Tratamentul și colorarea țesutului osos
pentru studii histologice.
Înainte de a proceda la decalcifiere, osul, ca orice țesut, trebuie supus fixării. Alegerea unui fixativ depinde de scopul și natura studiului. Astfel, pentru medicamentele răutăcios și identificarea componentelor fibrilare osoase utilizate formol pur (soluție 15-20%), în timp ce pentru studii citologice cleme complicate de preferat, de asemenea, conținând formalină, deoarece reduce gradul de umflare a structurilor din fibre, cu prelucrarea ulterioară a țesutului ( . retainer Shtive exemplu: diclorură de mercur soluție apoasă saturată - 76 ml, formol 20 ml glacial acetic acid- 4 ml)
Pentru fixare, bucăți mici de os (cu grosimea de 0,5-1 cm) trebuie tăiate cu un ferăstrău de găurit, deoarece zăvorul pătrunde încet din cauza densității mari a țesutului. Timpul de fixare depinde de grosimea piesei (nu mai puțin de 48 de ore)
La sfârșitul obiectului Fixing spălat bine în apă de la robinet sau alcool (de exemplu, după fixatori complexe conținând diclorură de mercur), precum și în acizi de prelucrare ulterioare pot forma precipitatelor greu solubile. Ulterior, în scopul preparării de degresare se realizează printr-o serie de concentrații în creștere ale alcoolilor (50, 70 și 96%) și apoi ajustate la o concentrație de apă prin alcooli downlink.
Decalcificarea se realizează prin tratarea țesutului osos cu ajutorul lichidelor decalcificate, care au proprietăți de dizolvare a sărurilor anorganice, fără a deteriora elementele structurale ale osului.
Atunci când decalcificarea trebuie să respecte următoarele reguli de bază:
1. Aplicați o cantitate mare de lichid de decalcifiere și schimbați-l zilnic (volumul lichidului trebuie să depășească volumul obiectului cu cel puțin 50-70 ori);
2. Obiectul decalcinat trebuie plasat în stratul superior al lichidului pentru a se asigura că sărurile solubile sunt coborâte până la fund (suspensia de bucăți pe o șir sau o sită de sticlă);
3. efectuați decalcificarea până când sărurile minerale sunt îndepărtate complet (dar nu rețineți prea mult materialul în lichide, deoarece acest lucru duce la umflarea fibrilelor și deteriorarea colorării structurilor)
Decalcificarea este considerată completă atunci când obiectul devine moale și tăiat cu un cuțit ușor și fără rătăcire. Procesul poate fi verificat prin gradul de imersiune în obiectul acului de disecție. Flexibilizarea medicamentului și presarea acestuia nu este recomandată, deoarece aceasta duce la deteriorarea structurilor fine ale osului.
Decalcifiere într-o singură soluție de acid azotic (5-7,5%), metoda cea mai comună. Pentru a prepara soluția de lucru în balonul cotat se toarnă 5-7,5 ml de acid concentrat azotic grad reactiv (densitate 1,40) și se diluează până la 100 ml de apă distilată (soluție poate fi preparată în cantități mari în proc prin calcularea cererii totale). Utilizarea de concentrații mai mici și mai mari ale soluțiilor care nu sunt recomandate pentru decalcifierea oaselor, ca prima cauza umflarea si deteriorarea vtorye- structurilor celulare. Concentrațiile mai mari (până la 10%) sunt utilizate numai pentru decalcificarea dinților.
După turnarea cantității potrivite de lichid într-un vas de sticlă adecvat, o bucată de os pregătită pentru decalcifiere este suspendată în acesta. Soluția se schimbă zilnic până la decalcificarea completă. Perioada de decalcificare depinde de proprietățile obiectului (densitate, magnitudine) și de concentrația de acid azotic. Durata medie a decalcificării micilor bucăți de țesut osos compact este de 10-12 zile.
La finalizarea decalcifiere pentru a elimina umflarea structurilor fibroase de droguri suspendat timp de 24 de ore în soluție de sulfat de sodiu 5% Na2SO4 sau Li2SO4 de litiu (în absența unor astfel de săruri osoase trebuie plasate într-un alcool 96%) și numai apoi se spală cu grijă timp de 1-2 zile în care rulează apă de la robinet.
Este posibil să se scurteze timpul de obținere a osului decalcinat prin plasarea piesei tăiate direct într-o soluție 5% de acid tricloracetic conținând 10-20% formalină. Acest amestec se fixează simultan și decaltează. Piesele mici de densitate medie pot fi decalcificate în 3-5 zile. După decalcifiere, după decalcificare, se clătește în alcool (deși nu în apă).
Există o serie de alte modalități de decalcifiere, însă toate se bazează pe același principiu și necesită respectarea regulilor generale de mai sus.
După decalcificare, țesutul osos poate fi tăiat pe microtomul de îngheț și, de asemenea, turnat în celloidină sau celloidin-parafină pe calea obișnuită. Umplerea parafinei nu este recomandată, deoarece impregnează slab osul decalcificat.
Cea mai obișnuită metodă de colorare a secțiunilor țesutului ostic decalcifiat este de Schmorl (ACID TIONINPICRIN).
A este o soluție saturată de tionină în alcool 50%.
B-1% soluție apoasă de fenol.
B este o soluție saturată de acid picric.
Înainte de utilizare, se toarnă o parte a soluției (A) cu 10 părți soluție (B). secțiunile fiind în apă se transferă timp de 10 minute în amestecul rezultat, și apoi se clătește cu apă distilată și plasate într-un 30-60 cu o soluție saturată de acid picric. Apoi secțiunile sunt clătite din nou în apă distilată și diferențiate în 70% alcool până la obținerea unei culori roșu închis. După aceea, ele sunt transferate în alcool 96%, în care diferențierea continuă (sub controlul microscop, atâta timp cât cutoff contextul general dobândește brun (sau marsh) de culoare, și celule osoase și procesele lor. - secțiunile Red colorate au fost apoi efectuate la 96% și alcool absolut, carbol-xilen, xilen și sunt învelite în polistiren.
Dacă secțiunile rele se colorează datorită decalcifierii prelungite în acid azotic, trebuie mai întâi plasat la 2 până la aproximativ 3 ore, 5% apă de amoniac, apoi se spală bine în apă distilată și apoi pata.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: