Etapa тп-1

1.1. Caracteristicile producătorului de tulpine laccase.

Ca producător al enzimei laccase, cultura din ciuperca basidială superioară Trametes hirsuta 56 (Wulfen.) PiláT.

Tulpina producătoare este caracterizată de o rată de creștere ridicată și de sinteză activă a laccasei extracelulare în cultură profundă în fază lichidă.

Pe un mediu solid agarizat, se formează colonii cu miceliu aerian fibros lăturat bine dezvoltat. Zonarea coloniilor nu este pronunțată. În a treia zi de cultivare la o temperatură de 32 ° C, diametrul coloniei devine 6-7 cm. Miceliul aerian este alb. Marginea coloniei este netedă, înaltă. Reversum neschimbat, apoi alb. Când colonia îmbătrânește cu o nuanță gălbuie sau cremoasă, rudimentele corpurilor de fructe se formează sub formă de tuberculi cu diametrul de 3-10 mm. Mirosul este ciuperca plăcută.

Într-o cultură profundă, aglomeratele miceliene sunt pubescente cu formă sferică sau neregulată în diametru de la 1 la 8 mm. În cultura profundă și superficială, ca regulă, nu formează chlamydospores, arthrospores și oidias. Hifa septat, ramificat în unghi drept. Hifele pot forma umflături și îngroșare la capete. Hyphae de trei tipuri, în cultura profundă în principal de două tipuri: subțire (1.0-2.0 microni) și gros (2.5-5.0 microni). Buzunare unice, mari, abrupt curbate, adesea fără lumen, uneori medalion.

Aerobic. Temperatură optimă de creștere (31 ± 1) о С, valoare optimă a pH-ului 4,0.

1.2. Prepararea mediului nutritiv.

Mediu nutritiv, g / l:

Extrageți porumb separat (100 g / l) și sterilizați separat la 0,18 MPa timp de 40 de minute.

Făină într-un recipient separat, se dizolvă într-o cantitate mică de apă rece, se adaugă în apă clocotită cu agitare viguroasă și să stea timp de 10 minute, se adaugă sare și porumb steril lichior abrupt. Se răcește la 30 ° C. Se ajustează pH-ul la 5,7 prin titrare cu 10% H2S04 sau 10% KOH.

Mediul preparat se toarnă în 150 ml fiecare în flacoane volumetrice de 750 ml și se acoperă cu dopuri cu capace de hârtie.

1.3. Sterilizarea mediului nutritiv.

retorte preparate cu mediu de cultură sunt plasate într-o autoclavă și sterilizate la o presiune de 0,18 MPa timp de 40 min, apoi se răcește la o temperatură (31 ± 1) ° C și utilizat în decurs de o lună. Depozitați la temperatura camerei.

1.4. Semănarea și cultivarea inoculului în flacoane.

Toate lucrările cu transplant de cultură și eșantionare sunt efectuate într-o cutie în condiții sterile în zona de flacără.

Prepararea semințelor în baloane se efectuează în mai multe etape (pasaje):

- Primul pasaj - reseeding cultură în mediul de cultură solid (glaf) se efectuează la o rată de 1 la jamb 1 prin transferarea culturii balon se agită împreună cu o bucată de mediu de agar cu cârlig microbiologic calcinat.

- treceri ulterioare (a doua, a treia, etc.) se realizează în proporție de 10% din volumul inoculului din pasajul precedent (150 cm3 15 cm nutritiv lichid de cultură medie 3 pasaj anterior) prin transferarea inoculului cu ajutorul unei pipete sterile cu un capăt expandat Mora sau cu un cilindru steril.

Pentru inoculul de însămânțare, este necesar să se prepare 0,44 litri de inocul a treia și a trecerii ulterioare. Timpul de păstrare a semințelor este de 10 zile. Inoculul se păstrează în frigider la o temperatură de +4 o C.

Flaconul inoculat este închis cu un dop de steril de bumbac, plasat pe un scaun balancing într-o cameră cu termostat și cultivat în modul următor:

- temperatura 30-32 о С

- Viteza de rotație 200 rpm (180-240 rpm)

- Timp de creștere: primul pasaj este de 3-4 zile (72-96 ore).

a doua - 2-3 zile. (48-72 ore)

a treia și ulterior - 2-3 zile. (48-72 ore)

Materialul semințelor este controlat (la o rată de 10% a baloanelor de semințe):

- privind absența microflorei străine prin însămânțare pe agar de peptonă din carne;

- asupra activității oxidazei spectrofotometric;

- prin parametrii morfologici și fiziologici prin microscopie a materialului de semințe cultivat (conform punctului 1.1).

Ca semințe de producție, o suspensie de cultură este utilizată după pasajul 3 și ulterior (până la 10).

Se menține cultura pe un mediu nutritiv solid și se cresc în baloane în conformitate cu instrucțiunile.

Materialul de semințe finit din baloane este utilizat pentru inocularea mediului în inoculator (poziția FO-10) la etapa TP-2.

Inoculul substandard este trimis la stadiul OBO-1.

Articole similare

• Stadiul producției de anchetă preliminară și anchetă - etapele procesului penal

• Ascite în cancerul ovarian - în stadiile 3, 4, prognostic, tratament

• Tratamentul combinat al insuficienței venoase cronice în stadiile inițiale, clinică

Trimiteți-le prietenilor: