Diagnosticul rapid al holerei. Holera este cauzată de două biberi holera Vibrio. Unul dintre ei, un Koch dedicat în Egipt în 1883, numit clasic, celălalt a obținut stația de carantină F.Gotshlihom El Tor în Africa de Nord în 1906 V.eltor. Ambele biovar nonagglutinating vibrios Nagy, vibrios paragemoliticheskie halofile produc hemolizină și non-holeră vibrios-acidifiant încorporată în genul Vibrio familia Vibrionaceae.
Aceasta este o infecție intestinală acută, însoțită de deshidratare severă și desalinizare a corpului. Sursa infecției este o persoană bolnavă sau un transportator. Mecanismul de transmitere este fecal-oral. Agenții patogeni au antigeni saturați O și flagelat H.
O-antigenul are o specificitate specifică și tipică. Conform structurii antigenului O, se disting mai mult de 40 de serovari. Dezvoltarea imunității la holeră are un caracter umoral. Material pentru studiul scaunului, voma, cadavrului. Metodă de cercetare în masă privind transportul vibrio. Materialul este luat direct din intestin folosind un tub de sticlă de 0,5 cm în diametru pentru copii, 1,5 cm pentru adulți și 15 cm lungime cu capete topite în absența tuburilor care folosesc tampoane de bumbac pe bastoane de lemn.
Tubul este imersat imediat într-un flacon care conține 100-200 ml de apă peptonă și ser de O-aglutinant de holeră diluat la jumătate din titrul său. În aceeași sticlă se iau materiale de la 10 persoane. Flacoanele sunt plasate într-un termostat la 37 ° C. După 3 4 ore, vibrele de holeră încep să se aglutineze și treptat să cadă sub formă de fulgi în partea inferioară a flaconului în următoarele două ore. Examinându-se sub microscopul colorat și o picătură încurcată, acestea dezvăluie vibrioși lipiți și parțial liberi.
După 6 ore, răspunsul este dat în cazul depistării V. cholerae imediat inoculate individual din fiecare dintre cele 10 indivizi. Această metodă permite examinarea a până la 16.000 de persoane în 3 4 zile. Metodă de microfilm imunodiagnostic. Studiul proprietăților antigenice ale V. cholerae se realizează prin fixarea tubului de test sau reacția plăcii aglutinare folosind uscat liofilizat aglutinant diagnostic holerei 0-seruri și seruri Ogawa și Inaba. Serul este crescut în soluție salină fiziologică sau apă distilată și se amestecă atunci când se efectuează aglutinarea pe sticlă cu cultura vibrio studiată.
La prepararea serului utilizat vase suplimentare, ceea ce complică activitatea bacteriologul și serul diluat restul creste rapid microflora bacteriană și inactivează. Pentru a studia structura antigenică a vibrelor de holeră, s-a dezvoltat un preparat imunodiagnostic sub forma microfilmelor de o singură utilizare, care au avut suficientă specificitate, demonstrativitate și economie.
holeră immunodiagnostic IHMP microfilm sub forma unui film polimeric acoperit cu picăturile uscate, fixate pe hârtie, conțin cantitatea minimă de ser, componenta formatoare de film și conservant. Componenta de formare a filmului se leagă, aderă și fixează urme ingrediente pe suprafața suportului elimina mărunțire microfilm conservant protejează medicamentul împotriva degradării în timpul depozitării extinse.
Concentrația serului de diagnostic în ICMP este suficientă, deoarece după emulsificare într-o picătură de soluție salină, anticorpii sunt conținute într-un titru de 1100, care asigură complet cursul reacției. Acest lucru asigură o concentrație suficientă de anticorpi, reduce consumul serului de diagnosticare și elimină posibilitatea de neutilizare a acestuia. În același timp, sunt create condiții pentru dizolvarea rapidă a ICMP, a contactului cu vibratorii de holeră și a reacției direct pe pelicula de polimer.
Ready IHMP depozitat într-un loc uscat întuneric la 4 ° C până la 7C în cutii de carton termenul de valabilitate de 3 ani de observare și, dacă este cazul IHMP utilizat pentru a determina Vibrio cholerae. Pentru a preveni contaminarea accidentală a obiectelor din jur, IHMP este plasat într-un vas Petri curat. Pe suprafața ICMP pune o picătură de soluție fiziologică, care o dizolvă. Serul diluat este amestecat cu cultura vibrio studiată, luată cu o bucla bacteriologică din mediul nutritiv.
Într-o altă variantă a reacției, ICMP este îndepărtat cu un bisturiu dintr-un substrat de hârtie și transferat într-o alunecare, dizolvat într-o picătură de soluție salină și amestecat cu cultura vibrio studiată. Cu o reacție pozitivă, după 1-3 minute, apar granule aglutinate, verde colorat, iar picăturile sunt luminate. Cu o reacție negativă, picatura rămâne omogenă - tulbure. Partea utilizată a peliculei de polimer este tăiată, iar restul filmului cu ICMP este stocat în același vas Petri pentru studii ulterioare.
Utilizarea IHMP Vibrio de cercetare și a altor microorganisme face posibilă obținerea unor rezultate fiabile statistic, cu excepția serului de diagnostic costisitoare, pentru a îmbunătăți calitatea și eficiența investigațiilor. Aglutinare micrometodă. Recent, practica bacteriologic gasit metoda destul de larg utilizată pentru microvolume performanțelor testelor serologice folosind planșete speciale microtitrare și ace. Testele de aglutinare da micrometodă cu holeră aglutinare seruri de referință în microtitrare polistrolovyh planșeta NYM imagine plană sau fund în V destinate reacțiilor imunologice utilizate sonde microtitrare mpkrotitrovalnye cu un volum de 0,4 ml în eprubete și paralele.
În prealabil, plăcile sunt clătite bine cu apă curentă, fiecare godeu clătit cu apă distilată și uscat bine, apoi etichetat cu un simplu creion.
In toate godeurile patru serii picurător este realizat dintr-o Takacs soluție de clorură de 0,85 sodiu microtitrare cu pH 7,2 într-un volum de 0,05 ml, apoi primul godeu al fiecărui rând corespunzătoare aceluiași volum de ser la o diluție de 125 și efectuat titrare sale mikrotitroval clorhidric un ac cu un volum cap de 0,05 ml, prin îndepărtarea ultimul din godeuri la 0,05 ml. După titrare serurilor la toate godeurile, în afară de controalele lor, ceea ce face o suspensie de 0,05 ml studiu de cultură agar.
Această manipulare se efectuează pe o tavă. La capătul plăcii de titrare a fost acoperit cu un capac și pus pe o tavă într-o etuvă la 37 ° C După o expunere de 2 ore se înregistrează reacția finală se efectuează sub stereomicroscop MBS 1, MBS lumina 2 kosoprohodyaschem. Când se ia în considerare reacția, capacul nu este îndepărtat de pe placă, în caz de ceață, altul este înlocuit. După ce se lasă planșeta de reacție și stivuite în capac șanț, și se toarnă 5 cloramină, astfel încât toate godeurile au fost umplute cu dezinfectant planșete soluției.
Studiile au arătat că toate Vibrio cholerae El Tor și biovari holeră clasice specie aglutinate 0-ser în micro. În ceea ce privește agglyutinabelnosti seruri de tip specific, modelul următor este trasată în formularea în ser Inaba micrometodă aglutinante 100 și tuburi 90 tulpini de Vibrio cholerae serotipul clasic Inaba. Biovar V. cholerae El Tor Inaba serotip aglutinat în planșete și tuburi, respectiv 95 și 96 cazuri.
In Vibrio cholerae clasic și El serotipul Tor Ogawa biovari raportul în ambele metode au fost aproape la fel. Interesant, la stabilirea reacției de aglutinare cu RO-ser cel mai mare număr de tulpini de aglutinate RO-ser la un titru a fost detectat în micrometodelor aglutinarea în tuburi instalate într-o singură tulpină. Toate tulpinile de Vibrio 040,056 serovarurilor în micrometodă nu aglutinate seruri holeră aglutinant și eprubete tulpina II 258-1099 040 serotip aglutinate toate serurile holeră.
Cei mai mulți reprezentanți ai familiei Enterobacteraceae ale tulpinilor studiate nu sunt aglutinate seruri holeră Aglutinabilitatea, cu excepția Sh. flexneri 2503 care a fost găsit în tuburi aglutinării cu toate serurile și tulpina S. typhimurium 21, care este marcat aglutinare nespecifică cu toate serurile atât in vitro cât și într-o placă Ouija.
Când se folosește această metodă, consumul de aglutinare seruri este redus de 10 ori, reducând semnificativ timpul necesar pentru reacția de setare și este perioada de emitere a unui răspuns accelerat. În plus, metoda descrisă este mai puțin consumatoare de timp. Astfel, standardul, acuratețea rezultatelor, o eficiență ridicată a metodei permit să-l recomanda pentru identificarea Vibrio cholerae, și tulpini de populația de studiu Vibrio cholerae tulpini pe agglyutinabelnosti bază.
Și, de asemenea, Imobilizarea vibrioților cu seruri de holeră și fagi tipici de holeră. Picăturile de fecale sau materiale de pe suprafața apei de peptonă sunt tratate cu ser de O-holeră, seruri Ogawa tipice și Inaba sau faguri tipice de holeră. Se prepară din acestea preparate cu picătură zdrobită, care sunt examinate utilizând microscopie cu câmp întunecat și cu contrast în fază. Într-un caz pozitiv, după 3-5 minute, mișcarea vibriilor încetează. RIF. Preparatele din materialul testat sunt tratate cu ser anti-cholera fluorescentă și examinate într-un microscop luminoscent.
Un rezultat pozitiv îl constituie detectarea în pregătirea unor vibrații simple, cu o strălucire galben-verde stralucitoare, sub forma unei jante strălucitoare de-a lungul periferiei celulei. Un rezultat pozitiv poate fi obținut la 1-2 ore după începerea testului cu o concentrație de vibrio de cel puțin 106 celule pe 1 ml, prin urmare se recomandă ca materialul să fie pre-crescut pe medii nutritive.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: