Această caracteristică a luminiscenței face posibilă utilizarea unor filtre speciale de lumină care absorb lumina incitantă, pentru a observa o strălucire luminiscență relativ slabă.
Dispozitivul unui microscop fluorescent și regulile de lucru cu acesta diferă de la un microscop convențional, în principal, după cum urmează:
1. O sursă de lumină puternică într-un iluminator care emit predominant în scurt (ultraviolet, albastru) regiunea spectrului (mercur lampă de cuarț sau lampă cu halogen de cuarț).
2. Prezența unui sistem de filtre luminoase:
· Filtrele de lumină excitante trec doar acea parte a spectrului care excită luminiscența;
· Filtrul de protecție împotriva căldurii protejează împotriva supraîncălzirii altor filtre de lumină, pregătirea și optica unui microscop fluorescent;
Filtrele de lumină "Blocare" se află între ocular. Aceste filtre luminoase absorb radiația incitantă și transmit lumina luminiscenței din medicament spre ochiul observatorului.
Metoda de iluminare a medicamentelor pentru a excita luminiscența este că medicamentul este iluminat cu lumina care cade pe el prin lentilă. Datorită acestui fapt, iluminarea crește odată cu utilizarea obiectelor care au o mare deschidere numerică, adică cele utilizate pentru studiul microorganismelor.
Un rol important în această metodă de iluminare este jucat de o placă specială de interferențe cu fascicul de lumină care direcționează lumina către obiectiv. Este o oglindă semitransparentă care reflectă și direcționează selectiv partea parțială a spectrului, care excită luminiscența, dar lăsă lumina luminiscenței în ocular.
Optica obiectivelor cu microscop fluorescent este realizată din soiuri non-luminescente de sticlă optică și sunt lipite împreună cu un adeziv special non-luminescent. Atunci când se lucrează cu lentile de imersie cu ulei, se folosește uleiul de imersie neluminiscentă.
Deoarece cele mai multe microorganisme nu au propriile luminiscente, există mai multe modalități de prelucrare a acestora pentru observare într-un microscop fluorescent. În primul rând, aceasta este colorarea cu fluorochromat cu soluții puternic diluate (până la câteva micrograme / ml) de coloranți fluorescenți (fluorochromi). Microscopia fluorescentă în comparație cu cea convențională permite:
- Combinați imaginea color și contrastul obiectelor;
- pentru a studia morfologia celulelor vii și moarte ale microorganismelor în mediile nutritive și țesuturile animalelor și plantelor;
- pentru a investiga microstructurile celulare care absoarbe selectiv diferite fluorochromi, care sunt indicatori specifici citochimici;
- pentru a determina modificările funcționale și morfologice ale celulelor;
Fluoresceină (fluorescente) microscopie permite studierea atat sale proprii (primară) fluorescenței mai multe substanțe, și colorarea cu fluorescență secundară indusă structurilor celulare cu coloranți speciali - fluorocromi.
Principiul metodei este că unele substanțe încep să se lumineze cu iradierea ușoară. Pentru a stimula fluorescența în partea vizibilă a spectrului, se utilizează de obicei lumina albastră sau razele ultraviolete.
Multe substanțe care nu sunt fluorescente în domeniul vizibil (în special acizi nucleici) atunci când sunt iluminate cu raze ultraviolete încep să producă fluorescență și pot fi detectate fără utilizarea fluorocromi.
Fluorescența secundară se referă la imunofluorescență, pe baza interacțiunii proteinei imune cu fluorochromii.
microscopie UV, bazat pe capacitatea unor substanțe de a absorbi selectiv razele ultraviolete o anumită lungime de undă, în mod fundamental greu diferă de microscopie optică convențională, se realizează prin utilizarea microscoape cu cuarț sau (oglindă) optice reflectorizante. Imaginea este vizualizată vizual pe ecranul fluorescent și este fotografiată.
Deoarece limita de rezoluție realizabilă cu cea mai bună lentilă este de jumătate din lungimea de undă a luminii aplicate, singura modalitate posibilă de a crește rezoluția poate fi utilizarea unor lungimi de undă mai scurte decât cele vizibile.
Această lumină este o radiație ultravioletă. Lungimea de undă de lumină verde este de 5000 A. Din motive datorită surselor de lumină și materialul cristalinului utilizat pentru cele mai multe unde scurte într-adevăr aplicabile în lumina ultravioleta practica - este un puternic radiații arc de mercur a cărui lungime de undă este foarte aproape de 2500
A, adică doar jumătate din lungimea de undă a luminii verzi. În cel mai bun caz, utilizarea acestei lumini ultraviolete poate dubla doar puterea de rezolvare; realizarea nu este atât de semnificativă, totuși, destul de de dorit.
Cu toate acestea, există un alt motiv și, probabil, mai multe motive de a folosi lumina ultravioletă în microscopie, mai ales când este aplicată obiectelor biologice.
Sa constatat că diferite părți ale eșantionului (în fapt, acesta este un caz foarte rar) absorbi lumina ultravioletă în moduri diferite. Ca urmare, trecerea luminii prin obiect poate dezvălui o zonă cu totul nou de contraste și de a descoperi diferite structuri, cu condiția să existe nici un dispozitiv care permite privitorului să „vadă“ imaginea cu raze ultraviolete.
În zilele noastre, microscoapele ultraviolete sunt fabricate de industria optică.
În același timp, "trei probleme trebuie rezolvate.
Este necesar să se creeze inofensiv pentru sursele de radiații ultraviolete care consumă o intensitate mare de sănătate, care nu ar radia lumina vizibilă; în caz contrar, lumina vizibilă va masca efectele dorite.
În prezent, acest scop este servit de un arc de mercur într-o carcasă de cuarț, deoarece cuarțul este transparent în regiunea de lungime de undă necesară (sticla obișnuită pentru o astfel de lumină este opacă).
Sursa este plasată într-un container din sticlă specială, care are proprietatea necesară pentru a păstra lumina vizibilă, dar pentru a trece o parte semnificativă a ultravioletului.
Metoda de radiografie pură se bazează pe efectul radiațiilor emise de radioizotopi pe o placă fotografică. Este folosit ca una dintre metodele de determinare calitativă și cantitativă a radioactivității rocilor și mineralelor.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: