Subiect: Diagnosticul microbiologic al difteriei.
Obiectiv: Pe baza cunoștințelor de difterie biologiei Corynebacterium, în special interacțiunea lor cu microorganismul să fie în măsură să justifice tactica de diagnostic microbiologic, prevenirea si tratamentul bolilor cauzate de acestea.
1. Clasificarea și caracteristicile morfobiologice ale agentului cauzal al difteriei.
2. Ecologie, caracteristici ale patogenezei și imunității în difterie.
3. Material și metode de diagnostic microbiologic al difteriei.
4. Metode pentru determinarea imunității antitoxice la difterie.
5. Profilaxia și terapia specifică a difteriei.
1. Efectuați un gard de material din faringe, nas și însămânțarea acestuia pe agar de telurit de sânge pentru a descoperi bacteriocarrierul agentului cauzator difterial.
2. Identificarea și diferențierea agentului cauzator al difteriei de difterie.
3. Pentru a colora preparatul din cultura agentului patogen negativ prin metoda Neisser, la microscopie și pentru a interpreta rezultatul obținut.
4. Luați în considerare, evaluați rezultatele RP în gel pentru a determina toxicitatea difteriei corynebacterium.
5. Determinați nivelul imunității antitoxice (RNGA).
1. Clasificarea și caracteristicile morfobiologice ale agentului cauzator al difteriei.
2. Factorul de patogenitate al agentului cauzator al difteriei și mecanismul acțiunii sale.
3. Surse de infecție, căi de infectare, caracteristici ale patogenezei și imunității la difterie.
4. Determinarea imunității antitoxice la difterie (RNGA).
5. Material și metode de diagnostic microbiologic al difteriei.
6. Scop, tehnica de stabilire și evaluare a rezultatelor RP în gel în diagnosticul difteriei.
7. Profilaxia și terapia specifică a difteriei.
Sarcini efectuate în timpul lecției (OIRS):
1. Să efectueze un studiu bacteriologic al difteriei la pacienții cu diagnostic clinic de "difterie faringiană", pentru care:
1.1. Pentru a studia culturile separate de faringe și nas pe agar de sânge-telurit, pentru a selecta și descrie coloniile izolate caracteristice.
1.2. Pentru a studia natura și caracteristicile de creștere morfotinktorialnye culturi (colorația Gram și Neisseria) izolate din colonii caracteristice pe ser agar din aceiași pacienți.
1.3. Să țină cont și să evalueze rezultatele însămânțării culturilor studiate pe seria "pestriță" (glucoză, zaharoză, amidon, uree, cistină).
1.4. Luați în considerare și evaluați RP în gelul culturilor studiate cu ser antidifteric antitoxic.
Pe baza rezultatelor obținute, se determină tipul culturii izolate, toxicogenitatea acesteia; completați o direcție goală și un formular de răspuns din rezervor. laborator.
2. Continuați cercetarea bacteriologică asupra bacteriocarrierului corynebacteriilor difteriei la studenți, pentru care:
2.1. Pentru a studia culturile separate de faringe pe agar de sânge-telurit, pentru a selecta și descrie coloniile izolate caracteristice.
2.2. Din coloniile selectate se prepară preparate colorate în conformitate cu Gram și Neisser și microscopie.
Pe baza rezultatelor obținute, formulăm o concluzie.
3. Put, ia în considerare și să evalueze RNGA cu seruri de la subiecți și eritrocitare difterica antigenic diagnosticum pentru determinarea imunității antitoxică.
4. Caracterizează produsele biologice: DTP, ADS, ADS-M, ser antidifteric antitoxic.
Instrucțiuni metodice pentru îndeplinirea sarcinii de cercetare:
I. Efectuarea unui studiu bacteriologic pentru izolarea agentului cauzator al difteriei de la pacienții cu diagnostic clinic de "difterie faringiană":
1 etapă. Succesul cercetării bacteriologice depinde de preluarea în timp util și corect a materialului. De la pacienții cu gât inflamat și cu difterie suspectată, materialul trebuie luat în interval de 3-4 ore de la momentul contactului cu unitatea de sănătate înainte de inițierea oricărei terapii.
Materialul este mucus și film din amigdalele din gât și nas. Materialul trebuie să fie luat de personalul medical instruit.
Materialul este luat cu tampoane uscate vată sterile separate pentru gât și nas. Materialul din faringe este luat pe stomacul gol sau nu mai devreme de 2 ore după masă; în bună iluminare cu o spatulă, fără a atinge limba, obrajii mucoase și dinții. În prezența raidurilor, materialul trebuie să fie luat de la marginea țesuturilor afectate și sănătoase, apăsând ușor pe acestea cu un tampon. Pentru a lua materialul din nas, folosiți un tampon, care este injectat mai întâi într-unul și apoi în celălalt pasaj nazal, fără a atinge aripile nasului din exterior.
Semănarea de la un subiect este făcută pe o ceașcă de agar telurit de sânge (KTA), folosind o jumătate pentru însămânțarea materialului din gât, iar al doilea pentru însămânțarea materialului din nas.
Când materialul de însămânțare este frecat în mediul din toate părțile tampon o suprafață de 2x1 cm 2 și apoi cu același pad, fără a schimba poziția, liniile libere însămînțate. Plăcile sunt incubate la 37 ° C timp de 24-48 ore.
Semănarea trebuie făcută pe cani cu KTA, încălzită la temperatura camerei sau într-un termostat timp de 15-20 minute.
În stadiul 2, evaluați rezultatele însămânțării materialului de testat din gât și nasul acelorași pacienți la CTA. Dați o descriere a coloniilor crescute, selectați și descrieți în protocol acele colonii ale căror caracteristici coincid cu cele ale presupusului agent patogen. Formulați răspunsul.
La CTA C. diphtheriae v. gravis formează colonii gri-negru cu diametrul de 2-3 mm, plat, cu bandă radială (forma R); C. diphtheriae v. mitis - negru, mat, 1-2 mm în diametru, convex, cu marginile drepte (forma S). În preparatele dipteriei corynebacterium sunt bastoane polimorfe gram-pozitive, drepte și ușor curbate, amplasate sub un unghi sau sub formă de degete răspândite, și formează, de asemenea, aglomerări asemănătoare pâslilor. Atunci când pictează pe Neisser, se dezvăluie boabele volute de culoare albastru închis, situate la capetele celulelor. Dipteroizii sunt localizați în principal în "palisadă" și sunt, de obicei, lipsiți de boabe de volute.
Coloniile caracteristice sunt analizate pe agar seric înclinat, mediu Pisa și pun RP pentru toxigenitate. Culturile sunt plasate într-un termostat la 37 ° C timp de 18-24 ore.
În stadiul 3, luați în considerare rezultatele RP în gel și probele Pisa. În cazul unui test pozitiv pentru RP și Pisa pentru cistinază, medicului i se spune că a fost izolată o cultură a difteriei toxice.
Studiați creșterea unei culturi ecranate din coloniile agentului patogen suspectat, pe agar seric înclinat. Se prepară droguri fix din cultura de testare a Neisseria colorant (acid acetic albăstrelii Neisseria - 60, se clătește; soluție Lugol - 30 secunde, drenată, se obține chrysoidine - 10-15 secunde, se spală, se usucă) și promikroskopiruyte. Rezultatele sunt înregistrate în protocol.
Culturile pure izolate se inoculează pe mediu Hiss cu glucoză, zaharoză, amidon, cistina (proba Pisa) și uree (testul Zaks) și a pus din nou RP.
În stadiul 4, luați în considerare și evaluați rezultatele activității din etapa 3 a studiului:
- activitatea biochimică a culturii izolate pe mediu Hiss, mediul Pisa (cistinază) și mediul Sachs (ureaza);
- RP în gelul de agar, atrăgând atenția asupra fiabilității rezultatelor obținute.
Pe baza rezultatelor tuturor etapelor studiului, stabiliți tipul de agent patogen, biovarul acestuia; determina toxigenitatea sa și umple direcția goală și forma-răspuns din rezervor. laborator.
II. Continuarea studiului bacteriologic asupra bacteriocarrierului corynebacteriilor difteriei la studenți, pentru care:
Examinați culturile faringelui și nasului pe agarul de sânge-telurit, selectați și descrieți coloniile izolate caracteristice.
Din coloniile selectate preparați preparatele colorate în conformitate cu Gram și Neisser, microscopie.
Pe baza rezultatelor obținute, formulați concluzia.
III. Setați, luați în considerare și evaluați RNGA cu serul subiecților și diagnosticul antigenic difteric al eritrocitarelor pentru a determina imunitatea antitoxică.
Determinarea nivelului imunității antitoxice este efectuată pentru a evalua eficacitatea și calitatea inoculării. În acest scop, un grup de indicatori ai populației este chestionat, inclusiv persoanele care au documentat istoria vaccinării și au primit ultima inoculare timp de 6-18 luni. înainte de examinare.
În acest scop, RNGA se introduce în plăci din polistiren (vezi tabelul 1).
Schema de formulare RNGA pentru determinarea imunității antitoxice
Expunere 30-40 de minute la temperatura camerei
Plăcile sunt lăsate pe o suprafață plană la T-20 ° C; mișcarea lor înainte de a lua în considerare rezultatele reacției nu este permisă!
Rezultatele RNGA sunt luate în considerare vizual în cruci în funcție de gradul de aglutinare a eritrocitelor (vezi Sesiunea 10). În cadrul controalelor nu trebuie să existe fenomene de hemaglutinare. Titrul seric este ultima diluție care dă un răspuns de hemaglutinare de cel puțin ++. Pentru evaluarea rezultatelor se folosește un titru de protecție de 1:20.
IV. Citiți și descrieți în protocolul biologic produsele, indicând ce conțin, pentru ce și cum să aplicați.
Trimiteți-le prietenilor: