Cele mai recente realizări ale ingineriei genetice și biotehnologiei au condus la dezvoltarea rapidă a unei direcții complet noi de vaccinologie - la vaccinurile ADN.
vaccin pe bază de ADN este o plasmidă bacteriană (ADN circular autonomă de 4-6 mii. Perechile de baze), care pot replica în mod eficient în celulele de E. coli. Plasmida este prin inginerie genetica (folosind enzime de restricție, ligare și t. D.) Inserate „sens“ genă care codifică o proteină imunogenă a virusului, care va proteja vaccinul ADN. În practică, ca o plasmidă inițială utilizată o plasmidă modificată care conține un promotor eucariot (care asigură un nivel ridicat al expresiei genei), citomegalovirusul sau virusul simian 40, sau virusul sarcomului Rous și semnalele de terminare a transcripției și poliadenilare care să permită producerea proteinei virusului imunogenă în celulele animale. Mai mult, plasmida are o genă de rezistență la un antibiotic (de exemplu, ampicilina) necesare pentru selecția în clonare și în creștere.
Astfel, se obține o plasmidă recombinantă care este crescută (replicată) în cantitățile necesare în celulele bacteriene E. coli în prezența ampicilinei și, după o purificare adecvată, plasmidele sunt utilizate pentru imunizarea animalelor. De obicei, se utilizează soluție salină fiziologică, în care plasmidele se găsesc în suspensie (aceasta elimină problema reactivității medicamentului).
Rezultatele studiului pe animale de laborator au arătat că cantitatea de plasmidă recombinantă necesară pentru injectarea intramusculară poate varia de la 0,001 la 10 pg per kg de greutate în viu.
ADN-ul plasmidic este absorbit de celulele animale în cantități mici (0,01-1,0%), iar cea mai mare parte este distrusă rapid.
Străpungerea în ADN-ul unei celule este transportat la nucleu și este transcrisă (ADN-dependentă de celulă PHK-polimerazei II) pentru a forma ARNm care, în citoplasmă celulelor ribozomilor asigură sinteza unei proteine imunogene plin de agent care conduce la formarea de răspuns imun umoral și celular și, în consecință, să formarea unei imunități obositoare. ADN-ul plasmidic funcționează în celule până la 3-6 luni.
Vaccinurile ADN pot fi administrate intradermic, intramuscular, subcutanat, intravenos, intranazal, oral. Cele mai promițătoare sunt metodele intradermale și intramusculare. Rezultatele privind așa-numita metodă balistică de introducere (pistolul genei) merită atenție atunci când particule de aur de 1-2 μm în diametru acoperite cu plasmid ADN sunt livrate celulelor pielii folosind un dispozitiv special. Pentru a obține același efect, ADN-ul trebuie să fie de 100-5000 de ori mai mic decât pentru administrarea intramusculară.
Mecanismul răspunsului imun în vaccinarea ADN nu este încă clar. Cu toate acestea, datele disponibile sugerează că aceasta pare a fi următoarea. proteina sintetizata este scindată în celulele din protezomii plasma peptide scurte (8-16 aminoacizi) care reprezintă epitopi individuali sau determinanți antigenici. Peptidele sunt transportate prin proteine transportoare către reticulul endoplasmatic. Acolo ei se leagă la moleculele de proteine din complex major de histocompatibilitate I (MHC I) - glicoproteine membranare și transportate la suprafața celulei, care sunt recunoscute de către limfocitele T citotoxice. Recente activat, proliferează și formează un bazin de limfocite T citotoxice, capabile de distrugerea celulelor țintă, adică. E. Celulele infectate cu virus.
Proteina imunogenă sintetic in celulele pot fi transportate în afara celulei în spațiul extracelular. Acesta se leaga de celule prezentatoare de antigen (macrofage), pătrunde în ea prin endocitoză scindată în fragmente scurte (10-20 aminoacizi) proteine, care sunt combinate cu moleculele de clasa II MHC, și transportate la suprafața celulei unde acestea sunt recunoscute de relevante clonele de celule T-helper și B celulelor p, conducând la activarea celulelor B și diferențierea acestora în celule plasmatice secretoare de anticorpi. Acțiunea limfocitelor T citotoxice si celulele T helper stimulate prin producerea de citokine - mediatori ai interacțiunilor celulă-celulă.
Astfel, ADN plasmidic cu gena proteinei imunogene integrate a virusului induce un răspuns imun humoral și celular complet la animale.
Pentru a întări proprietățile imunogene ale vaccinurilor ADN, acestea sunt administrate împreună cu plasmide, în care sunt încorporate genele citokinelor (regulatori ai răspunsului imun). În plus, introducerea vaccinurilor ADN în lipozomi sau microcapsule oferă un nivel ridicat de răspuns imun humoral și celular.
În prezent, construit mai mult de 20 de vaccinuri ADN împotriva diferitelor boli virale ale animalelor și oamenilor: rabie, boala Aujeszky, boala Newcastle, rinotraheita infecțioasă bovină, virusul diareei virale, leucemie bovine, cabaline rhinopneumonia scădere sindromul producției de ouă, infecție cu parvovirus câinilor, SIDA, herpesvirus infecții umane etc.
Vaccinurile ADN sunt cele mai promițătoare pentru prevenirea bolilor predispuse la un curs cronologic prelungit. Ei au siguranța vaccinurilor vii inactivate și eficiente. Cu toate acestea, nu există încă informații complete despre eficacitatea vaccinurilor ADN în imunizarea oamenilor. Organizația Mondială a Sănătății (OMS) a elaborat cerințe unificate pentru vaccinurile ADN. Eficacitatea imunizării cu vaccinuri ADN este evidentă, însă tehnologia dezvoltării acestor vaccinuri se află în stadiul de formare și studiu intensiv. Va fi nevoie de mult efort pentru a pune în aplicare o nouă abordare a prevenirii bolilor virale la animale și la oameni.
Notă. Replicarea ADN-ului plasmidic apare numai în celulele bacteriene, în timp ce transcripția genei de proteină imunogenică apare numai în celulele de mamifere. Experimentele pe animale au arătat că ADN-ul plasmidic nu se replică, nu este încorporat în cromozomi și nu se formează anticorpi la animale.
Distribuiți un link cu prietenii
Articole similare
-
Vaccinuri pentru ovine și berbeci, Vand vaccinuri pentru ovine și berbeci - интернет-магазин 33 vaci
Trimiteți-le prietenilor: