Compoziția materialelor nutritive - stadopedia

Determinarea compoziției mediului nutritiv presupune luarea în considerare a unor factori biofizici precum pH-ul mediului, temperatura, aprovizionarea și îndepărtarea oxigenului molecular, care sunt critice pentru creșterea oricărei culturi bacteriene. Temperatura, aerarea și presiunea sunt determinate de condițiile de cultivare, potențialul de reducere a oxidării depinde atât de compoziția mediului de creștere, cât și de condițiile de cultivare. Controlul potențialului de reducere a oxidării este deosebit de important în cultivarea bacteriilor obligatorii-anaerobe.







Gelatina este un produs acid conținând azot, extras de oase și cartilaje. Plăcile de gel introduse în practica microbiologică de SN Vinogradsky sunt, de asemenea, utilizate pe scară largă ca medii nutritive dense. Pentru cultivarea microorganismelor care utilizează forme organice de azot, se folosesc adesea medii de peptonă din carne: bulion peptonă de carne, peptonă de carne și peptonă și gelatină de peptonă din carne.

Metil-peptonă bulion (MPB). Pentru prepararea presei din carne peptonelor utilizate bulion, care a fost preparat după cum urmează: 500 g de fin tăiat de carne proaspătă, fără oase, grăsime și tendonul turnat într-un email tigaie 1 litru de apă de la robinet încălzită la 50 ° C și se lasă să se infuzeze timp de 12 ore la temperatura camerei sau 1 oră la 50-55 ° C. Carnea stors, extractul este filtrat printr-un tifon cu un strat de vată, fiert timp de 30 minute pentru coagularea proteinelor coloidale și filtrat de două ori (prima dată printr-un tifon de bumbac, al doilea - printr-un filtru de hârtie). Filtru completat cu apă până la 1 L, turnat în balon, sigilate cu dopuri de bumbac și sterilizate la 120 ° C timp de 20 minute (Plosca tub închis la capacele superioare ale hârtiei). Conectorii din bumbac trebuie să fie strânși, deoarece sunt un filtru care împiedică pătrunderea bacteriilor din aer după sterilizare. Extracția de carne poate fi utilizată în orice moment pentru a pregăti mediile corespunzătoare. Dacă acestea sunt pregătite imediat, atunci sterilizarea preliminară nu este necesară. Adesea, în laborator, infuzia de carne se fierbe împreună cu carnea și apoi se strânge carnea. Broto este de bună calitate. Dacă se dorește să aibă o carne nutritivă foarte mare bulion de carne în timpul perfuziei se adaugă apă și se acidulează ușor pepsină bulion cu acid clorhidric. Pepsinul hidrolizează suplimentar compușii proteici ai cărnii, iar cantitatea de nutrienți absorbită de bacterii crește. Carnea poate fi înlocuită cu extract de carne, luându-i 5 g pe 1 litru de mediu.

Pentru prepararea bulion de carne-peptona la 1 litru de bulion s-a adăugat 5,10 g de peptonă (peptonă - primul produs de hidroliză proteină cu o greutate moleculară mare), pentru a crește conținutul caloric al mediului, și 5 g de clorură de sodiu, în scopul de a crea o activitate osmotică. Mediul este încălzit până când peptonul este dizolvat, amestecând constant. Apoi, să stabilească un mediu de reacție neutră sau ușor alcalină, izvorate soluție NagCOa 20% (până la umed roșu albăstreală pentru rufe hârtie de turnesol, fenolftaleina cu încă arată alcalină - adăugându-l la mediu într-o culoare roz antena porțelan nu este detectat). Este convenabil să utilizați indicatorul bromotimolblau. 1-2 picături din aceasta sunt făcute cu o tijă de sticlă într-o ceașcă de porțelan și se adaugă o picătură de bulion. În mediul neutru, bromtimolblau-sticla-verde, în acid-galben, în alcalin-albastru. După stabilirea mediului de reacție se fierbe din nou timp de 5-10 minute și proteine, coagulat prin schimbarea reacția a fost filtrată printr-o hârtie de filtru fără a clarifica bulionul sau clarificate proteine ​​sale. Stropul transparent de carne și peptonă este turnat în eprubete, acoperite cu dopuri din bumbac și sterilizat la 120 ° C timp de 20 de minute.







Agar de peptonă din carne (MPA). La 1 litru de bulion de peptonă din carne se adaugă 15-20 g de agar agar mărunțit. Mediul este încălzit până la dizolvarea agar (temperatura de topire 100 ° C, punctul de toarnă - 40 ° C) este setat mediu de reacție slab alcalină cu soluție 20% Na2COa prin pâlnie și se toarnă în flacoane (10 ml, dar pentru piese turnate în pahare - coloană de agar și 5 ml pentru a produce agar înclinat, înclinat). Când se toarnă agar, este necesar să se urmeze că marginile tubului sunt uscate, în caz contrar, dopurile se lipesc de sticlă. Tuburile cu mediu sunt sterilizate într-o autoclavă la 120 ° C timp de 20 de minute.

Meat-peptonă gelatină (NMP). În 1 litru de bulion de pește-carne, se interferează 100-150 g de gelatină. Punctul de topire depinde de procentajul din mediu. 10% gelatină se topește la 24 ° C, 15% la 25 ° C. Vara, mediul este preparat prin adăugarea de gelatină de 15%. După dizolvarea gelatinei cu încălzire ușoară într-un mediu de reacție ajustat ușor alcalin (ca pentru BCH și IPA), fierte timp de 5 minute, apoi se răcește -până la 40-50 ° C În același timp, albusul de ou este bătut cu o cantitate mică de apă, turnat într-un mediu gelatos răcit, agitat bine și încălzit din nou. Mediul după pierderea proteinelor devine transparent. Se filtrează printr-o pâlnie încălzită distribuită în tuburi și sterilizate prin care curge cazan de abur Koch, mediu încălzind timp de 30 de minute la 24 de ore de 3 ori.

Agar de cartofi. 200 de cartofi de apă purificați și spălați sunt tăiați în felii, se toarnă 1 l de apă de la robinet, se fierbe timp de 30 de minute. Supa se filtrează prin vată de bumbac și se aduce la volumul original. La lichidul rezultat, se adaugă agar de 2%, se fierbe până se dizolvă și se determină reacția neutră a mediului (pH 7,0). Mediul este sterilizat la 1 atm timp de 20 de minute.

Agent agar. Se adaugă 2,5-3% agar la mustul preparat, fiert până se topesc, se filtrează prin vată de bumbac și se sterilizează în același mod ca și o bere.

Lapte cu conținut scăzut de grăsimi. Pentru a pregăti mediile nutritive utilizați laptele degresat, așa-numitul invers (grăsimea din lapte afectează în mod negativ creșterea anumitor microorganisme). Reversul se obține prin separarea laptelui încălzit la 34 ° C. De asemenea, grăsimea poate fi eliminată atunci când laptele este ridicat. Atunci când se sterilizează laptele, trebuie avut în vedere că nu poate fi menținut mult timp într-o autoclavă, deoarece lactoza (zahărul din lapte) conținut în lapte poate fi caramelizată. Laptele degresat este turnat în tuburi sterile și menținut la 115 ° C (presiune 0,5 atm) timp de 15 minute. Înainte de sterilizare, aciditatea întoarcerii nu trebuie să depășească 22 ° Turner, altfel laptele se va curge. După sterilizare, se menține timp de trei zile într-un termostat la 30 ° C pentru a provoca dezvoltarea formelor de spori și a altor forme rezistente la căldură. După 3 zile, fiecare tub de testare cu lapte este examinat și eprubetele în care microorganismele s-au dezvoltat sunt aruncate. Când este sterilizată într-o autoclavă, uneori există o maturare a laptelui datorită caramelizării zahărului din lapte și peptonizării cazeinei. Cu sterilizarea prelungită, un sediment de cazeină cade pe fundul tubului, care poate fi peptonizat parțial. Nu se poate folosi ca mediu un lapte copt supraîncălzit.







Articole similare

Pagina anterioară

Pagina următoare

Trimiteți-le prietenilor: