatori introduse: roșu neutru, albastru de metilen, tinctura de turnesol, fucsin acidă, bromtimol albastru și acid rozolovuyu apos colorant cyan. Prin schimbarea culorii la pH-uri diferite, indicatorul indică prezența sau absența clivaj, oxidare sau reducere ingredient introdus în mediul. Cu toate acestea, indicatorul este o parte integrantă a presei pentru detectarea enzimelor. Astfel, prezența gelatinazei și a altor enzime proteolitice în cultură este determinată de lichefierea gelatinei, oul pliat sau proteina din zer.
Materiale nutritive uscate. Pregătirea mediilor nutritive este una dintre cele mai importante domenii de lucru ale laboratorului bacteriologic. În această privință, bio-industria produce medii standard, conservate, uscate, pentru diferite scopuri, pentru cultivarea microorganismelor. Se prepară mediul pentru formularea indicată pe etichetă. Constanța compoziției, mediul standard, simplitatea și comoditatea în exploatare, ușurința de transport și depozitare reprezintă un mare avantaj al mediilor nutritive uscate. După stabilirea pH-ului adecvat, mediul este fiert, filtrat, clarificat, turnat în flacoane, tuburi de testare și sterilizat. Ar trebui să se țină cont de faptul că, după sterilizare, mediul devine mai acid.
Sterilizarea mediilor nutritive. Sterilizarea mediilor nutritive se realizează în diferite moduri, în funcție de ingredientele care compun compoziția lor.
1. Mediul sintetic și toate mediu de agar care nu conțin în structura lor a proteinei native si hidrati de carbon, sunt sterilizate timp de 15-20 minute într-o autoclavă la o temperatură de 115-120 ° C
2. Mediile cu carbohidrați și lapte (care include lactoză), nutrient gelatina sterilizate cu abur care curge la o temperatură de 100 ° C sau fracționată într-o autoclavă la 112 ° C,
3. Mediile care conțin substanțe proteice (ser de sânge) sunt furnizate prin tindalizare sau filtrare.
4. Pentru sterilizarea mediilor nutritive care conțin proteine native, se folosește filtrarea prin filtre cu membrană Seitz.
Mediul nutritiv pregătit este verificat pentru sterilitate. Pentru a face acest lucru, acestea sunt plasate într-un termostat la o temperatură de 37 ° C Mediul, sterilizat într-o autoclavă, este păstrat într-un termostat timp de o zi, sterilizat cu un abur curge - 3 zile.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: