Clasificarea mediilor nutritive
Atunci când se pregătesc medii nutritive pentru microorganisme, trebuie luată în considerare necesitatea lor de elemente alimentare. Compoziția mediilor nutritive este împărțită în două grupe: naturale (naturale) și sintetice. Naturale sunt, de obicei, numite medii, care constau din produse de origine animală sau vegetală, având o compoziție chimică nedeterminată complexă. Baza unor astfel de medii sunt diferite părți de plante verzi, țesuturi animale, malț, drojdie, legume, gunoi de grajd, sol, apa mărilor, lacurilor și a surselor minerale. Cele mai multe dintre ele sunt utilizate ca extracte sau perfuzii. În mediul natural, multe microorganisme se dezvoltă bine, deoarece în aceste medii există, de obicei, toate componentele necesare creșterii și dezvoltării. Cu toate acestea medie, cu compoziție nedeterminată de utilizare puțin pentru studierea substanțelor microbiene de schimb fiziologice, deoarece acestea nu permit să se ia în considerare o serie de consum de componente de mediu, iar pe de altă parte, determina care substanțele sunt formate în timpul creșterii microorganismelor. Acest lucru se datorează faptului că compoziția mediilor naturale este foarte complicată; în plus, nu este constantă, deoarece variază considerabil în funcție de materia primă și de metoda de preparare a mediului. Acest lucru are un efect marcat asupra creșterii microorganismelor. Mediile naturale de compoziție incertă sunt folosite în principal pentru a menține culturile microbiene, pentru a-și acumula biomasa și pentru a le folosi în scopuri de diagnosticare. Așa-numitele medii semisintetice sunt, de asemenea, numite mijloace de compoziție incertă. În compoziția lor, împreună cu compuși cu o natură chimică cunoscută, se includ substanțe cu compoziție incertă. Mediile sintetice sunt astfel de medii, care conțin numai anumiți compuși chimic puri, luați la concentrații precis specificate. Mediile sintetice ar trebui preparate pe apă distilată. Pentru dezvoltarea mediilor sintetice, asigurând creșterea normală a organismului studiat sau biosinteza maximă a oricărui produs al vieții sale, trebuie să cunoașteți caracteristicile metabolismului organismului și nevoia sa de surse de energie. În prezent, microbiologii au la dispoziție un număr suficient de medii sintetice care nu sunt inferioare calităților lor în medii complexe cu compoziție necunoscută. Mediile sintetice pot avea un set relativ mare de componente, dar pot fi destul de simple în compoziție. Mediile sintetice sunt cele mai convenabile pentru studierea metabolismului microorganismelor. Cunoscând exact compoziția și cantitatea de componente care intră în mediu, se poate studia consumul și conversia lor în produse de schimb adecvate. SN Vinogradsky a introdus medii elective (selective) pentru anumite grupuri de microorganisme în practica microbiologică. Aceste medii asigură dezvoltarea predominantă a unei specii sau a unui grup de microorganisme asociate și sunt mai puțin potrivite sau complet nepotrivite pentru dezvoltarea altora. Cunoscând caracteristicile fiziologice ale grupului corespunzător de microbi, putem alege condițiile de cultură (compoziția mediului, aciditatea activă, condițiile de aerare, temperatură, etc.) Sub care microorganismele se vor dezvolta numai în acest grup. Acest lucru vă permite să efectuați diverse procese biologice în laborator și în producție fără sterilizarea prealabilă a mediului. Aceste medii sunt utilizate în principal pentru a izola microorganismele de habitatele lor naturale, pentru a obține culturi acumulate. Conceptul de "medii elective" este inclus în conceptul mai larg al "condițiilor elective". Suplimente nutritive utilizate într-o varietate de consistențe: lichide, dense, semi-lichide. Suplimentele nutritive dense sunt folosite pentru a explica numărul de bacterii, izolarea lor într-o cultură pură și în alte scopuri. Astfel de medii sunt preparate din lichid, adăugând 1,5-2,5% agar-agar sau 10-15% gelatină. Când se prepară medii semi-lichide, se adaugă agar-agar într-o cantitate de 0,1-0,2%. Prin programare, mediul este împărțit în electivă și diferențial-diagnostic. Mediile selective asigură dezvoltarea primară a unui singur grup sau a unui ansamblu fiziologic de microorganisme. De exemplu, pentru bacterii negative, de alocare preferențială este suficientă pentru a adăuga nutrienți colorant mediu trifenilmetan (cristal violet, verde malachit, și așa mai departe. D.). Pentru a izola stafilococii în mediu, se poate adăuga clorură de sodiu la o concentrație de 7,5%. La această concentrație, creșterea altor bacterii este suprimată. Mediile selective sunt utilizate în prima etapă de izolare a unei culturi bacteriene pure, adică în obținerea unei culturi de stocare. media-diferențiale de diagnosticare utilizate pentru identificarea rapidă a speciilor strâns înrudite de microbi, pentru determinarea speciilor, in bacteriologie clinice si altele. Principiul presei diferențialul diagnostic bazat pe faptul că diferitele tipuri de bacterii difera in activitatea lor biochimice și au set variind de enzime care descompun Substraturi care alcătuiesc mediul nutritiv. Compoziția mediului diferențial de diagnostic include: a) principalul mediu nutritiv care asigură reproducerea bacteriilor; b) un anumit substrat chimic, relația cu care este un semn de diagnostic pentru microorganismul dat; c) un indicator de culoare a cărui schimbare de culoare indică o reacție biochimică și prezența acestui sistem enzimatic în microorganismul studiat. De exemplu, mediul Endo face posibilă distingerea clonelor care fermentează lactoza din clonele care nu posedă această proprietate. Principalele componente ale acestui mediu sunt hrănitoare (peptonă) agar și carbohidrat principal Fuxin, sulfit înălbită (reactivul Schiff). Mediul nutritiv inițial este colorat roz. Microorganismele care nu fermentează lactoza formează colonii incolore. Când se fermentează lactoza în acetaldehidă, aceasta din urmă reacționează cu sulfitul și se dezvoltă culoarea roșie a coloniilor corespunzătoare. Mediul cu eozină și albastru de metilen (mediul lui Levin) ca indicatori conține eozină și albastru de metilen și este inițial colorat negru și albastru. Celulele care efectuează fermentarea formează colonii vopsite în negru cu o culoare lucioasă metalică și colonii care nu posedă această proprietate sunt incolore. Modificări similare ale culorilor au loc deoarece coloranții sunt prezenți în mediu, nu sub formă de compuși separați, ci sub formă de complexe cu substanțe nutritive. La un pH scăzut, aceste complexe sunt precipitate, coloranții de pornire sunt solubili în aceste condiții, la complexele colorantă incolore cu pH ridicat, în timp ce albastru de metilen ia o culoare albastră. Acest mediu permite diferențierea bacteriilor din genul Escherichia de bacterii din genul Proteus.
Compoziția mediilor nutritive.
Cunoașterea diversității microorganismelor se datorează două circumstanțe. Unele microorganisme au atras atenția pentru o perioadă relativ îndelungată datorită faptului că formează colonii sau clustere sau provoacă schimbări notabile în mediul înconjurător. Multe dintre aceste microorganisme ușor de detectat sunt susceptibile de izolare directă; consideră că este ușor să alegeți condițiile care ar asigura creșterea lor. Există, cu toate acestea, multe alte microorganisme (de diferite tipuri fiziologice), puse la dispoziție pentru investigații doar după Vinogradsky Beyeripk dezvoltat tehnica si de îmbogățire a culturilor. În principiu și în practică, metoda este foarte simplă. Prin selectarea numărului de factori (sursele de energie de carbon și azot; electroni acceptor lumină, temperatură, .. PH, etc) pentru a crea anumite condiții și inoculate cu o populație mixtă de mediu, care are, de exemplu, în sol sau nămolul. Într-un astfel de mediu, tipul cel mai bine adaptat de microorganism crește și elimină toate celelalte organisme care îi însoțesc. Prin reintroducerea repetată într-un mediu lichid cu aceeași compoziție și cernerea în același mediu dens, este posibilă izolarea cu ușurință a tulpinii acumulate. reînsămânțarea frecventă cu mediul lichid într-un lichid previne creșterea organismelor asociate, care ar putea utiliza produse reziduale sau chiar autoliza celulelor primare de cultură și să crească prin ele. Un material excelent pentru inoculare sunt probe din acele locuri unde există deja "îmbogățirea naturală". Astfel, este posibil să se izoleze microorganismele folosind monoxid de carbon din apele uzate ale instalațiilor de gaz; microorganisme care utilizează hemoglobină - de la abatoare ape uzate și bacterii, oxida hidrocarburile - ulei din roci, din solul contaminat cu ulei, și uleiul din baia de ulei. Metoda culturilor acumulate ne permite să izolam microorganismele cu orice combinație de cerințe nutritive, cu condiția, desigur, că tipul căutat există, în general, în natură. Pentru microorganismele foarte specializate, este deosebit de ușor să se creeze condiții elective. Astfel, mediul mineral care nu conține azot legat, în lumina strict selectiv pentru „algele albastre-verzi, fixarea N2. În cazul în care același mediu suplimentat cu o sursă organică de energie și carbon, apoi pe ea, în întuneric, în condiții aerobe se vor dezvolta Azotobacter, și excluderea acces la aer -. Clostridium doresc să se limiteze numai îndeplinirea cerințelor minime ale microorganismului care doresc să aloce pentru a obține cu succes culturi de îmbogățire Dacă de pildă, doresc să izoleze bacterii capabile de oxidare metan. nitrat de odorod sau sulfat ca acceptor de hidrogen, este necesar să se aibă grijă de excluderea oxigenului, sau va domina formă aerob, oxidarea metan sau hidrogen. Pentru selecția se poate utiliza, de asemenea, rezistența sau toleranța microorganismelor la acizi și baze, la temperaturi ridicate de radiație la foc. Deseori împreună cu selecția "pozitivă", se efectuează o selecție "negativă", utilizând inhibitori selectivi. Pe un mediu nutritiv care conține azide, de exemplu, bacteriile de acid lactic cresc în condiții aerobe, în timp ce creșterea altor microorganisme aerobe este suprimată. Azidul, cianura și H2S au un efect selectiv asupra acelor organisme aerobe în respirație de care participă citocromii. În domeniul diagnosticului medical sunt supresia selective pentru detectarea Corynebacterium diphtheriae (utilizarea mediilor de cultură conținând Telurit) și Enterobacteriaceae patogen (mediu agar cu bismut adăugat). Inoculumul poate fi prezent cu diferite tulpini de același tip de metabolism, care diferă unul de altul numai puțin, de exemplu, numai la valoarea pH-ului optim sau rata de creștere. În cazul în care pentru cultură lot să folosească un astfel de material, dominantă va fi cea mai adaptată la condițiile și tulpina cea mai rapidă creștere, toate celelalte vor fi suprimate și nu pot fi distinse. Prin urmare, în acele cazuri în care doresc să se izoleze numărul maxim de tulpini care cresc în anumite condiții elective, cultura ar trebui să fie efectuată direct în cupe. Pe medii elective dense, tulpini care conduc la condițiile care formează colonii. Cu o distanță suficient de mare între colonii, concurența pentru nutrienți nu poate avea loc; tulpinile care cresc mai încet nu sunt suprimate prin creșterea mai rapidă, astfel încât ambele pot fi separate separat. Acest tabel de revizuire combină datele privind obținerea culturilor acumulate în microorganisme cu diferite tipuri de metabolism. O cultură pură a microorganismului (ultima etapă de izolare) este de obicei obținută de un mediu nutritiv dens (sau în). Procedura începe cu separarea de populația de celule dintr-o singură celulă. O cerință obligatorie este că colonia care iese din celulă trebuie să rămână izolată de alte celule sau colonii. bacterii aerobe sunt recuperate, fie prin metoda lui Koch - cernerea suprafeței de suspensie a mediului în vasele, sau, mai ușor, patare o picătură dintr-o buclă de platină pe mediu agar. Bacteriile anaerobe sunt suspendate în agar topit la o temperatură de 45 ° C și incubate fără acces la aer. Separarea atentă o colonie, resuspendare în frotiu lichid și reaplicarea sau diluare cu agar permite obținerea unor culturi pure de cele mai multe microorganisme.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: