Acasă | Despre noi | feedback-ul
REACȚII DE DEPOZITE DE PROTEINE
Cele mai multe proteine sunt compuși moleculați mari care se dizolvă bine în apă. Dizolvarea proteinelor în apă este asociată cu hidratarea moleculelor sale și formarea unei coajă de hidrat în jurul particulelor de proteine. Toți factorii fizici și chimici care încalcă hidratarea moleculelor de proteine și neutralizează încărcarea lor conduc la o scădere a solubilității proteinei și contribuie la precipitarea ei.
1. Precipitarea proteinelor la încălzire.
Efectul temperaturii ridicate conduce la denaturarea termică a proteinelor, ca urmare a distrugerii structurilor proteice secundare, terțiare și cuaternare. Comasarea cele mai multe proteine incepe la o temperatura de 50-55 0 C. La scurt Denaturarea încălzite nu pot să apară sau să fie prezentat într-o mică măsură, creșterea suplimentară a temperaturii conduce la proteina de coagulare rapidă.
Rata și intensitatea procesului de denaturare termică sunt puternic influențate de pH-ul soluției și de prezența electroliților. Rapid și cel mai complet, proteinele coagulează la punctul izoelectric. În soluțiile puternic acide și puternic alcaline, precipitarea proteinelor în timpul fierberii practic nu are loc, deoarece moleculele de proteine dobândesc o încărcare pozitivă sau negativă, respectiv.
Reactivi: soluție apoasă de albus de ou, soluție 1% și 10% acid acetic, soluție de hidroxid de sodiu 10%, soluție saturată de clorură de sodiu.
Realizarea lucrării. În cinci tuburi se toarnă 1 ml de soluție proteică. Proteina din primul tub este încălzită până la fierbere, în timp ce soluția devine tulbure, dar precipitatul nu se desprinde.
La soluția proteică din al doilea tub, se adaugă o picătură de soluție de acid acetic 1% și se încălzește, în timp ce se precipită precipitatul floculat al proteinei.
La soluția proteică din al treilea tub, se adaugă 5 picături de soluție de acid acetic 10% și se încălzește la fierbere, fără a se forma precipitat.
În al patrulea tub, se adaugă 5 picături dintr-o soluție de acid acetic 10% și 6 picături dintr-o soluție saturată de clorură de sodiu, se încălzește la fierbere - proteina precipită.
În al cincilea tub, se adaugă 5 picături de soluție de hidroxid de sodiu 10% și se încălzește la fierbere, fără precipitare.
Explicați fenomenele observate, dacă se știe că albumina din ou conține: albumină din ouă cu rNiEt = 4,8 și globulină de ouă cu rNiEt = 6,6.
Depunerea proteinelor cu solvenți organici.
Solvenții organici (alcool, eter, acetonă etc.) distrug stratul hidrat al proteinei, ceea ce duce la scăderea stabilității și precipitării proteinei din precipitat.
Precipitarea proteinelor cu etanol este reversibilă sub expunerea pe termen scurt la reactiv și fără încălzire. Contactul prelungit al proteinelor cu alcoolul duce la denaturarea ireversibilă.
Reactivi: soluție de albus de ou, alcool etilic, acetonă.
Realizarea lucrării. La 1 ml de soluție proteică se adaugă 2 ml de alcool etilic și se agită. Un precipitat de proteine dispare, care se dizolvă din nou când este diluat cu apă.
La 1 ml din aceeași soluție de proteină se adaugă 2 ml de acetonă și se agită puternic. Soluția proteică devine tulbure.
Precipitarea proteinelor cu acizi minerali.
Acizii minerali concentrați (nitric, sulfuric, clorhidric) cauzează deshidratarea particulelor de proteine și neutralizarea încărcăturii lor și este posibilă formarea de compuși complexe. Toate acestea conduc la denaturarea ireversibilă a proteinei. Precipitatul proteic obținut prin acțiunea acizilor în exces de acid sulfuric și acid clorhidric se dizolvă, dar nu se dizolvă în acid azotic în exces.
Reactivi: soluție de albus de ou, soluții concentrate de acizi clorhidric, sulfuric și azotic.
Realizarea lucrării. În trei eprubete se toarnă 1 ml soluție acidă: prima - clorhidrat, a doua - sulfurică, a treia - azot. Cu atenție de-a lungul peretelui tubului, astfel încât lichidele să nu se amestece, se toarnă un volum egal de soluție proteică. La limita celor două lichide se formează un precipitat sub forma unui inel mic. Tuburile sunt ușor agitate, se adaugă exces de acid și precipitarea se dizolvă în primele două tuburi de testare.
Precipitarea proteinelor cu săruri ale metalelor grele.
Proteinele sunt precipitate cu săruri de plumb, mercur, argint, cupru și alte metale grele. În acest caz, denaturarea proteinelor este cauzată de adsorbția ionilor de metale grele pe suprafața moleculelor de proteine pentru a forma complexe insolubile.
Excesul unor săruri (sulfat de cupru, acetat de plumb și altele) conduce la dizolvarea sedimentelor (peptizare).
Reactivi: soluție de albus de ou, soluție de sulfat de cupru 1%, soluție de acetat de plumb 5%, soluție de nitrat de argint 1%.
Realizarea lucrării. În trei tuburi se toarnă 1 ml de soluție de albus de ou și se adaugă prin picurare soluții de săruri: în primul rând sulfat de cupru, al doilea - acetat de plumb, în al treilea - azotat de argint înainte de precipitare. Apoi se adaugă un exces de săruri și precipitarea se dizolvă în primele două eprubete. Precipitatul format din azotat de argint nu se dizolvă în exces de sare.
Precipitarea proteinelor prin săruri neutre (saltare).
Precipitarea proteinelor în precipitat atunci când soluțiile de săruri neutre de amoniu, săruri alcaline și alcalino-pământoase acționează asupra lor se numește sărăcie. Acest proces se bazează pe deshidratarea proteinelor și neutralizarea sarcinilor particulelor de proteine adsorbite pe ele de ionii sării. În acest caz, soluțiile de proteine își pierd stabilitatea, particulele de proteine se lipesc împreună și precipită.
Prin modificarea concentrației de săruri, este posibilă diferențierea diferitelor fracțiuni de proteine. Astfel, în cazul sărare cu clorură de sodiu, globulinele (pHIET = 6,6), depuse cu soluție salină saturată, și pentru a precipita albumina (pHIET = 4,8), este necesar să se adauge o soluție 1% de acid acetic pentru a neutraliza sarcina proteinei.
Reactivi: soluție de proteină de ou cu clorură de sodiu, clorura de sodiu cristalin (pulbere fin măcinată sub formă de pulbere), soluție de acid acetic 1%, soluție de hidroxid de sodiu 1%, soluție de sulfat de cupru 1%.
Prepararea soluției de proteine (cu adăugarea de clorură de sodiu).
Proteinele a trei ouă de pui sunt separate de gălbenușuri, dizolvate în 7 ml de apă distilată și se toarnă 3 ml soluție saturată de clorură de sodiu. Soluția este filtrată printr-o tavă de pânză îndoită în 3-4 straturi. A se păstra la frigider.
Realizarea lucrării. Se toarnă 3 ml de soluție de albus de ou într-un tub de testare și se adaugă o pulbere de clorură de sodiu până când se obține o soluție saturată. După 5-6 minute, se observă precipitarea globulinelor în eprubeta. Albuminele din soluțiile neutre ale sărurilor alcaline și alcalino-pământoase nu precipită. Conținutul tubului este filtrat printr-un filtru de hârtie.
În filtrat există albumine, pentru a le precipita, soluția este acidificată cu o soluție 1% de acid acetic. Precipitatul care apare este filtrat și absența proteinei este dovedită în filtrat utilizând o reacție biuret.
1. Dați conceptul de proteină nativă.
2. Ce factori afectează solubilitatea proteinelor?
3. Ce se întâmplă cu precipitarea reversibilă și ireversibilă a proteinelor?
4. Ce reactivi provoacă precipitarea ireversibilă a proteinelor?
5. Ce solvenți organici determină precipitarea proteinelor din soluții și de ce?
6. Cum afectează starea izoelectrică precipitarea proteinelor atunci când sunt încălzite?
7. Ce factori determină denaturarea proteinelor și de ce?
8. De ce proteina nu precipită în timpul denaturării termice a proteinei din ouă într-un mediu puternic acid sau puternic alcalin, chiar și atunci când este încălzit?
9. Care este baza pentru separarea albuminelor și globulinelor?
10. Care este baza metodei de sărare a proteinelor?
11. O metodă de depunere Sugerează proteină: pepsină (rNIET = 1,1), ureazei (rNIET = 4,9), catalază (rNIET = 6,7).
12. Care sunt metodele de extracție a proteinelor bazate pe?
Trimiteți-le prietenilor: