Un mediu nutritiv bogat este un substrat excelent pentru dezvoltarea microorganismelor din acesta. Pentru a dezinfecta mediul nutritiv utilizați acțiunea chimică (dezinfecție), expunerea la temperatură și alți factori fizici (ultrasunete, raze ultraviolete, ultrafiltrare). Fiecare dintre aceste metode este foarte selectivă pentru utilizare.
Metodele termotehnice de dezinfecție (autoclavare, sterilizare, fierbere, pasteurizare etc.) sunt utilizate pe scară largă în biotehnologie.
După cum se știe, componentele individuale ale mediilor nutritive reacționează, de asemenea, în mod diferit față de efectele termice. În special termolabile sunt compuși organici: vitamine, carbohidrați, hormoni etc. Zaharurile complexe și polizaharidele sunt parțial hidrolizate în timpul autoclavării. Gradul de hidroliză depinde de sursa de carbon, de temperatura și de durata autoclavării. La temperaturi ridicate are loc caramelizarea zaharurilor.
Soluțiile care conțin aminoacizi și zaharuri reducătoare dobândesc o culoare maronie atunci când sunt expuse la efecte termice datorate reacțiilor sucrolemine.
Pentru a evita modificările nedorite ale componentelor distructive medii de cultură (substraturi) utilizate moduri, eventual, mai moi de sterilizare (Tabelul 4.4.) Sau o sterilizare separată a componentelor. Modurile de temperatură ridicate, dar pe termen scurt inactivează sporii bacterieni, având un efect minim asupra componentelor biologic active ale mediului. In laborator, sterilizarea mediilor de cultură și alte obiecte se realizează într-o autoclavă cu abur sub presiune, menținând modul dorit. În unele cazuri, recurge la sterilizarea cu căldură uscată.
Tabelul 4.4. Moduri de sterilizare în mediul nutritiv
Sa stabilit însă că temperaturile de peste 121 C poate fi cauza de perturbare a calității presei și, în consecință, o creștere slabă cultură. Mai mult decât atât, în principiu, se dorește sterilizarea prin autoclavare unor volume mici de medii de cultură care, alte condiții fiind egale, permite reducerea timpului de sterilizare, deoarece perioada de încălzire este scurtat mostre (Tabel. 4.5).
În ultimul deceniu, filtrarea prin membrană a devenit larg răspândită pentru producerea aerului steril și a diferitelor lichide. Acesta este un fel de sterilizare la rece, care este eficientă pentru sterilizarea substanțelor termolabile.
Producția industrială de filtre cu membrană a început de la sfârșitul anilor 1940. în secolul trecut. În conformitate cu R.E. KESTING (1971), cele mai comune procese sunt convenționale de filtrare (makrofiltratsiya -1-10 microni), microfiltrare (20 -10 m), ultrafiltrare, dializă (10 m-1 nm).
Dacă makrofiltratsii aplică hârtie convențională sau filtru de sticlă, apoi utilizat pentru restul de nitroceluloză, acetat de celuloză, polivinil, poliamidă, grosimea membranei fluorocarbon mai mică de 0,1 microni, cu un grad ridicat de porozitate și un diametru al porilor 04/10/10 microni. Microfiltrarea este suficientă pentru sterilizare în scopuri biotehnologice.
Cerințe de bază privind condițiile de cultivare
Toate manipulările cu cultura țesuturilor izolate din plante se efectuează în condiții sterile. Un set de măsuri care asigură aseptica proceselor biotehnologice include protecția mecanică, fizică și chimică a bioobiectului și a habitatului acestuia și, dacă este necesar, produsul final.
Asepsia oferă curățare umedă, tratarea lor cu raze ultraviolete, antiseptice, folosind instrumente sterile, îmbrăcăminte de procesare media, fluxul de alimentare cu aer steril (tabelele laminar de aer steril în zonele în cutie, livrare in aer steril fermentator printr-un barbotor - de la barbotaj franceză. - amestecare), etc.
Protecția mecanică include îndepărtarea impurităților mecanice, de exemplu, din aer, cultivatori; echipamente de etanșare, izolarea unităților și conexiunilor; la tratarea fizică a aerului și a suprafețelor dispozitivelor și dispozitivelor cu raze ultraviolete, fierbere, sterilizare cu abur sub presiune, sonicare; la tratarea chimică a suprafețelor de lucru și a bioobiectelor cu antiseptice chimice.
În condițiile de producție, sursele de microbi contaminanți pot fi solul, apa, aerul înconjurător, oamenii. De la sol la sfera proceselor biotehnologice bacilli-bacili care formează spori, conidii de ciuperci, actinomicite; aceleași microorganisme cu praf pot intra în aerul din care sunt capabili să pătrundă în mediul de creștere al bioobiectului sau în produsul final de producție
Cultivarea țesuturilor izolate din plante are loc în lumină. Iluminarea camerei de construcție a factorilor (lumină) ar trebui să fie de 1 000 - 10 000 lux, în funcție de cultură. Este necesar să se țină seama de fotoperiodul, care este necesar pentru acest obiect cultivat.
Umiditatea în camera de lumină ar trebui să fie de 60-70%. Aerul uscat determină uscarea mediului nutritiv în eprubete și flacoane, mai ales dacă sunt închise cu dopuri de bumbac, o schimbare a concentrației lor și, prin urmare, o încălcare a condițiilor de cultivare. Pentru a crește umiditatea în încăpere, puteți folosi paleții cu apă.
Temperatura optimă pentru majoritatea țesuturilor cultivate este de 25-26 ° C, pentru cultura de țesut a plantelor tropicale - 29-30 ° C. În cazul inducției morfogenezei, temperatura este redusă la 18-20 ° C.
Pentru a cultiva cu succes celulele izolate și țesuturile vegetale, trebuie respectate anumite condiții. Cele mai multe țesuturi de calus nu au nevoie de lumină, deoarece nu au cloroplaste și se hrănesc heterotrofic.
O excepție sunt unele țesuturi de calus verde, cum ar fi, de exemplu, țesutul mandrake. Țesuturile de țesut sunt obținute în întuneric sau în lumină difuză, iar pentru morfogeneza reușită, acestea sunt transferate în încăperi cu iluminare intensivă de 1.000-4.000 lux.
Modurile de iluminare și temperatură, ca și alte condiții, depind de sarcinile efectuate. Parametrii cei mai buni, precum și regimul optim de umiditate, pot fi creați folosind camere climatice.
NA Voinov, TG Volova
Trimiteți-le prietenilor: