ALGORITMUL DE DIAGNOSTIC A MYOPLASMOZEI RESPIRATORII ȘI ASOCIATE A PĂCĂRILOR
A. P. KRASIKOV, doctor în științe veterinare, profesor universitar. Omsk State Agrarian University numit după PA Stolypin krasikovl 950 @ mail. ru
IG TROFIMOV, doctor în științe veterinare, profesor Omsk State University Agrarian numit după PA Stolypin
NFHATYU, doctor în științe veterinare, șef. departamentul de biologie moleculară a laboratorului regional al instituției de stat Omsk.
S.B. LYSKO. candidat al științelor veterinare, șef. Departamentul de Medicină Veterinară al Institutului de Cercetare Siberian de Păsări de curte al Academiei Ruse de Științe Agricole
OAUNSUNTSOVA, doctor în științe veterinare, cercetător științific la departamentul veterinar al Institutului de Cercetare a Păsărilor, RAAS
REZUMAT / REZUMAT. Metodele explicite de diagnosticare bacteriologică și serologică a mioplasmozei respiratorii a păsărilor și a formelor asociate ale manifestării acesteia au fost dezvoltate, fundamentate experimental și propuse pentru practica veterinară.
Dezvoltarea și experimentarea experimentală a metodelor veterinare disponibile Metode explicite de diagnosticare bacteriologică și serologică a micoplasmozei respiratorii sunt considerate păsări și forme asociate ale manifestării
Cuvinte cheie: micoplasmoza păsărilor, epizootice, clinice, pathoanatomice, imunologice, diagnostice.
Cuvinte cheie: micoplasmoza păsărilor, epizootologicheski, metode clinice, pathoanatomice, imunologice, diagnostice.
Scopul cercetării. Să studieze situația epizootică a micoplasmozei respiratorii a păsărilor și a formelor asociative de manifestare a acesteia în regiunea siberiană și să îmbunătățească metodele de laborator ale diagnosticului acesteia.
Micoplasmoza respiratorie a fost înregistrată în patru ferme de păsări (33,3%) din regiunea Omsk, una în Regiunea Novosibirsk (9%) și nouă (47%) în Teritoriul Altai. Cel mai adesea, micoplasmoza are loc în asociere cu escherichioza, stafilococoza, mai puțin frecvent cu pasteurelloză și tenosinovita reovirusului. Dintre toate asociațiile, Escherichioza este cea mai comună. Astfel, în una dintre fermele de păsări studiate din regiunea Omsk, în 72% dintre cazuri, a fost detectată micoplasmoza în asociere cu escherichioza. Cele mai frecvente serotipuri de Escherichia coli sunt 01, 03, 020, 078, O103, 0111, 0119. În limitele unei ferme, au fost izolate două, rareori trei, serotipuri.
Analizând rezultatele studiilor bacteriologice și serologice, trebuie remarcat faptul că, în ciuda absenței micoplasmozei clinice respiratorii severe, agentul este prezent într-un număr de ferme de păsări din regiunea Omsk și Teritoriul Altai. În acest caz, sursa de infecție nu este doar găini, ci și cocoși, secreând micoplasma cu spermă, contribuind astfel la răspândirea în continuare a agentului patogen. Sa constatat că cea mai sensibilă la infecția cu micoplasmoză asociativă respiratorie, cu dezvoltarea unui complex de semne clinice, puii cu vârste cuprinse între 1 și 50 de zile. În acest caz a fost de 67,3% în structura Youngsters proporția de deces de boli infecțioase, dintre care 100% a fost în asociere cu colibaciloza micoplasmoze (ehsherihiozom). Tinerii bolnavi au căzut în urma creșterii și dezvoltării. Găinuțele și roosterii fără semne clinice vizibile ale bolii sunt purtătoare ascunse ale patogenului de mioplasmoză respiratorie și o sursă de infecție pentru descendenți. Astfel, rezultatele cercetării bacteriologice mikoplazmonositeley cel mai mare număr de pui (60%) au prezentat o producție de ouă de vârf (220 de zile), cu un titru mediu de anticorpi în ELISA a fost de 7387 ± 1253. Numărul cocoși mikoplazmonositeley a crescut cu varsta si a ajuns la 372 de zile de 70%, iar numărul de reactiv în ELISA - până la 82%, cu un titru mediu de 5165 ± 137.
micoplasmelor Indication în 43% dintre embrioni, precum și prezența anticorpilor la pui de o zi (64,8%) și le izolează de M. gallisepticum (55%) de transmisie indică infecția cu transovarial care este de bază. In plus, a fost izolat un număr semnificativ de culturi de M. gallisepticum din sperma cocosilor, care atestă contaminarea intensă și infectarea puilor ei, mai ales atunci când polyspermy inseminare artificială.
Conform observațiilor noastre în condiții spontane susceptibile de a ehsherihiozom păsărilor cu zi cu zi, și o micoplasmoze respiratorie - 20 de zile de vârstă. Răspândirea unui micoplasmoze respirator și ehsherihioza la fermele de păsări din regiunea Omsk contribuie la factorii predispozanti: încălcarea temperaturii, ventilație insuficientă, compactare a păsărilor domestice, utilizarea vaccinurilor vii împotriva infecțiilor virale. Când această carne de pasăre este mai susceptibil la micoplasmoze decât rasele de ouă de păsări: numărul de pui pozitiv ajunge la 300 reacționând zile vârsta și 100% se menține la acest nivel până la sfârșitul vieții. Formele asociative ale unui flux micoplasmozei respiratorii complica situația epizootică, dificil de diagnostic, măsurile de prevenire și de combatere.
Odată cu reproducerea experimentală a cursului asociat de mioplasmoză respiratorie cu escherichioză la pui, am constatat că perioada de incubație este de 6-18 ore. Manifestarea clinică a bolii în perioada inițială se caracterizează prin opresiunea generală, abandonarea hranei pentru animale, respirația grea, înfometarea, pufarea în grupuri mici. Ulterior, supresia se intensifică, pasărea nu reacționează la stimul, are o tulburare digestivă, depresie respiratorie. La infecția spontană la puii de găină au fost observate semne clinice similare, dar mai puțin pronunțate. În experiment, moartea păsării a fost observată la 8 ore după infecție, care a durat până la 8 zile. În ziua a 3-4a după infectare, s-au observat rinită unilaterală sau bidirecțională, dispnee, traheale, iar în a 9-a zi starea generală sa îmbunătățit într-o oarecare măsură, respirația șuierătoare a încetinit. La 12 zile după infecție, starea păsării a fost satisfăcătoare, respirația șuierătă a fost absentă.
Schimbarea de bază patologică pentru micoplasmoze respiratorii, asociate cu ehsherihiozom, localizate în inimă, plămâni, sacilor de aer, ficat, splină, intestin ca inflamația fibrinoasă seros, seroasă și fibrinoasă. Participarea la E. coli manifestă asociativă dezvoltarea procesului infecțios inflamația fibrinoasă a pericardului, capsula ficatului și a peritoneului de pungi pneumatice.
Metodele de evaluare a T și B sisteme permit să dezvăluie mecanismele sistemului imunitar și identifică neregularități în sistemul homeostaziei imune la pui infectate. Studiul a constatat o creștere a cantității absolute și relative de leucocite și neutrofile, în special în prima săptămână după infectare, răspunsul imunologic, care este un răspuns la agenții patogeni M. gallisepticum și E. coli. Psevdoeozinofily ca și celulele cele mai motile, apar mai întâi în locul invaziei unui agent străin și stimulează activitatea funcțională a monocite, eozinofile și limfocite care poartă o funcție de protecție în timpul proceselor inflamatorii.
Reducerea numărului absolut de limfocite în 14-21 zile după infectare, indicând inhibarea sistemului limfoid, frânarea limfopoe în spatele, ceea ce afectează negativ funcția imunitar, și este însoțită de o scădere a numărului absolut de limfocite T și B la pui infectate pe o zi 14-21 . Acest lucru este confirmat prin studii histologice: delimfotsizatsiey Fabricius folicul limfoid bursa, scăderea numărului de limfocite și dispariția stratului cortical în lobuli timus. Involuție seminarului, la rândul său, este asociată cu inhibarea sintezei de imunoglobuline în ea. Datorită atrofierea organelor centrale ale sistemului imunitar (timus și Fabricius bursa), funcțiile lor într-o anumită măsură, implementată organele limfoide secundare (splină și ficat), așa cum au confirmat prin modificări imunologice și morfologice și funcționale ale acestor organe, prin examinarea histologică.
Creșterea numărului de limfocite B (7, 14 și 21 de zile după infectare) se datorează amplificării splinei reacției imunologice, care se manifestă prin formarea de foliculi multipli limfoizi care constau din limfocite mari și mici, celulele plasmatice tinere. Acest lucru este în concordanță cu declarațiile N. L. Payne (1971) pentru absorbția antigenilor și formarea anticorpilor în celule limfoide din pastă de roșii și albe splina. Perioadele limfocit B coincid cu perioade de creștere de formare a anticorpilor la patogen M. gallisepticum. care a fost confirmată de serologie. Deci, 7 zile după infectare în Skra a relevat 15% pui pozitive, și de 14 și 21 de mii de zile de studiu - 100%. acumulare de anticorpi dinamică a fost monitorizată prin ELISA. După 7 zile, după infectare cu grupul Titrul mediu a fost de 89,0 ± 0,9, până în ziua a 14 - 874.0 ± 16.1 și ziua 21 -1319 ± 76,98, rămânând în același timp la un nivel diagnostic ușor deasupra titrului (1: 800). Creșterea nivelului de anticorpi la puii de găină din grupul experimental indică starea lor infecție cu M. gallisepticum.
În studiul bacteriologic al puiilor de grup experimental, culturile inițiale de E. coli și M. gallisepticum au fost izolate în toate perioadele de vârstă. în grupul intact de control al microflorei patogene nu a fost găsit pe tot parcursul experimentului.
Astfel, puii infectați M. gallisepticum și E. coli cauzează o schimbare semnificativă în T și B sistemele de imunitate max și compoziției sângelui. Imunodeficienței în acest caz - este dobândit defect în sistemul imunitar, manifestată în incapacitatea organismului de a efectua pe deplin reacția a imunității celulare și umorale. Cauza imunodeficientei a fost prima involuția organelor centrale ale sistemului imunitar (timus și bursa), care este exprimat delimfotizatsiey si degenerarea chistică a foliculilor limfoizi și creșterea țesutului sac interfollicular și dispariția substanței corticale, mișcarea de limfocite în zona creierului, formarea cariilor chistice scad lobules timusul și mediul de țesut adipos.
În prezent, noile evoluții încep să apară medii speciale de cultura pentru izolarea micoplasme și Ureaplasma. Cu toate acestea, nu există încă nici un mediu stabilit mass-produs universal industrial cu bază tehnologică a deșeurilor pentru producția, care va asigura creșterea micoplasme, inclusiv Ureaplasma. Disponibile reteta de substanțe nutritive compoziții media pentru diagnosticul și ureaplasmosis micoplasmoze nu sunt standard și, prin urmare, pot exista mici diferențe în procesul de coacere, în funcție de calitatea cărnii utilizate pentru prepararea bazei de nutrienți. Acestea necesită autoclavare, sterilizare și au o durată de valabilitate minimă.
Mediile pe care le oferim satisfac cerințele pentru ele. Compoziția inițială a ingredientelor conține baza cu o matrice uniformă a componentelor de nutrienți standard și făcând aditivi necesari imbogatirea, o anumită cantitate de concentrare indicator și un set optim de antibiotice, ser, pH-ul optim la diferite etape ale procesului. Utilizată a tehnologiei standard pentru producerea de medii lichide pentru tractul respirator indicație mycoplasma diagnostic, cuprinde formarea de bază cu adăugarea unei componente nutritive și substraturi cu activități enzimatice relevante (glucoza, arginina, uree), ser și antibiotice, precum filtrarea de sterilizare finală și pasteurizarea. proces tehnologic, de asemenea, pe bază pentru producerea de fundații uscate de medii dense, ceea ce face posibilă identificarea culturii izolate a naturii creșterii coloniei. Utilizarea mass-media de diagnosticare pentru afișarea și diferențierea grupului Mycoplasma și prin titrare pentru a evalua gradul de acumulare în unități formatoare de culoare (Tsoe) sau unități formatoare de colonii (UFC).
Caracteristicile calitative ale mediilor de contact propuse au fost studiate în experimente corespunzătoare pentru a determina sensibilitatea și specificitatea, semilichide lichid și un mediu nutritiv solid pentru indicarea mycoplasma glyukozofermentiruyuschih arginină, ureaplasma.
Analiza rezultatelor experimentelor au arătat că mediile nutritive, ne-am dezvoltat împreună cu NIIPOI Rospotrebnadzor corespund tuturor indicatorilor, cerințele impuse acestora. Anume, ele sunt foarte sensibile la microorganismele aparținând clasei Mollicutes; Rata de creștere a tulpinilor de testare M. gallisepticum și fermentans M. - timp de trei zile și U. urealyticum - în timpul zilei; capacitatea selectivă, care este exprimată în tulpinile media de date de inhibare a nutrienților testați Staphylococcus aureus OMS-2, Proteus mirabilis, Escherichia coli 9001, care nu afectează rata de creștere a Mycoplasma și Ureaplasma, precum și stabilitatea lor inerentă a proprietăților biologice permite să mențină mediul lichid în condițiile unui frigider pentru a 6 luni.
Materialele de diagnosticare uscate pentru indicația de glucoză și argininăfermificatoare de mioplasme și ureaplasme îndeplinesc, de asemenea, cerințele pentru acestea. Aceste medii sunt economice, convenabile de utilizat. Acestea pot fi folosite ca bază pentru prepararea mediilor dense și semi-lichide, care sporesc valoarea diagnosticului, durata de depozitare și simplifică transportul.
Sensibilitatea ridicată a mediilor asigură creșterea pe un mediu dens și semi-lichid de cel puțin 1,0x105 CFU. tulpini test de M. gallisepticum rata de creștere pe medii solide cinci - și semi - trei zile, M. fermentans -Cinci și patru zile și U. urealyticum - patru și trei zile. Capacitatea inhibarea selectivă exprimată în aceste teste tulpini de medii de creștere nutritiv Staphylococcus aureus OMS-2, Proteus mirabilis, Escherichia coli 9001 și lipsa acestora, pe micoplasme și Ureaplasma. Proprietățile biologice ale mediului în frigider sunt păstrate timp de până la un an. Metoda noastră propusă este simplă, cultura în formulare nu necesită echipament special și permite atât de afișare și diferențiere a agenților patogeni pentru a determina titlurile lor.
Metodele recomandate de diagnosticare bacteriologică și serologică au fost studiate în condiții experimentale la puii broiler. Ca rezultat al experimentului, sa demonstrat că media specific de cultură de diagnosticare pentru indicarea micoplasmă și ureaplasma sunt active și sensibile în ceea ce privește aceste microorganisme, în timp ce în același timp, în mod constant inhibă creșterea altor organisme prezente în asociere cu mycoplasma. Studiul serologic confirmă datele studiului bacteriologic, iar RNIF este o metodă suplimentară extrem de sensibilă și specifică de diagnosticare a mioplasmozei. In investigarea materialului patologic în RNIF de la pui cu seruri de iepure specific pentru antigenul mikoplazmoznymi prezență prezintă o mare specificitate a testului, în toate cazurile de reacții încrucișate între microflora concomitentă și micoplasmelor au fost detectate.
Încercare de producție a schemei propuse micoplasmozei asociativă diagnostic la păsările de curte din diferite grupe de vârstă și sex confirmă rezultatele studiilor experimentale, și anume, metodele propuse sunt eficiente și informative în infecția relație mikoplazmoznoy. Astfel, în mediul nutritiv special pentru izolarea Mycoplasma și Ureaplasma Ingi-biruetsya însoțește creștere microfloră, fără a afecta negativ creșterea micoplasme, indicația privind mediul lichid a fost confirmat de rezultatele creșterii paralele pe medii solide. Testul serologic (RNIF) a observat o sensibilitate ridicată. Folosind această metodă, antigenul a fost detectat în lichidul seminal mikoplazmozny cocoși, astfel identificat rolul acesteia în răspândirea micoplasmei în stocul părinte. Atunci când se compară metodele serologice și bacteriologice a constatat că rezultatele acestor studii sunt corespund, în general, între ele, ceea ce contribuie la rafinarea și îmbunătățirea fiabilității diagnosticului.
2. Koromyslov G.F. Recomandări metodice privind metodele biochimice și imunologice de studiere a celulelor, a componentelor acestora și a altor substraturi biologice / G.F. Koromyslov, N.M. Klimov, D.D. Șmecherii // VIEV. -VASKHNIL. - M: [b. și.], 1980. - 39 de ani.
3. Payne, N.L. Sistemul limfoid. - în fiziologie și biochimie a păsărilor domestice / N.L. Payne. - Londra, New York: Acad. Apăsați. 1971. - Nr. 2. - p. 985-1037.
4. Mitrofanov, P.M. Imunopatologia în micoplasmoza animalelor / P.M. Mitrofanov, H.Z. Gaffarov, R.V. Borovik // Medicină veterinară. -1984. - Nr. 5. - pag. 35-37.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: